生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定

【试验一】生物组织中复原糖、脂肪、蛋白质的鉴定一、教学目的初步把握鉴定生物组织中复原糖、脂肪、蛋白质的根本方法。二、教学建议教材中本试验安排为验证性试验，有条件的学校可以改为探究性试验，安排在讲课之前，或与讲课同步进展。本试验难度并不大，但内容较多，试验时间较长，因此，必需作周密安排，才能按时完成。试验中应留意以下几点。增设教师演示试验。上课之前，教师应当预备好做演示试验所需的试验材料、用具、仪器和试剂等。同时，逐项完成复原糖、脂肪、蛋白质3类有机物的鉴定试验。在试验课上，将3个试验的正确结果分别展现在讲台上，并作扼要的介绍，以便使学生将自己的试验结果与教师的演示试验作比较。“复原糖的鉴定”“脂肪的鉴定”试验中，一个学生制作临时装片时，另一个学生则可以调试显微镜。另外，在完成前两个试验时，一个学生洗刷试管、清洗玻片和整理显微镜，另一个学生则可以进展后一个试验的操作。盛开水的大烧杯中加热。留意试管底部不要接触烧杯底部，同时试管口不要朝向试验者，以免试管内溶液沸腾时冲出试管，造成烫伤。假设试管内溶液过于沸腾，可以上提试管夹，使试管底部离开大烧杯中的开水。样液的颜色变化作比照，这样可以增加说服力。斐林试剂的甲液和乙液混合均匀前方可使用，切勿将甲液和乙液分别参加组织样液中。三、参考资料芽糖。它们的分子内都含有复原性基团〔游离醛基或游离酮基的分子内没有游离的半缩醛羟基，因此叫做非复原性糖，不具有复原性。本试验中，用斐林试剂只能检验生物组织中复原糖存在与否，而不能鉴定非复原性糖。斐林试剂由质量浓度为0.1g／mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05 g／mL的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，马上生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与参加的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的Cu2O沉淀，而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖酸。其反响式如下：CH2OH—(CHOH)4—CHO＋2Cu(OH)2→CH2OH—(CHOH)4—COOH＋Cu2O↓＋2H2O用斐林试剂鉴定复原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色棕色砖红色(沉淀)。0.1g／mL0.01g／mL的硫酸铜溶液。在碱性溶液(NaOH)中，双缩脲(H2NOC—NH—CONH2)能与Cu2+作用，形成紫色或紫红色的络合物，这个反响叫做双缩脲反响。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲构造相像的肽键，因此，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色反响。用于鉴定复原糖的试验材料预备植物组织是常用的试验材料，但必需加以选择。在双子叶植物中，光合作用的主要产物葡萄糖形成后，合成为淀粉，临时贮存在叶子内，因此最好不用双子叶植物的叶子作试验材料。有些单子叶植物，如韭菜、鸢尾，并不将光合作用的初始产物转变为淀粉，因此叶内含有大量的可溶性单糖，但是，由于叶片中叶绿素的颜色较深，对于鉴定时的颜色反响起着掩盖作用，导致试验现象不明显，因此，也不宜用单子叶植物的叶子作试验材料。