自身免疫抗体检测及临床意义课件

自身免疫抗体检测及临床意义电力医院：马林1自身免疫抗体检测及临床意义电力医院：马林1抗核抗体（ANA）检测与临床应用2抗核抗体（ANA）2ANA的靶抗原分布：细胞核整个细胞，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等。ENA：抗可提取核抗原，包括RNP/Sm,

Sm,

SS-A,

SS-B,

Scl-70和Jo-1等

六种靶抗原

抗核抗体的定义传统定义：针对细胞核成分的自身抗体的总称。广义定义：针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对ANA的理

解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗体的总称3ANA的靶抗原分布：细胞核整个细胞，包括细胞核、细胞浆、细胞

ANA可见于多种疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组织病的诊断、病情判断和疗效观察的指标高滴度ANA则高度提示自身免疫性疾病在非结缔组织病中也可出现阳性；正常人中（特别是老年人）也可出现阳性，但滴度低目前，ANA检测已成为临床上的一个极重要的自身免疫病的筛查实验。ANA检测的临床意义4ANA可见于多种疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔ANA检测的临床意义

系统性红斑狼疮

活动期

非活动期

药物诱导的红斑狼疮混合性结缔组织病（MCTD、Sharp综合征）

类风湿性关节炎

进行性系统性硬化症

多发性肌炎及皮肌炎

干燥综合征

慢性活动性肝炎

溃疡性结肠炎

其它风湿病

正常人95－10080－10010010020－4020－5085－9530－5070－8030－40265-105ANA检测的临床意义 活动期95－1005美国风湿学会(ACR)立场声明•HEp-2细胞包含大约100至150种自身抗原•其它初筛方法仅具有少量自身抗原…大约35%

SLE患者和IFT-ANA阳性患者在其它初筛实验中为阴性结果…建议：•

IIFT-ANA仍然为ANA检测的金标准•医院或商业诊断所应用其它ANA检测方法时，必须要求为临床大夫提供足够的数据证明其它ANA检测方法与IFT比较具有同样或更高的敏感度和特异性•实验室在ANA报告当中必须注明ANA检测方法6美国风湿学会(ACR)立场声明•HEp-2细胞包含大约1EUROIMMUNANA筛查:间接免疫荧光法(IFT)抗原谱完整(细胞核、细胞浆)检测ANA的金标准，具有很高的敏感性和特异性基质组合:

HEp-2细胞+灵长类肝7EUROIMMUNANA筛查:间接免疫荧光法(IFT)抗HEp-2细胞:筛查不同的自身抗体

均质型核膜型

核点型核糖体P蛋白着丝点型

AMA

核仁型高尔基体Scl-70溶酶体

Sm/RNP肌动蛋白SS-A/SS-B

波形蛋白8HEp-2细胞:筛查不同的自身抗体 均质型 核点型着丝点型系统性红斑狼疮

(SLE)ANCA

相关性血管炎慢性炎症性结缔组织病

(CICTD)

干燥综合征

(SS)

Systemischer

LupusErythematodes

(SLE)

dsDNA系统性硬化症

(SSc)

Scl

-70

and

CenpB

SS-A

and

SS-B

慢性炎症性结缔组织病

(CICTD)多肌炎/皮肌炎

(PM/DM)

Myositis

Profile

夏普综合征

(MCTD)

RNP

Rheumatoide

Arthritis

(RA)EUROIMMUN9系统性红斑狼疮(SLE)ANCA相关性血管炎慢性炎症性结系统性红斑狼疮(SLE)红斑狼疮的特点临床医生:容易误诊的一类致死性疾病免疫学家:所有免疫系统的要件均参与致病机理产生过程临床发病特点发病率:

40/100,000(北欧);200/100,000(黑人);250,000

(美国)患者寿命:4年/50%(1950);

15/80%(当前);

20岁诊断/35岁死亡几率1:610系统性红斑狼疮(SLE)红斑狼疮的特点临床医生:以上受累;96%)EUROIMMUNSLE

–各器官的表现关节炎(至少2个关节血液系统受累(贫血等;

