主管检验师临床医学检验免疫学和免疫检验第二十八章移植免疫及其免疫检测

二十章移植免疫及其免检测节原节制节H分型节植节疗节测所功。宿。节引起排反应的靶抗原由主要组织相容性复合体（M编码的人类白细胞抗原（H，是不同个体间进行器官或组织细胞移植时发生排斥反个织。一、主要组织相容性抗原在进行同种异体移植时，引起移植排斥反应最强烈的同种抗原当属HA在三类H子中，Ⅰ、Ⅱ类分子是触发移植排斥反应的首要抗原，尤其是HLA的抗原分子，其次为HLLLA和LA-DPA-C植排斥反应无明显关系。+在移植过程中，受体的免疫细胞对移植物表面H识别存在着直接和间接两种方式。，是指受体细胞对移植物表面完整的同种异型H子的识别，无须对其加工、处理和提呈；通过直接识别，活化以C主的细胞，参与强烈的急性排斥反应。++间接识别，即受体细胞对A加工、处理的移植物H原肽的识别；间接识别则以C为主，斥用。+二、其他组织相容性抗原原尽管m非主要组织相容性抗原发。（二）A型抗原系统A型抗原具有极为广泛的组织分布，几乎所有人体组织器官的血管内皮细胞表面均含有此类抗原。器应供、受体间A型的一致。原。节排斥反应的种类及发生机制。排反。1/8、超性斥应超急性排斥反应，是在移植物与受者血液循环恢复后的数分钟至～天内发生的不可逆转的体液排斥。常见于AB等血型不符、多次妊娠、反复输血或接受过器官移植者，也可发生在被移植器官灌流不畅。。应急性排斥。1.性体液性排斥反应主要由内皮细胞表面H子的抗体所介导，其病理改变与超急性排斥反应不同，不引起血栓，而是移或血。2.性细胞性排斥反应起。植巴胞胞。应痕形成是此类排斥反硬在噬细胞分泌的IL-1及血小板和内皮细胞产生的血小板源性生长因子（PDGF有关。引起慢性排斥反应素：T；②B细胞产生的抗体活化补体或通过AD坏血管内皮细胞；③急性排斥反应反复；④非免疫相关因素，诸如局部缺血、再灌注损。四、移植物抗宿主反应上述三类皆属于受体对供体的排斥反应，即宿主抗移植物反应（HVGR在骨髓移植时，由于移植的疫态供骨得免主应（GVHRGV可见于脾、胸腺和小肠移植。第节H分型法血清学分型法，是应用一系列已知抗H特异性标准分型血清与待测淋巴细胞混合，借助补体的生物学作用介导细胞裂解的细胞毒试验。因分型血清和淋巴细胞用量少，称为补体依赖的微量细胞毒（CC试验。能够应用该法检测的抗原称为S抗原，包括HLLBLLA-DRA-DQ所有应用H血清或抗体来确定H原性的方法均应属血清学分型法，而微量细胞毒试验只是应为统。2/8量血血。分法（一）单向MLC根据选用的刺激细胞类型，可将单向M为阳性和阴性分型法。1.性分型法又称纯合子细胞分型法该法使用的刺激细胞或称标准分型细胞系表面只具有一种LD抗原的纯合子分型细胞（H，其与待分型细胞混合进行单向M，若待分型细胞的L抗原与HC不出殖。HL可用阴性和阳性分型法检测，HLA只用阳性分型法检测。2.性分型法阳性分型法又称预致敏淋巴细胞分型法（P。（二）双向MLC遗传型不同的两个个体淋巴细胞在体外混合培养时，由于两者H同，能相互刺激导致对方淋巴细胞增殖，故称双向MC供、受体H原配合程度，双向M度与两个体间H原差异成正比，器官或细胞移植时，应选择M弱者为供体。三、分子生物学分型法（一）RF与PCR-分型法P限制性片段长度多态性（RFLP析，是最早建立的研究H态性的D型技术。这种H型法称为DNA-RFLD段进行体外扩增，然后再用限制性内切酶进行酶切分析，可使限制性长度分析的敏感度大大增加，此类引入D外扩增技术的限制性片段长度多态性分析则称为PCR-。PCR-所应用的P物为H特异性的，此法特别适应于小量标本的研究和异基因骨髓的。（二）PCR-SSO序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应（PCR杂交相结合的技术，从而对扩增产物作出HLA型别判断。其操作过程包括待测细胞H因片段扩增、扩增的D性后移至固相支持物、基因杂交和的。根据固相支持物所载成分的不同，通常将PCR类：①斑点或印迹法：即用扩增的待测DNA印迹或点至固相支持物，再与探针行杂交试验；②反向斑点或印迹法：系将已知D迹或点至固相支持物然后与扩增的待测D预先标记杂交前者有利于大量标本的分型后者则适用于少量标本的测定。PCROHL型应用最广泛的方法，能够鉴定所有已知序列的HLA、HLA-DQA等位P。