本试验最抱负的试验材料是复原糖含量较高的植物组织(或器官近于白色的，如苹果和梨的果实。经试验比较，颜色反响的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。用于鉴定脂肪的试验材料预备试验材料最好选择富含脂肪的种子，如花生种子(取其子叶)。供试验用的花生种子，必需提前浸泡3～4h。浸泡时间短了，不简洁切成片；浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成形。做鉴定脂肪的试验，教师可依据本地区的状况选用苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液。苏丹Ⅲ染液遇脂肪的颜色反响为橘黄色，苏丹Ⅳ染液遇脂肪的颜色反响为红色。因苏丹Ⅳ染液与脂肪的亲和力比较强，所以，染色的时间应比较短，一般为1min左右。用于鉴定蛋白质的试验材料预备试验材料最好选用富含蛋白质的生物组织(或器官)，植(卵白)。如用大豆种子，必需提前浸泡1～2d，这样简洁研磨成浆。有条件的学校，可以直接承受现成的大豆磨成的豆浆，豆浆可以购置，也可用小型的研磨机制取。利用豆浆作试验材料，可以节约试验时间。假设用稀释的卵白作试验材料，效果会更好。斐林试剂的配制0.1g／mL的氢氧化钠溶液0.05g／mL的硫酸铜溶液4～52mL甲液中，配完后马上使用。苏丹Ⅲ溶液的配制称取0.1g100mL95%的酒精中，待全部溶解后再使用。苏丹Ⅳ溶液的配制称取0.1g苏丹Ⅳ干粉，溶于50mL丙酮中，再参加体积分数为70%50mL，充分混合后即可使用。双缩脲试剂的配制取10g〔或有刻度的烧杯100mL，0.1g／mL的氢氧化钠溶液，瓶口塞上胶塞，贴上标签，写上试剂A。1g硫酸铜放入容量瓶〔或有刻度的烧杯〕中，加水至100mL，待充分溶解后倒入0.01g／mL的硫酸铜溶液(蓝色)。瓶口塞上胶塞，贴上标签，写上试剂B。试验一可溶性复原糖脂肪蛋白质的鉴定一、解读两纲识记鉴定试验所用的材料，懂得选材的要求。把握试验原理、步骤，理解试验目的、方法。明确观看对象，正确说出鉴定过程中样液的颜色变化，并能用准确的语言解释试验现象，作出试验结论。能娴熟制作徒手切片，临时装片和使用低倍显微镜，了解高倍显微镜的使用方法。具备验证相关生物学事实的力量，并能对试验现象和结果进展解释、分析和处理；能对一些生物学问题进展初步的探究性争论。二、高考热线题型以选择题为主，也可能以简答题消灭，重点是以比照的方式考察相关试验的异同点。以教材试验为依据，设置试验设计题是今后考察的重点，如“设计试验证明淀粉酶是蛋白质”3的原理和步骤。三、学法教导运用比照的方法生疏三种物质的鉴定原理、过程及留意事项。比照三种物质鉴定过程中的一样点和不同点，重点把握试剂使用上的区分。依据所学的原理鉴定类似物质，设计相应的试验程序。四、教材梳理〔一〕试验原理生物组织中含有可溶性复原糖〔如 、 、 、脂肪、蛋白质等化学成分，可分别与某些化学试剂作用产生特定的 。(1)可溶性复原糖+ 试剂—→砖红色沉淀可溶性复原糖+班氏糖定性试剂—→ (2)脂肪+ 染液—→染成橘黄色脂肪+苏丹Ⅳ染液———————→染成 (3)蛋白质+ 试剂—→溶液呈紫色(二)试验目的1.初步把握鉴定可溶性复原糖、脂肪、蛋白质的根本方法。(三)试验材料(四)方法步骤可溶性复原糖的鉴定制备组织样液：苹果切块、研磨、 。鉴定组织样液1支试+2mL +2mL 振荡试管〔溶 ? 2min左右，观看溶液颜色变化 色棕→ 色。脂肪的鉴定切片制作：用花生子叶作徒手切片。染色：1块载玻片+切片+3滴 染液，3min后吸去染液+2滴50% 溶液去浮色，吸去后+2滴 ，盖盖玻片。