60%)狼疮肾炎(51%)浆膜炎(胸膜炎,心包炎;

77%)神经系统受累(30%)皮肤(蝴蝶状皮疹,盘状狼疮;

74%)11以上受累;96%)EUROIMMUNSLE–各器官的表现系统性红斑狼疮(SLE)

代表性的抗体抗dsDNA抗体抗核小体抗体抗Sm抗体抗核糖体P蛋白抗体30-90%50-95%

5-10%

5-15%

EUROIMMUN12系统性红斑狼疮(SLE)抗dsDNA抗体30-90%12EUROIMMUN

核均质型HEp-2细胞/猴肝HEp-2细胞猴肝13EUROIMMUN 核均质型HEp-2细胞猴肝13

抗dsDNA抗体-检测方法:

IIFT,

Farr-法(RIA),

ELISA

or

Blot

IIFT

dsDNAHEp-2细胞绿蝇短膜虫

14 抗dsDNA抗体HEp-2细胞绿蝇短膜虫14高度特异性抗体;

70%患者阳性，0.5%正常人或RA患者阳性滴度与疾病活动性相关，但不适用于所有患者抗体滴度上升但临床症状不明显的患者，抗体检测后5年内80%患者进入活动期抗dsDNA抗体与SLE15高度特异性抗体;70%患者阳性，0.5%正常最新版“Autoantibodies”描述不同实验方法的结果并无可比性：1、抗原来源不同；2、抗原展现形式不同；3、实验体系反应条件不同。16最新版“Autoantibodies”描述不同实验方法的结核均质:抗核小体抗体(ANuA)靶抗原:dsDNA-组蛋白-复合物的构象决定簇方法:IIFAELISA,

Blot临床意义:SLE,阳性率50-95%

(特异性100%)17核均质:抗核小体抗体(ANuA)靶抗原:dsDNA-组蛋白-EUROIMMUN

抗核小体ELISA:敏感性、特异性、疾病活动度

ANuA与疾病的活动性相关性强(SLE

DAI

score)

分组

SLE

干燥综合症

皮肌炎/多肌炎

系统性硬化症类风湿/骨关节炎

强直性脊柱炎

健康对照组

特异性

n233

41

40

33

60

20

31225抗核小体阳性

144(61.8%)

1(2.4%)

1(2.5%)

1(3.0%)

1(1.7%)

0

0

98.2%Su

et

al.,

Clin

Immunol

122:

115-120,

200718EUROIMMUN 抗核小体ELISA:ANuA与疾LNTP

(%)

LN(%)CON

(%)

ANuAAnti-dsDNA79431841

933LNTP=lupusnephritisrequiringrenaltransplantation（狼疮肾炎需要肾移植）LN=biopsyprovenlupusnephritis（肾活检确诊为狼疮肾炎）CON=SLEpatientswithoutnephritis（无肾炎SLE患者）伴有狼疮肾炎的严重SLE的生物标记物

ANuA与狼疮性肾炎Stinton

et

al.,

Lupus

15:

394-400,

2007

•狼疮肾炎是SLE的一种潜在的严重并发症(高达50%)

•~

1.2%需要进行肾移植的患者有狼疮肾炎19LNTP LNCON ANuA7918 9LNTP=luEUROIMMUN抗U1-nRNP与Sm抗体HEp-2细胞猴肝20EUROIMMUN抗U1-nRNP与Sm抗体HEp-2细胞猴HEp-2细胞

抗U1-nRNP与Sm抗体抗U1-nRNP/Sm抗体

抗Sm抗体

SLE

抗U1-nRNP抗体

SLE

Sharp综合征

(MCTD)EUROIMMUN21HEp-2细胞 抗U1-nRNP与Sm抗体 (MCTD)21抗U1-nRNP与Sm抗体SLE:

15-40%MCTD:

95-100%

SLE:

