实验检测生物组织中的糖类

实验检测生物组织中的糖类、油脂和蛋白质一、实验目的尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、油脂和蛋白质。了解生物组织中的化学成分。了解颜色反应的一般方法，原理，步骤。制作徒手切片并进行染色。练习使用高倍显微镜。分析实验现象，得出结论。二、实验原理某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。1可溶性还原糖如葡萄糖、果糖、麦芽糖等与斐林试剂发生作用，可生成砖红色的 沉淀。因为还原性糖中含有醛基，在碱性溶液中加热煮沸分钟后，会被 氧化，使醛基氧化变为羧基，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸，被还原成 。油脂油脂可以被苏丹III染液染成橘黄色；被苏丹W染液染成红色。因为苏丹III在油脂中的溶解度比在酒精中的溶解度大，当用苏丹III的酒精溶液处理含有油脂的生物组织时，酒精中的苏丹III进入油脂中，将油脂染成橘黄色。蛋白质蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。蛋白质分子中含有很多肽键，在 碱性溶液中，能与双缩脲试剂中的 作用，即双缩脲（ ）与作用，形成紫色的络合物。双缩脲试剂可鉴定双缩脲的存在，而蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键。因此，蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应。加入双缩脲试剂，溶液无色，再加入双缩脲试剂B溶液显蓝色，振荡均匀后，出现紫色的络合物。淀粉遇碘变蓝色。三实验材料、试剂的选择可溶性还原性糖的选取应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨。因为苹果、梨组织的颜色较浅，易于观察实验的结果。还原性糖有还原性基团——游离醛基或酮基，如葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖。非还原性糖有淀粉、纤维素、蔗糖、糖元。鉴定还原糖的试剂斐林试剂由甲液（质量浓度为 的氢氧化钠溶液）和乙液（质量浓度为 /的硫酸铜溶液）配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的（）。uH与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的沉淀，而葡萄糖本身被氧化成葡萄糖酸。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色一棕色一砖红色（沉淀）。油脂鉴定的实验材料最好选择富含油脂的种子，如花生种子（取其子叶）。供实验用的花生种子，必须提前浸泡〜。浸泡时间短了，不容易切成片；浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成形。教师可根据本地区的情况选用苏丹 或苏丹染液。苏丹 染液遇油脂的颜色反应为橘黄色，苏丹染液遇油脂的颜色反应为红色。因苏丹染液与油脂的亲和力比较强，所以，染色的时间应比较短，一般为左右。4蛋白质鉴定的实验材料可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清等。实验材料最好选用富含蛋白质的生物组织（或器官），植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋（卵白）。如用大豆，必须提前浸泡〜，这样容易研磨成浆。有条件的学校，可以直接采用现成的大豆磨成的豆浆，豆浆可以购买，也可用小型的榨汁机制取。利用豆浆作实验材料，可以节约实验时间。如果用稀释的卵白作实验材料，效果会更好。四、实验试剂、仪器、材料苹果组织液、豆浆、浸泡过的花生；本尼迪特试剂、苏丹III染液、双缩脲试剂（包括液:质量浓度为 溶液和液:质量浓度为溶液）、体积分数为50的%酒精溶液，碘液、蒸馏水；剪刀，解剖刀，双面刀片，试管，试管架，试管夹，大小烧杯，小量筒，滴管，玻璃漏斗， 量筒、酒精灯，三脚架，石棉网，火柴，研钵，石英沙，纱布，载玻片，盖玻片，毛笔，吸水纸，显微镜等。方法步骤：一）油脂的鉴定操作方法注意问题解释花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片，将薄片放在载玻片的水滴中，用吸水纸吸去装片中的水。干种子要浸泡小时，新花生的浸泡时间可缩短。因为浸泡时间短，不易切片，浸泡时间过长，组织较软，切下的薄片不易成形。切片要尽可能薄些，便于观察。在子叶薄片上滴 滴苏丹III或苏丹W染液，染色分钟。染色时间不宜过长。用吸水纸吸去薄片周围染液，用 酒精洗去浮色，吸去酒精。不洗去浮色，会影响对橘黄色油脂滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的油脂颗粒溶解成油滴。用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴上 滴蒸馏水,盖上盖玻片。滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处，可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。装片不宜久放。时间长，油滴会溶解在乙醇中。二）可溶性糖的鉴定

