超声波法提取鱼腥草黄酮工艺设计

武汉工商学院生物制药工程技术论文学院 专业： 生物工程 年级：2014级学生：冯佩全 学号指导教师:吕凯波 职称:副教授题目: 超声波提取鱼腥草黄酮分离纯化的条件研究2016年11月1日TOC\o"1-5"\h\z\o"CurrentDocument"摘要 1\o"CurrentDocument"Abstract 1\o"CurrentDocument"1绪论 2\o"CurrentDocument"2材料试剂和仪器 21.1材料 21.2试剂 21.3仪器 3\o"CurrentDocument"3方法与结果 33.1工作曲线回归方程的建立 33.2单因素实验考察 33.2.1料液比对超声波法提取效果的影响 43.2.2提取时间对超声波法提取效果的影响 53.2.2乙醇浓度对超声波法提取效果的影响 64结论 7参考文献 8超声波提取鱼腥草黄酮分离纯化的条件研究摘要采用超声波提取法，从鱼腥草(HoustioniancordstaThunb)中提取黄酮类物质，对影响超声波提取鱼腥草中总黄酮的多个因子进行单因素考察探讨了提取条件对鱼腥草)黄酮类物质提取量的影响。结果：最佳提取条件为：料液比1:20，提取时间30min，乙醇浓度70%关键词：鱼腥草；黄酮；超声波法StudyonExtractionProcessofFlavonoidsfrom

HouttuyniacordataThunbLeaveswith

SupersonicExtractionAbstractUsingultrasonicextractionmethod,(HoustioniancordstaThunb)fromHouttuyniaextractHuangTongsubstances,factorsforultrasonicextractionoftotalHuangTonginHouttuyniacordata(33)orthogonalexperiment,discussestheextractionconditionsofHouttuyniacordata)extractionamountofHuangTongsubstances.Results:theoptimalextractionconditionswere:Materialliquidratio1:20,extractiontime30min,ethanolconcentration70%。Keywords:Houttuynia;flavonoids;ultrasonicextraction1绪论鱼腥草为三白草科植物蕺菜的干燥地上部分，性辛，味微寒，归肺经，具有清热解毒、消痛排脓、利尿通淋等功能，用于痰热喘咳、热淋、热痢、疮毒等症状。有效成分为总黄酮、挥发油、檞皮素等，具有清热解毒、抗炎、抗过敏、抗氧化、抗衰老、抗心率失常、抗肿瘤等广泛的药理作用［1］。目前有关鱼腥草中黄酮的提取有溶剂提取、酶法、超声法和微波法提取等研究报道，而超声波法因其具有提取时间短，生产过程容易操控等特点，是一种非常实用、有效的提取方法⑵。该方法利用超声波的空化作用加速植物有效成分溶出，另外超声波次级效应，如机械震动乳化、扩散、击碎、化学效应等，也能加速提取成分的扩散、释放并与溶剂充分混合，因而它具有提取率高，速度快，操作简便，节约溶剂，低温提取等特点，并且可以为中药大生产的提取分离提供合理化生产工艺、流程及参数。所以本论文采用超声波法，对鱼腥草中的黄酮成分的提取工艺进行了考察，用分光光度计来测定含量⑶。2材料试剂和仪器2.1材料鱼腥草：100目，磨于10月15号，浙江产，毫州市国苑中药材饮片有限公司，生产日期2014.1.102.2试剂芦丁（芸香叶苷，三水），国药集团化学试剂有限公司；乙醇；硝酸铝天津市天力化学试剂有限公司；亚硝酸钠天津市凯通化学试剂有限公司；氢氧化钠天津市凯通化学试剂有限公司。JM2101电子天平，余姚纪铭称重效验设备有限公司；KQ-100E型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；TDZ5-WSD多管架自动平衡离心机，长沙湘麓离心机仪器有限公司；722E型可见分光光度计，上海光谱仪器有限公司。3方法与结果3.1工作曲线回归方程的建立精密称取20mg干燥至恒重的芦丁，置于小烧杯中，用少量60%乙醇使之溶解，再移至100mL容量瓶内定容，即为0.2mg/mL芦丁标准品溶液。精密吸取标准品溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0mL分别置于25mL容量瓶中，各加水6.0，5.0，4.0，3.0，2.0，1.0，0mL，再加0.7mol/L亚硝酸钠溶液1mL，摇匀，静置6min，加0.5mol/L硝酸铝溶液1mL，摇匀，放置6min，加入1.0mol/L氢氧化钠溶液10mL，用蒸馏水定容至25mL，放置15min，在波长510nm处测吸光度，以浓度c对吸光度A作标准曲线，得回归方程：⑸表3-1黄酮浓度与吸光度标准曲线00.0080.0160.0240.0320.040.04800.0830.1720.270.3610.4440.5323.2单因素实验考察初步拟定提取工艺为料液比1:25、乙醇浓度60%、超声波处理30min。改变其中一个因素，其他因素不变。用上述方法测出提取物中黄酮的含量，计算其提取率，从而比较出最佳单因素范围。3.2.1料液比对超声波法提取效果的影响称取1g鱼腥草粉末，用60%的乙醇，以料液比分别为1:15、1:20、1:25、1:30、1:35加入乙醇，在超声波清洗器中处理30min，提取液用纱布粗过滤，在4000rpm离心15min，吸取1mL上清液于25mL容量瓶中，再加0.7mol/L亚硝酸钠溶液1mL，摇匀，静置6min，加0.5mol/L硝酸铝溶液1mL，摇匀，放置6min，加入1.0mol/L氢氧化钠溶液10mL，用蒸馏水定容至25mL，放置15min，在波长510nm处测吸光度，利用标准曲线，求出浓度，进而求得黄酮含量［刀。表3-2料液比对总黄酮提取的影响料液比吸光度A浓度C(mg/mL)含量(mg/g)1:150.3310.029811.17761:200.3980.035817.89671:250.3320.029918.68521:300.2600.023517.59741:350.1950.017715.4485黄酮含量黄酮含量图3-2料液比与黄酮含量的关系图3-1表明，料液比在1:15至1:35的范围内，料液比在1:25时最高。但是当料液比超过1:25,增加溶剂的量对提取率的变化不大，在实际操作过程中，当浸提液过少时，不利于离心分离：当浸提液过多时，耗能多，提取效果没有显著增加，造成材料浪费，因此选择1:25的料液比较为合适。3.2.2提取时间对超声波法提取效果的影响称取1g鱼腥草粉末，以料液比1:25加入60%乙醇，分别在超声波清洗器中处理20min、25min、30min、35min、40min，提取液用纱布粗过滤，在4000rpm离心15min，吸取1mL上清液于25mL容量瓶中，再加0.7mol/L亚硝酸钠溶液1mL，摇匀，静置6min，加0.5mol/L硝酸铝溶液1mL，摇匀，放置6min，加入1.0mol/L氢氧化钠溶液10mL，用蒸馏水定容至25mL，放置15min，在波长510nm处测吸光度，利用标准曲线，求出浓度，求得黄酮含量。表3-3提取时间对总黄酮提取的影响时间min吸光度A浓度c(mg/mL)含量(mg/g)200.3280.029118.1826250.3760.033420.8631300.4150.036923.0410350.3740.033220.7514400.3240.028717.9593黄酮含量黄酮含量图3-3提取时间对总黄酮提取的影响图3-2表明，超声波提取时间在30min提取率最高。超声波提取时间从越长，提取效率越低，能耗越高，成本上升不适合工业生产。超声波处理时间越长，产热增加，对黄酮类物质有破坏。因此选择30min提取时间较为合适［9］。