5-30%

EUROIMMUN

抗U1-RNP抗体

抗Sm抗体Function:Pre-mRNAsplicing22抗U1-nRNP与Sm抗体SLE:15-40% 抗EUROLINEANA谱最多18种抗原，

增加了RNP亚单位自动化操作全自动化结果判读23EUROLINEANA谱最多18种抗原，自EUROIMMUN实验结果的解释（ANA谱）：

抗U1-nRNP/Sm和Sm抗体抗nRNP/Sm

抗体抗Sm抗体结果解释-?+

-++

--+

-+U1-nRNP:Sm:

-U1-nRNP:Sm:

+U1-nRNP:Sm:

-结果不可靠阴性SLESLE或MCTD无24EUROIMMUN实验结果的解释（ANA谱）：抗nRNP/EUROIMMUN抗核糖体P蛋白抗体HEp-2细胞猴肝25EUROIMMUN抗核糖体P蛋白抗体HEp-2细胞猴肝25

40

S亚单位

60

S亚单位P0P2

P2according

to:

Mahler

et

al.,

J

Mol

Med,

2003抗原:核糖体60S亚单位的3个蛋白：P0,

P1,

P2.在羧基末端有相同的免疫反应表位。核糖体P抗原的五聚体复合物。

P1

P1核糖体

P蛋白26 40S 60SP0P2P2accordingt核糖体P蛋白ELISA:

敏感性和特异性(1)群组SLE其他结缔组织病*健康献血员

n360

79206抗核糖体P蛋白阳性数

34(9.4%)

0%

0%

*系统性硬化症,干燥综合症,皮肌炎/多肌炎对SLE

100%特异

EUROIMMUN27核糖体P蛋白ELISA:群组 n抗核糖体P蛋白阳核糖体P蛋白ELISA:

敏感性和特异性(2)

群组

SLE

MCTD

SS

SSc

RA

HD特异性

n185

21

55

66

89100310抗核糖体P蛋白阳性数

10(5.4%)

0

0

0

0

0

100%

EUROIMMUN28核糖体P蛋白ELISA: 群组 n抗核糖体P蛋白阳EUROIMMUNHEp-2细胞增殖型细胞核抗原

(PCNA)

Hep-2细胞猴肝29EUROIMMUNHEp-2细胞增殖型细胞核抗原(PCNA增殖型细胞核抗原(PCNA)靶抗原:表达为细胞周期依赖性(S-期)三聚体(36

kDa)，是DNA多聚酶的辅因子并参与DNA修复调控检测:IIFT,

Blot临床意义:SLE高特异性(阳性率3-7%),与肾脏和CNS及血小板减少相关30增殖型细胞核抗原(PCNA)靶抗原:表达为细胞周期依赖性(系统性红斑狼疮

(SLE)ANCA

相关性血管炎慢性炎症性结缔组织病

(CICTD)

干燥综合症

(SS)

Systemischer

LupusErythematodes

(SLE)

dsDNA系统性硬化症

(SSc)

Scl

-70

and

CenpB

SS-A

and

SS-B

慢性炎症性结缔组织病

(CICTD)多肌炎/皮肌炎

(PM/DM)

Myositis

Profile

夏普综合症

(MCTD)

RNP

Rheumatoide

Arthritis

(RA)EUROIMMUN31系统性红斑狼疮(SLE)ANCA相关性血管炎慢性炎症性结

干燥综合征（Sjögren’s

Syndrome）外分泌腺受累的自身免疫疾病症状:

-口腔干燥

-唾液及眼泪减少-腮腺肿胀口腔干燥-胰腺外分泌腺分泌不足

腮腺肿胀

EUROIMMUN32 干燥综合征（Sjögren’sSyndrome）-腮干燥综合征

SS-A(60kDa)SS-B(47kDa)40-95%40-95%

代表性抗体33干燥综合征SS-A(60kDa)40-95%代表性抗体3EUROIMMUN抗SS-A/SS-B抗体HEp-2细胞猴肝34EUROIMMUN抗SS-A/SS-B抗体HEp-2细胞猴肝SS-A抗原Boire

et

al.,

1995:

-

Ro-52抗体不与SS-A抗原结合-纯化的SS-A抗原不包含Ro-52RNA

+

SS-A

(60

kDa)

