微生物检验实验室肠球菌属标准操作规程

微生物检验实验室肠球菌属标准操作规程1.概述肠球菌属于1984年从链球菌属划出，单独成为一个菌属，包括粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌、坚韧肠球菌、铅黄肠球菌、蒙氏肠球菌、海氏肠球菌、鹑鸡肠球菌和病臭肠球菌等18个种和1个变异株。临床上常见的菌株为粪肠球菌。2.标本类型血液、尿液、痰、穿刺液、脓液等标本。3.鉴定3.1形态与染色革兰阳性球菌，单个、成双或短链状排列。3.2培养特性在血琼脂平板上形成较小、灰白色，有a溶血或β溶血环的菌落。在麦康凯琼脂平板上形成较小、干燥、粉红色菌落。3.3生化反应触酶试验阴性，分解甘露醇、山梨醇、胆汁七叶苷试验阳性、在含6.5%氯化钠的肉汤中生长，多数菌株PYR试验阳性，对杆菌肽耐药。3.4鉴别要点3.4.1本菌特征革兰阳性球菌，触酶试验阴性，在65g/L氯化钠中生长，胆汁、七叶苷试验阳性，45℃中生长。3.4.2与屎肠球菌的鉴别：粪肠球菌不分解阿拉伯糖，而屎肠球菌能分解阿拉伯糖3.4.3与链球菌属和乳球菌属的鉴别：见表5-353.4.4粪肠球菌与其他各主要菌种间的鉴别：见表5-36操作步骤3.5.1触酶试验阳性参见触酶试验标准操作规程3.5.2鉴定从血平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。4.药敏参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSIM100-S20最新版本文件.5.质量控制参见《质量控制程序》6.检验结果解释与分析在β-内酰胺酶阴性球菌肠球菌中，氨苄西林药敏试验结果可预测阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等敏感性。青霉素药敏试验可预测氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等药敏结果。粪肠球菌中氨苄西林药敏结果可以预测亚胺培南的药敏结果。对于血培养和脑脊液中分离到的肠球菌，需做β-内酰胺酶检测，β-内酰胺酶阳性，则对青霉素、羧基青霉素和脲基青霉素均耐药。为耐万古霉素肠球菌做氯霉素、红霉素、四环素和利福平药敏试验，根据结果进行治疗。氨基糖苷类高水平耐药株HLRA可用庆大霉素120ug/片和链霉素300ug/片筛选，无抑菌环为耐药，抑菌环≥10mm为非HLAR，对于抑菌环在7～9mm之间的菌株需用稀释法确认。对于肠球菌属，头孢菌素类、氨基糖苷类（仅筛选高水平耐药性）、磺胺甲恶唑、甲氧苄啶和克林霉素在体外可能有活性（敏感），但在临床上耐药，所以不能报告肠球菌对这些药物敏感。表5-35属常见菌种的生物学特性菌种甘露山梨山梨精氨阿拉棉子蔗核动色丙酮醇醇糖酸伯糖糖糖糖力素酸盐组1鸟肠球菌+++-+-++--+假鸟肠球菌+++--+++--+棉子糖肠球菌+++-++++--+病臭肠球菌+++---++--+组2粪肠球菌++-+--++--+屎肠球菌+--++-++---卡氏黄色肠球菌+--+++++++-蒙氏肠球菌+--+++++-+-铅黄肠球菌+--++++-++-鹑肠球菌+--++++++--组4坚韧肠球菌---+---ND---海氏肠球菌---+-++ND---不称肠球菌---+-++ND--+粪肠球菌变异株---+---ND--+硫磺色肠球菌-----+++-+-表5-肠球菌属、链球菌属和乳球菌属细菌的生物学特性试验肠球菌属链球菌属乳球菌属胆汁七叶苷+-+65g/L氯化钠中生长+-VPYR+-+45℃生长+--注：“+”为90%以上菌株阳性，“-”为90%以上菌株阴性，“V”为11%~89%菌株阳性。7.临床意义粪肠球主要引起感染，最常见为尿道感染，其中大部分与尿道器械操作、导尿等有关；其次为腹部和盆腔等部位的创伤和外科术后感染。近年来，肠球菌属氨苄青霉素耐药株和庆大霉素高耐药株逐渐增多，耐万古霉素的肠球道菌国外也有较多报道，已使肠球菌所致重症感染的治疗成为临床棘手问题。8.鉴定流程菌落观察：较小、灰白色、a溶血或菌落观察：较小、灰白色、a溶血或β溶血触酶试验-+棉子糖-+精氨酸-+阿拉伯糖-+蔗糖-涂片染色：G+球菌，单个、成双或短链排列+丙酮酸-+甘露醇-孤立肠球菌棉子糖肠球菌鸟肠球菌异味肠球菌+丙酮酸-粪变种+阿拉伯糖-屎肠球菌+动力-+色素-曼特肠球菌坚韧肠球菌肠道肠球菌铅黄肠球菌+动力-母鸡肠球菌参考文献[1]中国合格评定国家认可委员会.CNAS-GL23；2008医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的指南.2008[2]周庭银编著.《临床微生物学诊断与图解》.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[3]叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第三版.南京：东南大学出版社，2006[4]MurrayPR.Manual