镜检鉴定先用低倍镜观看找到子叶最薄处再用高倍镜观看〔圆形的脂肪颗粒为 色。蛋白质的鉴定制备样液：大豆切片、 、 。鉴定1支试+2mL黄豆组织样+2mL 振荡试〔溶 色，+4滴 试管观看溶液颜色变化〔 色→ 色→ 色。〔五〕结论与争论结论：从斐林试剂与苹果样液作用、苏丹III染液与花生种子作用、双缩脲试剂与大豆样液 作 用 的 颜 色 变 化 可 以 得 出 ：。自我校对原理：葡萄糖果糖麦芽糖颜色反响斐林砖红色沉淀苏丹III红色双缩脲步骤：过滤苹果组织样液刚配制的斐林试剂淡蓝水浴加热淡蓝砖红苏丹III酒精蒸馏水橘黄过滤双缩脲试剂A乳白双缩脲试剂B乳白紫色结论与争论：苹果、花生种子和大豆中分别含有可溶复原糖、脂肪和蛋白质化合物固有颜色砖红紫色脂肪蛋白质争论鉴定依据。由于某些化学试剂与生物组织中的有关 发生肯定的化学反响，产生有固定颜色的化合物。故可依据待检物与某些化学试剂反响的 ,如橘黄色、 色、 色等，鉴定生物组织中含有 、可溶复原糖和 。五、疑难精析1．生物组织中的复原糖是指分子构造中含有复原性基团(如游离醛基或酮基)的糖，如葡萄糖、麦芽糖、果糖，淀粉、蔗糖不具有复原性，斐林试剂只能检验可溶性复原糖的存在，而不能鉴定可溶性非复原糖或不溶性糖。2．可溶性复原糖鉴定试验的选材原则。选用可溶性复原糖含量较高的生物组织，而且组织的颜色较浅，或近于白色。常用的植物组织是：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。双子叶植物光合作用的主要产物为淀粉，其叶不抱负。有些单子叶植物，如韭菜、鸢尾等，其叶内含作试验材料。3．可溶性复原糖鉴定试验的关键性的步骤在于斐林试剂现用现配及用量。很不稳定，故应将组成斐林试剂的甲液(0.1g／mLNaOH溶液)和乙液(0.05g／mLCuS04溶液)分别配4～52mL甲液中，配完混合均匀后[得到淡蓝色的Cu(OH)2沉淀的悬浊液]Cu(OH)2CuO沉淀。而临时混合所得斐林试剂马上用于试验，即可使Cu(OH)2作氧化剂与可溶性复原糖发生氧化-Cu2O沉淀。溶液的变化过程：淡蓝色→棕色→砖红色沉淀。4．在可溶性复原糖的鉴定中，在对盛有组织样液与斐林试剂混合物的试管直接用酒精灯加热易杯底部，试管口不要朝向试验者，以免溶液沸腾时冲出试管造成烫伤。5．双缩脲试剂并不是双缩脲分子。所谓双缩脲是由两分子尿素经脱氨缩合而成的化合物。该化合物在碱性溶液中能与CuSO4反响产生紫色络合物，此反响称双缩脲反响。蛋白质分子中含有不同浓度的CuS04溶液，避开拿错。6．蛋白质鉴定试验中，最好选用富含蛋白质的生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋。其关键性步骤在于先加双缩脲试剂A(0.1g/mLNaOH溶液)再加双缩脲试剂B(0.01g/mLCuSO4溶液)。假设用鸡蛋白稀释液，则浓度不宜过大，以免试验后粘住试管壁，不易洗净。脂肪的鉴定试验中，试验材料最好选用富含脂肪的种子，其关键性步骤在于子叶要削成时装片，易做，效果又好。13：比较工程试剂及成分比较工程试剂及成分原理溶液浓度方法加热与否结果NaOH糖的鉴定斐林NaOHCuSO4试和Cu(OH)2溶液NaOH溶液0.1g/mL，CuS04CuSO4溶液混的浓度为／mL0.05g合，而后马上使用。水浴加热沉淀NaOH的浓度为先参加Na0H溶鉴定NaOHCuSO4和境下的0.1g ／mLCuS04的浓度为CuS04溶液。不需要Cu2+紫色O.01g／mL(不能过量)本试验为验证性试验，也用留意比照。如在鉴定可溶性复原糖和蛋白质时，鉴定之前需留一局部样液，以便与鉴定后样液颜色变化作比照。