免疫学实验供临床医学本科用授课课件

免疫学实验供临床医学本科用免疫学实验供临床医学本科用1临床医学本科实验内容及安排临床医学本科实验内容及安排2非临床医学本科实验内容及安排非临床医学本科实验内容及安排3AB型A、B—用途：检测类风湿因子等。（3）温度：37℃掌握血清学反应概念、特点。已知Ab：标准血清——抗A、抗B用途：辅助诊断肠热症等。废弃的使用品仍-入垃圾桶内。(4)若抗A、抗B均不凝集——O型血掌握血清学反应概念、特点。一、免疫学实验注意事项(4)加RBC各1滴；B型B抗A光镜下无形态，肉眼观呈澄清透明，如蛋白质、多糖抗原等。临床上用检测类风湿因子以辅助诊断类风湿关节炎。2～5%红细胞(RBC)悬液；一、免疫学实验注意事项1.学生进实验室必须穿白大褂，不得穿拖鞋。2.学生在实验过程中应遵守实验操作规程和实验室秩序，按要求完成实验。3.学生应爱护实验设备、器材等公物，厉行节约；若损坏实验用品，要及时报告。4.需回收的玻璃器材如载玻片等，放于指定陶瓷缸内；废弃的使用品仍-入垃圾桶内。5.实验结束，清理好桌面，由班干部安排值日学生做清洁；做完清洁，关好水电、门窗，由带教老师检查认可后，值日学生方可离去。AB型A、B4二、免疫实验课目的1.验证所学理论知识。2.训练基本操作技能，培养独立工作能力。三、要求1.严肃认真。2.多想、多看、多做。3.当堂完成实验报告。二、免疫实验课目的5四、Ag-Ab反应的相关知识血清学反应——即体外进行的Ag-Ab反应。由于机体绝大部分抗体存在于血清中，故称之为血清学反应。1.Ag-Ab反应的基本原则（1）用已知抗体检测未知抗原；（2）用已知抗原检测未知抗体。四、Ag-Ab反应的相关知识6

2.Ag-Ab反应的特点：（1）特异性（2）可逆性（3）可见性

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3.影响Ag-Ab反应的因素（1）电解质：0.85%NaCl（2）酸碱度：pH6～8（3）温度：37℃3.影响Ag-Ab反应的因素84.Ag-Ab反应类型：（1）凝集反应（2）沉淀反应（3）补体结合反应（4）中和反应（5）免疫标记技术4大经典免疫实验4.Ag-Ab反应类型：（1）凝集反应4大经典免疫实验9实验一凝集反应实验一凝集反应10一、目的要求1.掌握血清学反应概念、特点。2.熟悉凝集反应的概念、常用凝集反应的实验方法及结果判定。3.了解凝集反应的原理、类型及其用途。一、目的要求11二、实验内容1.直接凝集试验(玻片法)——ABO血型鉴定(每人做)2.间接凝集试验——类风湿因子检测(小组做)二、实验内容12三、凝集反应相关知识

（一）概念

颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应抗体结合，在一定条件下，出现肉眼可见的凝集物，称为凝集反应。颗粒性Ag又称凝集原相应Ab又称凝集素三、凝集反应相关知识颗粒性Ag又称凝集原13(4)加RBC各1滴；血清学反应——即体外进行的Ag-Ab反应。临床医学本科实验内容及安排B型B抗A废弃的使用品仍-入垃圾桶内。直接凝集试验(玻片法)2～5%红细胞(RBC)悬液；(1)若抗A凝集，抗B不凝集——A型血光镜下无形态，肉眼观呈澄清透明，如蛋白质、多糖抗原等。实验一凝集反应(4)加RBC各1滴；(4)加RBC各1滴；（2）用已知抗原检测未知抗体。用途：辅助诊断肠热症等。·颗粒性抗原：光镜下可见，肉眼观呈浑浊悬液，如细菌、RBC等。·可溶性抗原：光镜下无形态，肉眼观呈澄清透明，如蛋白质、多糖抗原等。(4)加RBC各1滴；·颗粒性抗原：·可溶性抗原：14（二）凝集反应类型1.直接凝集反应2.间接凝集反应（二）凝集反应类型1.直接凝集反应2.间接凝集反应151.直接凝集——玻片法已知Ab,测Ag，为定性实验；用途：鉴定菌种、菌种分型、血型鉴定。——试管法（如肥达氏反应）已知Ag,测Ab，为半定量实验；用途：辅助诊断肠热症等。

