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文档简介
二、实验原理1.血球计数板法
利用计数板上有固定体积和精确刻度的两个计数室进行计数,是常用的在显微镜下对细胞数目进行计数的方法。具有直观、快速等优点,但误差较大,不适合细菌计数。(1)计数室体积:正方形,边长为1mm,深0.1mm→盖上盖玻片后,容积为0.1mm3。(2)计数室刻度的规格16×25型:16个中方格,每个中方格分25个小格;25×16型:25个中方格,每个中方格分16个小格。计数室
(3)计数和计算方法我们采用的是25×16的,计数时查5个中方格的总菌数。如图:计算:1个计数室的总菌数=A/5×25×B1g(ml)样品中的总菌数=A/5×25×10×1000×B=50,000A×B个5个方格的总菌数稀释倍数2.测定生长量的其他方法平板菌落计数法、干重法和比浊法等。(1)平板菌落计数法(2)干重法(适合浓度较高的样品)取一定量菌液中→离心或过滤,分离菌体→烘干至恒重(温度可采用105℃、100℃或80℃)→称重。一般干重为湿重的10%-20%。(3)比浊法在一定范围内,菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比,即与吸光值成正比,菌数越多,吸光值越大。因此,借助于分光光度计,在一定波长下测定菌悬液的光密度,就可反应出菌液的浓度。该法适合测定浓度较高的样品。三、实验材料1.菌种:酵母菌(Saccharomyces
cerevisiae)悬液(已稀释100倍)2.器具:显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片。四、实验步骤1.检查计数板
检查计数板是否有破损。2.镜检计数室
在加样前,先对计数板的计数室进行镜检。若有污物,则需清洗后才能进行计数。3.加样品
在清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片,再用细口滴管将酵母菌稀释液由盖玻片边缘点一小滴(不宜过多),让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室,一般计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。4.显微镜计数
静置几分钟,将计数板放在显微镜下,先用低倍镜找到计数室,再换成高倍镜进行计数。5.清洗血球计数板
计数完毕,将计数板在水龙头下冲洗干净后自行晾干,镜检观察每小格内无残留物为止。
五、注意事项1.加样前先摇匀菌液,计数室中不可有气泡产生;2.菌液浓度以每小格有5-10个菌体为宜。3.计数时,格线上的菌体只数上方和右边线上的;4.如遇酵母出芽,芽体大小达到母细胞的一半时,作为两个菌体计算;5.清洗计数板时切勿用手或硬物刷洗。在水龙头上用水柱清洗,直到洗净为止。6.一个样品要从两个计数室中计得的平均值来计算。特别注意血球计数板均有编号,一人一个,
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