+

Ro-52

hY-RNARNA

+

SS-A

(60

kDa)

hY-RNA35SS-A抗原Boireetal.,1995:-SS-A

(Ro-60),

Ro-52

and

SS-B干燥综合症:40-95%SLE:20-60%新生儿狼疮:抗SS-B抗体干燥综合症:SLE:新生儿狼疮:40-95%10-20%

78%抗Ro-52

(52

kDa)抗体

非特异

EUROIMMUN功能:调控RNA翻译

抗SS-A

(60

kDa)抗体功能:RNA聚合酶III辅助蛋白

96%X36SS-A(Ro-60),Ro-52andSS-B干燥EUROIMMUN抗Ro-52抗体:不同组别中均可出现37EUROIMMUN抗Ro-52抗体:不同组别中均可出现37

抗Ro-52抗体:风湿性疾病中的阳性率疾病干燥综合症系统性硬化症肌炎SLEMCTDRA

n

88

81

26210

21165抗Ro-52抗体阳性

81

%

28

%

31

%

38

%

19

%

5%

抗Ro-52抗体在干燥综合症中阳性率较高，但没有疾病特异性Meyer,

Schlumberger

et

al.,

4th

Asian

Congress

on

Autoimmunity,

Singapore,

Sept.

2009

EUROIMMUN38 抗Ro-52抗体:疾病 n抗Ro-52抗体阳性 抗R

Anti-Ro52:肝脏疾病中的阳性率疾病PBCAIHHBVHCV献血员

n100

60

50

50

50抗Ro-52抗体阳性

27%

35%

10%

22%

0

抗Ro-52抗体没有疾病特异性Meyer,

Schlumberger

et

al.,

4th

Asian

Congress

on

Autoimmunity,

Singapore,

Sept.

2009

39 Anti-Ro52:疾病 n抗Ro-52抗体阳性 系统性红斑狼疮

(SLE)ANCA

相关性血管炎慢性炎症性结缔组织病

(CICTD)

干燥综合症

(SS)

Systemischer

LupusErythematodes

(SLE)

dsDNA系统性硬化症

(SSc)

Scl

-70

and

CenpB

SS-A

and

SS-B

慢性炎症性结缔组织病

(CICTD)多肌炎/皮肌炎

(PM/DM)

Myositis

Profile

夏普综合症

(MCTD)

RNP

Rheumatoide

Arthritis

(RA)EUROIMMUN40系统性红斑狼疮(SLE)ANCA相关性血管炎慢性炎症性结

系统性硬化症(SSc)血管与结缔组织受累的自身免疫疾病症状:

-指端硬化(thin,

sclerotic

fingers)

-爪型手

-面具脸(嘴周边出现皱纹,嘴唇变薄)

-毛细血管扩张(表面血管永久性扩张)

-表皮钙质沉着(血管壁与皮肤钙化)指端硬化，爪型手毛细血管扩张面具脸EUROIMMUN质沉着皮肤钙41 系统性硬化症(SSc)指端硬化，爪型手毛细血管扩张面具EUROIMMUN系统性硬化症实验室结果和临床数据的联合分析，有助于降低疾病诊断的模糊性，同时为未来研究硬化症提供基础。42EUROIMMUN系统性硬化症实验室结果和临床数据的联合分析系统性硬化症(SSc)

代表性抗体抗着丝点抗体抗Scl-70抗体抗原纤维蛋白抗体抗RNA多聚酶抗体抗PM-Scl抗体12-43%18-30%

6-8%

2-23%

1-16%

EUROIMMUN43系统性硬化症(SSc)抗着丝点抗体12-43%43EUROIMMUN

抗着丝点抗体HEp-2细胞/猴肝HEp-2细胞猴肝44EUROIMMUN 抗着丝点抗体HEp-2细胞猴肝44EUROIMMUN抗着丝点抗体靶抗原:着丝点-DNA联合蛋白:

着丝点蛋白(A,

B,

C,

D)检测方法:IIFT,

ELISA,

Blot临床意义:局限性硬皮病(CREST综合症):经常出现在:硬皮病-PBC-重叠综合症45EUROIMMUN抗着丝点抗体靶抗原:着丝点-DNA联合蛋EUROIMMUN

