携带ndm-1阴沟肠杆菌的临床检测及其耐药机制

携带ndm-1阴沟肠杆菌的临床检测及其耐药机制

细菌也被称为新修订的金属-1胺男性酶1（新修订的金属-1，bla-1）或ndt-1，简称nd-1。这也被称为“超级细菌”。这种超细胞通常攻击所有重症感染的抗生素，包括碳青霉（colino）-内酰胺类抗生素，具有很高的抗药性，引起了世界范围的关注。1一般数据和方法1.1排尿管及局部培养菌株来源及病例简介:陈宝X,男,83岁,汉族,河北省保定市人,企业退休,糖尿病肾病、乙肝、肝硬化失代偿期、2011年确诊原发性肝癌晚期,在保定市某社区医院住院8个月余,期间间断性使用抗生素Ⅰ联-Ⅲ联不等,后因病情恶化(发热、昏迷)转入河北大学附属医院消化科住院。患者转院过程中即带有锁骨静脉插管和尿道插管,在转院过程中导尿管脱落,因患者睾丸及尿道口过于肿大,入院后请泌尿外科医师会诊并行导尿管植入术,同时留取尿液细菌培养,连续3次均培养出包括亚胺培南、美罗培南耐药的泛耐药阴沟肠杆菌。入院21d终因年老、体弱、恶性肿瘤伴糖尿病肾病等疾病导致多器官衰竭病故。1.2细菌鉴定及pcr扩增vitek生化鉴定条(法国生物梅里埃公司);美国BDPHOENIX-100全自动细菌鉴定药敏仪;PCR扩增仪(美国BIO-RAD公司);PCR试剂(上海生物工程有限公司);高速冷冻离心机(美国Thermo公司);DNA提取试剂盒(北京天根生化科技有限公司)。1.3方法1.3.1药物敏感测试采用WHO推荐的K-B纸片扩散法1.3.2美罗培南胶片实验将0.5麦氏单位的大肠埃希菌ATCC25922菌液1∶10稀释后均匀涂布在MH平皿上,中间贴美罗培南纸片,将实验菌株以美罗培南纸片为起点,沿离心方向划线,35℃培养过夜,抑菌圈内呈现出矢状者为阳性。肺炎克雷伯菌ATCCBAA1705作为阳性对照,ATCCBAA1706作为阴性对照。1.3.3金属酶检测试验阴沟肠杆菌配成0.5麦氏单位的菌液,均匀涂布于MH平板上,平板上分贴2片美罗培南(10μg)纸片,并在其中一片美罗培南纸片上滴加EDTA(0.5μmol)10μL,35℃孵育18h,观察各纸片抑菌环大小,如果加酶抑制剂与不加酶抑制剂的抑菌环直径相差大于5mm为金属酶实验阳性。1.3.4内酰胺酶基因及外膜蛋白基因的pcr检测分别用blaIMP、blaVIM、blaNDM、blaKPC、blaCTX-M等β内酰胺酶基因及外膜蛋白基因进行PCR扩增(表1)。1.3.5序列与序列比比较PCR扩增产物由上海生物工程公司纯化后双向测序,序列经BLAST比对分析,以明确基因型。2结果2.1抗菌药物检测该株菌对所有检测的β-内酰胺类抗生素、加酶抑制剂类抗生素、四环素类、磺胺类及氯霉素类等多种抗生素均显示耐药,对氨基糖苷类抗生素中阿米卡星敏感,喹诺酮类抗生素中左旋氧氟沙星敏感。2.2碳绿霉酶筛选试验改良Hodge实验结果显示阳性,金属酶表型初筛试验检测阳性。2.3ldwell染色结果NDM-1基因的核心序列PCR扩增后,PCR产物经琼脂糖凝胶电泳分离,Goldview染色后用凝胶成像系统观察结果,显示核心序列为阳性,结果见图1,与Genbank比对有99.99%的相似性。比对结果见图2。blaIMP、blaVIM、blaKPC、blaCTX-M和OMPK36基因检测均为阴性。3讨论3.1携带nd-1菌株的感染国内分布近年来,携带NDM-1的多重耐药菌是倍受全球关注的公共卫生问题之一。在中国也陆续出现携带NDM-1菌株的感染报道,这些菌株出现的地理位置分布涵盖了中国的东、南和西部,地域分布的跨度比较大,并以肠杆菌科细菌为主,如肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌等3.2多重耐药菌发生或感染时,个体免疫功能的缺失,是造成多重耐药菌感染发生的重要危险因素之一回顾分析本感染病例不难得出,年老、体弱,恶性肿瘤,尤其恶肿治疗削弱了人体免疫系统,且各种导管的使用使得细菌进入血液循环的机会大大增加,个体免疫功能的缺失,侵袭性导尿管的应用和抗生素的不规范使用等都是诱发多重耐药菌产生甚至感染发生的重要危险因素,因此,对患者进行相应的操作时,必须明确指征,及时拔管;同时必要的行政手段和专题讲座,