1.直接凝集162.间接凝集反应RBC——间接血凝试验用途：某些病毒感染和变态反应患者血清中的相抗体量。乳胶——间接乳胶凝集试验用途：检测类风湿因子等。2.间接凝集反应RBC——间接血凝试验乳胶——间接乳胶凝集试17间接凝集抑制试验——妊娠试验（已知）（已知）（已知）（已知）间接凝集抑制试验——妊娠试验（已知）（已知）（已知）（已知）18学生应爱护实验设备、器材等公物，厉行节约；（2）用已知抗原检测未知抗体。(3)加血清(Ab)各1滴；(4)若抗A、抗B均不凝集——O型血废弃的使用品仍-入垃圾桶内。2～5%红细胞(RBC)悬液；(4)加RBC各1滴；O型—抗A、抗B用途：辅助诊断肠热症等。一、直接凝集反应（玻片法）——ABO血型鉴定（2）用已知抗原检测未知抗体。(1)无菌操作采血(无名指尖)于NS试管→形成约废弃的使用品仍-入垃圾桶内。四、Ag-Ab反应的相关知识类风湿关节炎患者血清中存在：反向间接凝集试验——某些传染病和原发性肝癌的早期诊断。学生应爱护实验设备、器材等公物，厉行节约；反向间接凝集试验—19四、实验操作内容

（一）玻片法——ABO血型鉴定（每人做）用已知血型Ab,测未知血型Ag；为定性实验。

ABO血型系统血型红细胞表面的血型Ag血清中的血型Ab

A型A抗B

B型B抗A

AB型A、B—O型—抗A、抗B

四、实验操作内容201.材料已知Ab：标准血清——抗A、抗B待测Ag：红细胞血型抗原1.材料212.操作步骤

(1)无菌操作采血(无名指尖)于NS试管→形成约2～5%红细胞(RBC)悬液；

(2)准备1张载波片；

(3)加血清(Ab)各1滴；

(4)加RBC各1滴；

(5)摇晃混匀；

(6)结果判断(10-15分钟后)。2.操作步骤(1)无菌操作采血(无名指尖)于NS试管→形22待测Ab：待检血清中的类风湿因子(3)加血清(Ab)各1滴；——试管法（如肥达氏反应）若损坏实验用品，要及时报告。了解凝集反应的原理、类型及其用途。(4)若抗A、抗B均不凝集——O型血学生应爱护实验设备、器材等公物，厉行节约；已知Ab：标准血清——抗A、抗B一、直接凝集反应（玻片法）——ABO血型鉴定用途：辅助诊断肠热症等。（1）电解质：0.乳胶——间接乳胶凝集试验学生进实验室必须穿白大褂，不得穿拖鞋。直接凝集试验(玻片法)阴性者现象：呈乳白色均匀混浊。3.结果判断凝集者：出现红色颗粒状或块状凝集物；不凝集者：呈红色均匀混浊。(1)若抗A凝集，抗B不凝集——A型血(2)若抗A不凝集，抗B凝集——B型血(3)若抗A、抗B均凝集——AB型血(4)若抗A、抗B均不凝集——O型血在白背景上观察凝集不凝集待测Ab：待检血清中的类风湿因子3.结果判断在白背景上观23

4.注意事项

(1)适度的RBC悬液浓度，约2-5%；

(2)抗A和抗B不能混用；

(3)在白色背景上观察效果较好。4.注意事项24（二）间接乳胶凝集试验—类风湿因子检测类风湿关节炎患者血清中存在：变性IgG—Ag抗变性IgG抗体(类风湿因子)—Ab

临床上用检测类风湿因子以辅助诊断类风湿关节炎。（二）间接乳胶凝集试验251.材料已知Ag：致敏乳胶(乳胶颗粒表面有变性IgG)待测Ab：待检血清中的类风湿因子待测Ab已知Ag1.材料待测Ab已知Ag26

2.检测步骤：(1)取黑底纸片三片；

(2)加待测血清、阳性和阴性对照血清各1滴；(3)各加1滴致敏乳胶,用牙签混匀；(4)5分钟后观察结果，以黑背景观察为佳。阳性者现象：呈乳白色细沙状（乳胶凝集）；阴性者现象：呈乳白色均匀混浊。2.检测步骤：阳性者现象：呈乳白色细沙状（乳胶凝集）；27