抗Scl-70抗体HEp-2细胞/猴肝HEp-2细胞猴肝46EUROIMMUN 抗Scl-70抗体HEp-2细胞猴肝46细胞核仁:抗Scl-70抗体靶抗原:DNA-拓扑异构酶I

(100

kDa)DNA双螺旋复制和转录检测方法:IIFA,

ELISA,

Blot临床意义:弥散性硬皮病的诊断标志(50-75%).预后:较着丝点阳性的患者病情更严重。47细胞核仁:抗Scl-70抗体靶抗原:DNA-拓扑异构酶I抗着丝点B蛋白抗体与

抗Scl-70抗体系统性硬化症

n

=

295

抗

Scl-70

抗体阳性

阴性抗着丝点

B

蛋白抗体阳性阴性

166106122

59%

系统性硬化症患者分别出现抗着丝点抗体或抗Scl-70抗体阳性

EUROIMMUN48抗着丝点B蛋白抗体与抗Scl-70抗体系统性硬化症 抗SEUROIMMUN抗RNA聚合酶I抗体

HEp-2细胞/猴肝HEp-2细胞猴肝49EUROIMMUN抗RNA聚合酶I抗体HEp-2细胞猴肝49抗原纤维蛋白抗体

HEp-2细胞/猴肝HEp-2细胞

猴肝EUROIMMUN50抗原纤维蛋白抗体HEp-2细胞 猴肝50EUROIMMUN

抗PM-Scl抗体HEp-2细胞/猴肝HEp-2细胞猴肝51EUROIMMUN 抗PM-Scl抗体HEp-2细胞猴肝51抗PM-Scl抗体靶抗原:PM-Scl:

11到16个多肽复合物在rRNA和一些U-snRNAs剪接中起作用(PM-Scl-100,

PM-Scl-75)检测方法:IIFT,

ELISA,

Blot临床意义:重叠综合症的诊断标志，表现为肌炎和硬皮病症状(阳性率50-70%).52抗PM-Scl抗体靶抗原:PM-Scl:11到16个EUROLINE系统性硬化症谱一个实验膜条包括13种高特异性纯化抗原系统性硬化症(SSc)血清学诊断

EUROBlotMaster自动化操作

EUROLineScan软件全自动结果判读53EUROLINE系统性硬化症谱一个实验膜条包括13患者血清:129份SSc血清和202份对照血清[50PM/DM,50SLE,42RA,60HD]所有抗原的血清命中率为:

85.3%.系统性硬化症相关抗体Meyer

et

al.,

7th

Congress

on

Autoimmunity

in

Ljubljana,

May

201054患者血清:129份SSc血清和202份对照血清[5Arthritis

Research

&

Therapy

(in

press).

相关参考资料

Antibodies

against

PM/Scl-75

and

PM/Scl-100

are

independent

markers

for

different

subsets

of

systemic

sclerosis

patients.

K.Hanke,C.Brückner,C.Dähnrich,D.Huscher,L.

Komorowski,W.Meyer,A.Janssen,M.Backhaus,M.Becker,

A.Kill,K.Egerer,G.R.Burmester,F.Hiepe,W.Schlumberger

andG.Riemekasten

Arthritis

Research

&

Therapy

,

2009:

11Diagnostic

value

of

anti-topoisomerase

I

antibodies

in

a

large

monocentric

cohort.HankeK,DähnrichC,BrücknerCS,HuscherD,BeckerM,JansenA,MeyerW,EgererK,HiepeF,BurmesterG,SchlumbergerW,RiemekastenG.55ArthritisResearch&Therapy(系统性红斑狼疮

(SLE)ANCA

相关性血管炎慢性炎症性结缔组织病

(CICTD)

干燥综合症

(SS)

Systemischer

LupusErythematodes

(SLE)

dsDNA系统性硬化症

(SSc)

Scl

-70

and

CenpB

SS-A

and

SS-B

慢性炎症性结缔组织病

(CICTD)多肌炎/皮肌炎

(PM/DM)