1用以下试验材料做特定试验，从理论上讲能否成功?说明依据的道理。用韭菜叶片做可溶性复原糖的鉴定试验；(2)用蓖麻种子做脂肪鉴定试验；(3)用卵白做蛋白质鉴定试验。[解析]此题是要求依据课本试验原理进展拓展和应用，这也是近几年高考的一个趋势。韭菜在进展光合作用时并不能将光合作用的产物葡萄糖转变成淀粉复原糖，但是，由于叶片中叶绿素含量较多，绿色较深，对于鉴定时的颜色反响起着掩盖作论上说是可行的。答案：(1)用韭菜叶片做复原糖试验不能成功，由于叶片内虽然含有大量可溶性复原糖，但叶片中叶绿素含量较多，颜色较深，对鉴定时的颜色反响起着遮盖作用；(2)假设用蓖麻种子做徒手切片；(3)由于卵白中含有大量的蛋白质，从理论上讲做蛋白质鉴定试验是会成功的。六、趁热打铁〔一〕选择题1．将面团包在纱布中在清水中搓洗，鉴定黏留在纱布上的黏稠物质和洗出的白浆用的试剂分别是( )A.碘液、苏丹Ⅲ溶液 B．双缩脲试剂、碘液C.亚甲基蓝溶液、苏丹Ⅲ D．碘液、斐林试剂蛋白质的鉴定时，事先留出一些黄豆组织样液的目的是 ( )与反响后混合液的颜色做比照B．失败后重做一遍C.鉴定可溶性复原糖用 D.留下次试验用用斐林试剂鉴定可溶性复原糖时，溶液的颜色变化过程为 ( )浅蓝色→棕色→砖红色 B．无色→浅蓝色→棕色C.砖红色→浅蓝色→棕色 D.棕色→绿色→无色在鉴定可溶性糖的试验中，对试管中的溶液进展加热时，操作不正确的选项是( )将这支试管放进盛开水的大烧杯中B．试管底部不要触及烧杯底部C.试管口不要朝向试验者 D.试管底部紧贴烧杯底部5．现有如下试验材料：①西瓜汁②菜籽③豆浆④草莓果实⑤花生仁⑥鸡蛋清，它们与斐林试剂作用呈砖红色与苏丹Ⅲ试剂作用呈橘黄色与双缩脲试剂作用呈紫色的试验材料分别为( )A.①④、②⑤、⑤⑥ B．①④、②⑤、③⑥C.①④、②③、⑤⑥ D．②④、③⑤、③⑥青苹果汁遇碘液显兰色，熟苹果汁能与斐林试剂作用产生砖红色沉淀，这说( )青苹果汁含有淀粉，不含有糖类B．熟苹果汁含有糖类，不含有淀粉C．苹果成熟时，淀粉水解成单糖 D.苹果成熟时，单糖合成淀粉以下关于生物组织中三大有机物的鉴定操作步骤，正确的选项是 ( )用于鉴定可溶性复原糖的斐林试剂，可直接用于蛋白质的鉴定脂肪的鉴定需要用显微镜才能看到被染成橘黄色脂肪滴鉴定可溶性复原糖时，要参加斐林试剂甲液摇均后再参加乙液用于鉴定蛋白质的双缩脲试剂A液与B液要混合均匀后，再参加含样品的试管中，且必需现配现用8．某同学在显微镜下观看被苏丹Ⅲ染液染色后的花生种子子叶切片，当转动细准焦螺旋调焦距时，有一局部细胞看得很清楚，另一局部细胞较模糊，这是由于 〔 〕A.反光镜没调好 B．标本切得厚薄不均匀C.显微镜物镜损坏 D．细准焦螺旋未调好9．可溶性复原糖的鉴定中，制备生物组织样液时参加少许石英砂，其目的( A.研磨充分B.防止糖被破坏C．防止反响D.无作用在过氧化氢酶溶液中参加双缩脲试剂，其结果应是 〔 〕A.产生气泡B.溶液呈紫色C.溶液呈蓝色D.产生砖红色沉淀双缩脲试剂可以鉴定蛋白质是由于 〔 〕A.蛋白质都有肽键 B.蛋白质都有氨基酸C.蛋白质都有羧基 D.蛋白质都有氨基12.(多项选择)以下物质用斐林试剂检测时可能消灭砖红色沉淀的是 ( A.葡萄糖 B．果糖 C．麦芽糖 D．淀粉13.(多项选择)以下各组中前项为所鉴定的物质中项为所使用试剂后项为所产生的颜色正确的选项是( )A.葡萄糖、斐林试剂、橘黄色B.脂肪、苏丹Ⅲ染液、砖红色C.蛋白质、双缩脲试剂、紫色D.淀粉、碘液、蓝色二、非选择题各种可供试验的材料做“”试验时，需依据试验需要选择不同的试验材料。请依据下表所列各种材料答复以下问题：各种可供