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文档简介
讨论2:如何证明他们是遗传物质?讨论3:怎样才能将细胞内的这些物质分离出来?讨论1:构成生物体的遗传物质是什么?讨论2:如何证明他们是遗传物质?讨论3:怎样才能将细胞内的1§5.1DNA的粗提取与鉴定§5.1DNA的粗提取与鉴定2一、基础知识(一)提取DNA的方法1.提取生物大分子的基本思路
选用一定的物理或化学方法,分离具有不同物理或化学性质的生物大分子2.提取DNA的基本思路提取DNA,去除其他成分利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异一、基础知识(一)提取DNA的方法1.提取生物大分子的基本思3⑴DNA的溶解性DNA和蛋白质等成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解,而使杂质沉淀;或者让其他成分溶解,DNA析出3.DNA等大分子的理化性质⑴DNA的溶解性DNA和蛋白质等成分利用这一特点,或者让其4DNA不溶于酒精溶液,但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。将DNA与蛋白质进一步分离。⑵DNA不溶于酒精溶液⑶DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性①蛋白酶——水解蛋白质,
对DNA没有影响②高温——大多数蛋白质不能忍受60~80℃
而DNA在80℃以上才会变性③洗涤剂——溶解细胞膜,去除脂质和蛋白质
但对DNA没有影响DNA不溶于酒精溶液,⑵DNA不溶于酒精溶液⑶DNA对酶5高中生物选修一DNA的粗提取与鉴定ppt课件6试剂:(二)DNA的鉴定条件:二苯胺沸水浴条件下,
DNA遇二苯胺被染成蓝色沸水浴现象:试剂:(二)DNA的鉴定条件:二苯胺沸水浴条件下,
DNA遇7二、实验设计(一)实验材料的选取从下列材料中选取2~3种原则:菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜;鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞;在液体培养基中培养的大肠杆菌凡是含有DNA的生物材料都可以考虑选用DNA含量相对较高的组织二、实验设计(一)实验材料的选取从下列材料中选取2~3种原则8(二)破碎细胞,获取含DNA的滤液1、动物细胞2、植物细胞——容易破碎——需要溶解细胞膜鸡血细胞溶液:加入一定量的蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌,
过滤后收集滤液想一想:为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂?蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体,水分大量进入血细胞,使血细胞胀裂;加上搅拌作用,加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂,
从而释放出DNA①加入一定的洗涤剂和食盐②充分的搅拌和研磨,过滤后收集研磨液想一想:洗涤剂和食盐的作用分别是什么?洗涤剂——离子去污剂,能溶解细胞膜,利于DNA释放食盐——NaCl,利于DNA的溶解于研磨液中(二)破碎细胞,获取含DNA的滤液1、动物细胞2、植物细胞—9使细胞核内的DNA释放不完全,提取的DNA量变少,
导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理讨论:滤液/研磨液中可能含有哪些成分?答:可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质想一想:如果研磨不充分,会对实验结果产生
怎样的影响?使细胞核内的DNA释放不完全,提取的DNA量变少,
导致看不101.DNA的溶解性2.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性(三)除去滤液中的杂质1.DNA的溶解性2.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性(11讨论:方案二与方案三的原理有什么不同?方案二:利用蛋白酶分解杂质蛋白,使提取的DNA
与蛋白质分开;方案三:利用DNA和蛋白质对高温耐受性的不同,
使蛋白质变性,与DNA分离讨论:方案二与方案三的原理有什么不同?方案二:利用蛋白酶分解12(四)DNA的析出与鉴定与滤液体积相等的冷却的酒精溶液(体积分数95%),静置2-3min,溶液中会出现白色丝状物
——粗提取DNA用玻璃棒沿一个方向搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸取上面的水1、DNA的析出(四)DNA的析出与鉴定与滤液体积相等的冷却的酒精溶液(体13高中生物选修一DNA的粗提取与鉴定ppt课件142.DNA的鉴定⑴向两支试管中分别加入2mol/LNaCl