Myositis

Profile

夏普综合症

(MCTD)

RNP

Rheumatoide

Arthritis

(RA)EUROIMMUN56系统性红斑狼疮(SLE)ANCA相关性血管炎慢性炎症性结-皮肤症状:-红斑-膝盖/手指关节处皮肤异变-皮肤褪色

多肌炎/皮肌炎(PM/DM)皮肤与肌肉受累的自身免疫疾病症状:

-肌肉疼痛/肌无力(如：肩膀/骨盆)57-皮肤症状:-红斑 多肌炎/皮肌炎(PM/DM)57多肌炎/皮肌炎(PM/DM)

代表性抗体Jo-1Mi-2(esp.inDM)PM-Scl(PSS-重叠综合征)PL-7PL-1225-35%15-30%

8%

3-6%

3%58多肌炎/皮肌炎(PM/DM)Jo-125-35%58EUROIMMUN

抗Jo-1抗体HEp-2细胞/猴肝HEp-2细胞猴肝59EUROIMMUN 抗Jo-1抗体HEp-2细胞猴肝59胞浆颗粒:抗Jo-1抗体靶抗原:Jo-1

(组胺酰-tRNA合成酶)检测方法:IIFA,

ELISA,

Blot临床意义:对多肌炎具有高度特异性(阳性率25-35%)Jo-1:病情严重的标志。常与肺纤维化有关(70%)60胞浆颗粒:抗Jo-1抗体靶抗原:Jo-1(组胺酰-tRNEUROIMMUN氨酰基-tRNA-合成酶氨酰基-tRNA合成酶Jo-1:组氨酰l-tRNA合成酶PL-7:苏氨酰基-tRNA合成酶PL-12:丙氨酰-tRNA合成酶OJ:异亮氨酸-tRNA合成酶EJ:甘氨酰-tRNA合成酶61EUROIMMUN氨酰基-tRNA-合成酶氨酰基-tRNA合EUROIMMUN

抗Mi-2抗体HEp-2细胞/猴肝HEp-2细胞猴肝62EUROIMMUN 抗Mi-2抗体HEp-2细胞猴肝62细胞核颗粒:Anti-Mi-2靶抗原:多组分系统;与组蛋白乙酰基转移酶和核小体重塑活性有关的主要抗原(218kDa)临床意义:肌炎5-15%

(主要是皮肌炎)63细胞核颗粒:Anti-Mi-2靶抗原:多组分系统;与组蛋白乙EUROIMMUN

抗Ku抗体HEp-2细胞/猴肝HEp-2细胞猴肝64EUROIMMUN 抗Ku抗体HEp-2细胞猴肝64细胞核颗粒:抗Ku抗体(p70/p80)靶抗原:DNA结合的非组蛋白和DNA依赖的蛋白酶异源二聚体分析方法:IIFA,

Blot临床意义:PM/Scl-重叠综合症30-55%SLE

5-10%65细胞核颗粒:抗Ku抗体(p70/p80)靶抗原:DNA结合EUROIMMUN其他与肌炎相关的抗体Anti-SRPAnti-PL-12HEp-2细胞HEp-2细胞66EUROIMMUN其他与肌炎相关的抗体Anti-SRPAntEUROLINE肌炎相关抗原一个膜条上包括7或11种高度纯化抗原(新:

PM-Scl,

SRP,

EJ,

OJ)

DM和PM及原发性肌炎的血清学诊断

EUROBlotMaster自动化操作

EUROLineScan全自动化判读结果67EUROLINE肌炎相关抗原一个膜条上包括7或153份肌炎患者血清[50DM,89PM,4juvenileDM,10IBM]77份对照血清[26SjS,26SLE,25SSc]

Anti-Mi-2KuPM-Scl100Jo-1PL-7PL-12SRPPrevalence

3%

3%

7%

12%

2%

0%

5%Specificity

100%

97%

100%

99%

100%

100%

97%

EUROLINE肌炎相关抗原患者血清:

所有抗原的血清学命中率:

26%.Rönnelid

et

al.,

Autoimmun

Rev,

2009

EUROIMMUN6815