黑柴胡的薄层色谱鉴别研究

黑柴胡的薄层色谱鉴别研究

黑柴胡是一门不同于波形科的黑柴胡。第二个黑柴胡或小黑胡克。parvifoliumshan等人干燥的根，味道鲜美，性格寒性。具有平肝、提阳的功效。1天津市试剂见表1黑柴胡对照药材由课题组采集于山西6个地区,并经山西药科职业学院中药系堐榜琴教授鉴定,样品:S1山阴,Z2中条山,N1-5宁武,W1五台,L1灵丘,K1苛岚,B北柴胡。试剂:薄层层析硅胶G(MerckKGaA,Germany);薄层层析硅胶G(青岛基亿达硅胶试剂厂);薄层层析硅胶G(青岛海洋化工厂分厂);甲醇(批号:20080901分析纯天津市大茂化学试剂厂);二氯甲烷(批号:20111118分析纯天津市北辰方正试剂厂);乙酸乙酯(批号:20070703分析纯天津市科密欧化学试剂有限公司);氨水(批号:20080421分析纯天津时大茂化学试剂厂);95%乙醇(批号:20110226分析纯天津市北辰方正试剂厂);硫酸(批号:051109分析纯天津市翔宇化工工贸有限责任公司);石油醚(60-90)(批号:20110921分析纯北京化工厂)仪器:KFBW2电子天平(浙江凯丰集团有限公司);WHF-203三用紫外分析仪(上海精科实业有限公司)2方法和结果2.1对照药材溶液2.1.1对照药材溶液的制备取对照药材粉末0.5g,加甲醇20mL,超声处理10min,滤过,滤液浓缩至5mL,作为对照药材溶液。2.1.2供试品溶液的制备取10批不同基源药材各0.5g,加甲醇20mL,超声处理10min,滤过,滤液浓缩至5mL,作为供试品溶液。2.2在薄梯度下研究色度条件薄层鉴别的影响因素包括层析板的种类、展开系统的组成、显色剂等。试验分别对以上影响因素进行了考察,以获得较理想的薄层鉴别条件。2.2.1展开剂的考察采用石油醚(60-90)∶乙酸乙酯(9∶6)、乙酸乙酯∶乙醇∶水(8∶2∶1)、二氯甲烷﹕乙酸乙酯﹕甲醇﹕水(12∶5∶5.8∶2)下层溶液为展开剂,其中以石油醚(60-90)∶乙酸乙酯(9∶6)为展开剂的展开效果最好,所得斑点多、清晰、圆整、分离度好。根据试验结果,采用石油醚(60-90)∶乙酸乙酯(9∶6)为展开剂(见图1~6)。2.2.2点取样量研究2.2.3颜色检测供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点(见图1)。3黑胡基础薄层鉴别测定通过对以上相关薄层色谱图的对比分析,笔者认为,本课题组经过前期的性状鉴定和显微鉴定确定Z2为对照药材之一的判断是合理的,实验具有较高的可重复性,研究最终确定的具体方法为:取黑柴胡药材粉末0.5g,加甲醇20mL,超声处理10min,滤过,滤液浓缩至5mL,作为供试品溶液。同法制备对照药材溶液(由于Z2为中条山采集的小叶黑柴胡,经过前期课题组的性状鉴定和显微鉴定确定Z2为对照药材之一,另外根据前期课题组的性状鉴定和显微鉴定以及薄层鉴别实验,确定N4宁武采集的黑柴胡为黑柴胡对照药材)。按照薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60-90)-乙酸乙酯(9∶6)为展开剂展开,取出,晾干,喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液,在60℃加热3min后,置紫外光灯(365nm)下检视,斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,可显相同颜色的荧光斑点。由此可以确定,该方法简单可行,所得斑点清晰,且分离效果好,重复性好,可用于黑柴胡的定性鉴别。取对照药材粉末0.5g,加甲醇20mL,超声处理10min,滤过,滤液浓缩至5mL,作为供试品溶液。分别吸取2μl、5μl、10μl点于同一薄层板上,以石油醚(60-90)∶乙酸乙酯(9∶6)为展开剂。显色后置于紫外灯下检视,以5μl点样量的斑点最清晰、圆整,故定点样量为5μL(见图6)。喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液,置日光下及紫外光(365nm)灯下检视,个别斑点不清晰(见图7)。后在60℃加热约1min后,置日光下、紫外光灯下检视,个别斑点仍不清晰(见图8)。后在60℃加热约3min后,置日光下检视,个别斑点仍不清晰(见图9);置紫外光(365nm)灯下检视,斑点清晰可见,分离度好(见图1、10、11)。故定显色方法为喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液,在60℃加热3min后,置紫外光(365nm)灯下检视。2.3供试品溶液配制取10批不同基源药材粉末各0.5g,加甲醇20mL,超声处理10min,滤过,滤液浓缩至5mL,作为供试品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部(附录ⅥB)试验,吸取上述3种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60℃~90℃)-乙酸乙酯(9∶6)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液,在60℃加热3min后,置紫外光(365nm)灯下检视。2.4薄层板的展开系统观察在不同厂家生产的薄层板上的层析效果。将相同的供试品溶液和对照药材溶液,分别点样