溶液5ml⑵其中一支试管中加入DNA丝状物⑶各加入二苯胺试剂4ml⑷混匀后,置于沸水浴中加热5min⑸待冷却后,比较两只试管中溶液的颜色变化观察现象:溶解丝状物的溶液变为蓝色2.DNA的鉴定⑴向两支试管中分别加入2mol/LN15观察你提取的DNA颜色,如果不是白色丝状物,说明DNA中的杂质较多;二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成功,如果不呈现蓝色,可能所提取的DNA含量低,或是实验操作中出现错误,需要重新制备四、课题成果评价:是否提取出了DNA观察你提取的DNA颜色,四、课题成果评价:是否提取出了DNA16课题延伸本课题使用的洗涤剂是多组分的混合物,在严格的科学实验中很少使用。实验室提取高纯度的DNA时,通常使用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、十二烷基硫酸钠(SDS)或吐温等化学试剂。课题延伸本课题使用的洗涤剂是多组分的混合物,在严格的科学实验17提取DNA的第一步是材料的选取,其目的是一定要选取DNA含量较高的生物材料,否则会由于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困难;第二步是DNA的释放和溶解,这一步是实验成功与否的关键,要尽可能使细胞内的DNA全部溶解;第三步是DNA的纯化,即根据DNA的溶解特性、对酶及高温的耐受性的不同等特性,最大限度地将DNA与杂质分开;最后一步是对DNA进行鉴定,这是对整个实验的结果的检测。1、请解释提取DNA的实验操作主要步骤的目的练习提取DNA的第一步是材料的选取,其目的是一定要选取D182、你认为从细胞中提取某种特定的蛋白质与提取DNA一样容易吗?答:提取蛋白质比提取DNA的难度大。这是因为,与DNA相比,蛋白质对温度、盐浓度、pH等条件要敏感得多,很容易失活;并且蛋白质的空间结构多种多样,理化性质各不相同,使得蛋白质的提取没有一种统一的方法,只能根据特定蛋白质的特性摸索提取的条件,设计特定的方法。2、你认为从细胞中提取某种特定的蛋白质与提取DNA一样容易吗192.实验中NaCl的物质的量浓度为2mol/L和0.14mol/L对DNA有何影响?1.在DNA的粗提取实验过程中,两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是()。A.稀释血液、冲洗样品B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA答:B答:前者是溶解DNA,后者是使DNA析出2.实验中NaCl的物质的量浓度为2mol/L和0.14203.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成()A.砖红色B.橘黄色C.紫色D.蓝色4.提取鸡血中的DNA时,为什么要除去血液中的上清液?答:DNA的提取,关键是对杂质的去除,由于上清液是血液中的血浆部分,不含DNA,所以要除去上清液(含有蛋白质)。答:D3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成()4.提取鸡血21高中生物选修一DNA的粗提取与鉴定ppt课件22为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质?
1、用高盐浓度的溶液溶解DNA,能除去在高盐中不能溶解的杂质;
2、用低盐浓度使DNA析出,能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此,通过反复溶解与析出DNA,就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质?1、用23⑴过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液目的:获得含核物质的滤液
⑵过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液目的:获取纱布上的粘稠物
⑶过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液目的:得到含DNA的滤液
本实验中有三次过滤,分别有什么作用?⑴过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液本实验中有三次过滤,分别有24第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液
加速细胞的破裂第二次搅拌加2mol/LNaCl溶液的滤液
使DNA与溶液混合均匀第三次搅拌加蒸馏水至0.14mol/LNaCl溶液
稀释NaCl溶液,析出DNA第四次搅拌放入2mol/LNaCl溶液中纱布上的粘稠物
使DNA尽可能多的溶于溶液中第五次搅拌体积分数为95%的酒精
提取含杂质较少的DNA实验中有五次用玻璃棒搅拌?分别有什么作用?第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液实验中有五次用玻璃棒搅拌?分别25方法步骤
加入物质
目的
1.制备鸡血细胞液
柠檬酸钠溶液
①
2.提取鸡血细胞细胞核物质
20m1蒸馏水
②幻灯片18
3.溶解细胞核内的DNA
2m1/L的NaCI溶液40mL
③幻灯片18
4.析出含DNA的黏稠物
蒸馏水
④
5.滤取含DNA的黏稠物
⑤
6.将DNA的黏稠物再溶解
2mol/L的NaCl溶液20mL
⑥
7.过滤含DNA的NaCl溶液
⑦
8.提取含有杂质较少的DNA
冷却的95%的酒精50mL
⑧幻灯片18
A:(1)向试管中加入0.015mol/L的NaCl溶液5mL
(2)加入DNA
(3)4
mL二苯胺试剂
9.DNA的鉴定
B:(1)向试管中加入0.015mol/L
的NaCl溶液5mL
(2)4mL二苯胺试剂
⑨
方法步骤加入物质目的
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