操作方法注意问题解释制备组织样液：去皮、切块、研磨、过滤苹果或梨组织液必须临时制备。因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。取支试管，向试管内注入组织样液。组织液不要沾上试管壁向试管内注入新配制的斐林试剂，振荡。应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试齐山切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的在 0下分解成黑色和水；甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，无生成。试管放在盛有°C温水的大烧杯中，加热约分钟，观察溶液颜色：浅蓝色f棕色f砖红色（沉淀）最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不朝向实验者。也可用酒精灯对试管直接加热。防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤；缩短实验时间。三）蛋白质的鉴定操作方法注意问题解释制备组织样液：浸泡、去皮、研磨、过滤。黄豆浸泡至天，容易研磨成浆，也可购新鲜豆浆以节约实验时间。鉴定。加样液约于试管中，加入双缩脲试剂，摇匀；再加入双缩脲试剂液滴，摇匀，溶液变紫色。液和液也要分开配制,储存。鉴定时先加液后加液。溶液不能多加。先加 溶液，为 与蛋白质反应提供一个碱性的环境。、液混装或同时加入，会导致变成 沉淀，而失效。否则 的蓝色会遮盖反应的真实颜色。可用蛋清代替豆浆。蛋清要先稀释。如果稀释不够，在实验中蛋清粘在试管壁，与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底，并且试管也不易洗干净。（四）淀粉的检测和观察：用试管取 待测组织样液，向试管内滴加滴碘液，观察颜色变化。碘液不要滴太多，以免影响颜色观察。问题探析1鉴定生物组织中含有糖、油脂、蛋白质的根据是什么？2．斐林试剂、双缩尿试剂怎么配置？显微镜使用有怎样的程序？3．可溶性还原糖的鉴定材料为什么不用双子叶植物叶片？答：在双子叶植物中，光合作用的主要产物葡萄糖形成后，会马上合成为淀粉，暂时储藏在叶子内，因此最好不用双子叶植物的叶子作实验材料。4．可溶性还原糖的鉴定材料为什么不用单子叶植物叶片？答：有些单子叶植物，如韭菜、鸢尾，并不将光合作用的初始产物转变为淀粉，因此叶内含有大量的可溶性单糖，但是，由于叶片中叶绿素的颜色较深，对于鉴定时的颜色反应起着掩盖作用，导致实验现象不明显，因此，也不宜用单子叶植物的叶子作实验材料。本实验最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织（或器官），而且组织的颜色较浅，或近于白色的，如苹果和梨的果实。经试验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。例 请设计一个证明酶是蛋白质的实验。实验材料：的溶液、的溶液、鸡蛋、人的唾液 酶、水、小烧杯、玻璃棒、试管、滴管。实验步骤如下：第一步：制备蛋清液。取生鸡蛋一个，打破蛋壳（不要破坏蛋黄），取少量蛋清注入小烧杯中，加入 的清水，用玻璃棒调匀，制成蛋清液。第二步： 第三步： 第四步： 实验结果： 结果分析： 解析：高考试题的创新设计正朝着开放性、能力型目标迈进，综观近几年高考试题，直接来源于课本的纯验证性实验题越来越少,而源于教材高于教材，具有材料背景的新情景探究性实验题已逐渐演变为主流题型，处于更加突出地位，这就要求我们不仅要深刻理解教材基础实验的原理和基本操作，而且要将其应用于实践。本题设置了一个新情景，考查的仍是蛋白质鉴定的知识。鸡蛋的蛋清主要成分是蛋白质，在碱性溶液中，蛋白质与 溶液反应能产生红紫色物质，即蛋白质的双缩脲反应。如果能通过实验证明，酶能发生双缩脲反应，即可证明酶的化学本质是蛋白质。蛋清蛋白作实验对照。答案：第二步：取两支试管编号，在号试管中加入蛋清液，号试管中加入唾液。第三步：向两支试管中各加入〜滴的溶液，振荡。第四步：向两支试管中各加入一滴的溶液，振荡。实验结果：两支试管中都呈现红紫色。结果分析：证明唾液中存在着与蛋清相同的成分，即蛋白质。实验反思本实验所用的试剂达7种之多，所用的仪器有10多种，要提醒学生不能弄错，注意时间的掌控。应按照自己设计的实验方案进行操作，2人合作，相互配合，及时提醒。实验的结果应及时与邻桌进行交流，发现问题要及时进行讨论分析，找出原因，重新