3.2.2乙醇浓度对超声波法提取效果的影响称取1g鱼腥草粉末，以料液比1:25分别加入40%、50%、60%、70%、80%乙醇，在超声波清洗器中处理30min，提取液用纱布粗过滤，在4000rpm离心15min，吸取1mL上清液于25mL容量瓶中，再加0.7mol/L亚硝酸钠溶液1mL，摇匀，静置6min，加0.5mol/L硝酸铝溶液1mL，摇匀，放置6min，加入1.0mol/L氢氧化钠溶液10mL，用蒸馏水定容至25mL，放置15min，在波长510nm处测吸光度，利用标准曲线，求出浓度，进而求得黄酮含量。⑸黄酮含量30.0025.0020.00黄酮含量30.0025.0020.0015.0010.005.000.00表3-4乙醇浓度对总黄酮提取的影响乙醇浓度吸光度A浓度c(mg/mL)含量(mg/g)40%0.2950.026616.619050%0.3200.028818.015160%0.3970.035722.315070%0.4910.044127.564380%0.5060.045428.4020图3-4乙醇浓度对总黄酮提取的影响图3-3表明，随着乙醇浓度的增加，黄酮的提取率也逐渐增加，但是当乙醇浓度超过70%时黄酮提取率没有明显上升，原因是随着乙醇浓度的增大，会使提取粗品中杂质含量增加，有效成分含量反而降低。且随乙醇浓度的增大，溶剂极性降低，对一些极性较高的黄酮提取效果较差所致，影响提取物有效含量［5］。4结论利用超声波提取技术提取鱼腥草中的黄酮得率的影响，本实验设计了较为合理的单因素的实验，分别探讨了料液比，超声波处理时间，乙醇浓度对黄酮提取率的影响。得出在料液比1:20。超声波时间30min。乙醇浓度70%时黄酮提取率达到最大。参考文献刘振学，黄仁和.实验设计与数据处理[M].北京:化学工业出版社,2005.205-209李胜华，伍贤进.超声波提取鱼腥草叶总黄酮优化工艺研究[J].食品科学，2006,27(12):207-273李胜华，伍贤进.鱼腥草总黄酮的提取及其方法对比[J].吉首大学学报(自然科学版),2007,(03):113-117王白强.酶法工艺提取鱼腥草有效杀菌成分的研究及其应用[J].福建纺织,2008,(1):20-25杨文婷，吴士筠，朱文婷.响应面法优化超声提取鱼腥草黄酮的工艺[J].贵州农业科学,2015,(2):158-160周桃英.鱼腥草黄酮对小鼠的抗疲劳作用[J].食品