基因芯片是近年发展起来的一项新技术，将其与PCR用于H型，可使分型趋于规模化和自动化，尤其在H态性和疾病遗传背景分析等方面更具优势。（三）PCR/SSP该方法应用设计的一套H位基因的序列特异性引物（S，对待测D行P增，从而获得H别特异性的扩增产物。（四）PCR-分型法P单链构象特异性聚合酶链反（PCR-是以待测基因P增为基础对扩增的D（ssNA的H型方法。（五）S型法3/8基于序列的H型法（S，可通过对扩增后的H因片段进行的核酸序列测定判断H别。节常见的织或器官移植一、脏移植。用在临床实际工作中，供肾的选择应遵循以下原则：①以A型完全相同者为好，至少能够相容。比较A型与H型在移植中的作用时发现非型血受者H配程度与移植肾脏的存活率呈正相关，这在型血受者则不明显。如果无合适的肾脏选择，而用A型不合的器官时，可选择血浆交换或免疫吸附法清除受者体内预存的A型抗体；组织配型是肾脏移植前选择供者的重要手段，包括A型配型、H型和交叉配型。②选择最佳H型的供者器官。由于复杂的H原系统，难以选择到完全匹配的肾脏。“可允许的不相容匹配法则”的提出，使供者的选择范围得以扩大。该法则规定的必须匹配位点，包括1个Ⅰ类和个Ⅱ类H点，其余的位点均为“可允许的不相容配型位点”。总之，在器官无可选择的情况下，不强调H型，但A型最好相容，预存的细胞毒抗体必须阴性。测毒等细胞内寄生的微物植者的。：细胞总数、CD48IL其受体的检测，以帮助判断排斥反应的发生和评估免疫抑制剂治疗效果；组织活检观察肾组织炎症细胞的浸润或C毒情况，以预测排斥反应的发生和调整用药剂量；根据条件，选用RAHP动态测定C药浓度，以指导合理用药，减少肾毒性。植肝硬化、酒精性肝病疫及，挽救晚期肝病患者生命的最有效方法。肝脏移植一般考虑实施于移植存活可达1个月以上的患者。此外，可单受。三、心脏移植与心肺联合移植。用心脏移植和心肺联合移植时，应进行A型鉴定H型淋巴细胞毒交叉配合试验和群体反应性抗检测。测免疫监测主要包括：外周血淋巴细胞总数；细胞的转化能力细胞亚类百分数及比值C胞毒作用；NK细胞数及其介导的自然杀伤或AD应；细胞因子及其受体表达或转录水平；黏附分子及达子反中也的。4/8四、骨髓与其他来源的干细胞移植植骨髓移植是移植中独具特性的移植类型与其他器官移植不同移植的骨髓和受者之间可同时存在HVGR和GVHR类移植可被应用于造血系统疾病和原发性免疫缺陷病的治疗。类。为了提高移植的成功率，应进行H红细胞血型配型。对配型不理想者，可通过适当减少供体骨髓中的细胞，以减轻GVHR疹活检、血清总胆红素及结合胆红素测定、腹泻症状等，均有助于判断GVR是。+造血干细胞的测定可选用F细胞培养、免疫标记分析及细胞因子（CIL）刺激等方法。当受到肾上腺皮质激素、抗肿瘤药及某些重组细胞因子等作用后，外周血CD胞可大幅增高，此为干细胞移植提另的。+植在进行外周血和脐血干细胞移植时应进行相同于骨髓移植的一系列实验室检查包括HAA0型配型、血常规与骨髓检验、性染色体测定、造血干细胞鉴定和GV象追踪等。第五节排斥反的预防与治疗一、织配型（一）H型在常规组织配型中，多用血清学方法作HLLLA，然而需要M定的HLA-分子是否匹配，是关系到移植物能否长期存活更有用的指标。此外，H基酸残基配型（Re）有助于鉴别不同型别H共同抗原。移植物存活与H型的关系是：①供、受者HL-HL的位点数越多，移植物存活几率越高；②供、受者HLA相配更重要，因为HLALA有很强的连锁不平衡，D位点相配的个体，通常D位点也相配；③不同地区H配程度与移植结果的关系有着不同的预测价值。（二）H叉配型与预存抗体的检测移植前如果受者血清中预先存在抗供者淋巴细胞的抗体移植后8生超急性排斥反应因此必须做H叉配型，以检测受者体内抗供者淋巴细胞的细胞毒性抗体。根据反应时参：1.巴细胞交叉配合2胞淋巴细胞毒性交叉配型3胞淋巴细胞毒性交叉配型4.式细胞法交叉配型（FC5.身交叉配型仍若不反。移植斥应无显系。测国际上，应用群体反应性抗体（P水平，判断器官移植时受体的敏感程度。5/8二、移植物与受体的预处理理不同的组织器官的移植，其移植物的处理不尽相同。胞，又要控制移植细胞中过客细胞的作用，防止GV发生。对移植细胞的处理多采用体外补体依赖的细胞毒针隆下细。备移一器髓植须抑。三、免疫抑制措施生的主要途径。目前疫答；移疫。用由于参与移植排斥反应的免疫细胞以细胞为主，因此免疫抑制药物主要是抑制细胞的作用，常用：1.学性免疫抑制剂：①环孢素（环孢菌素、环孢霉素，C。②糖皮质激素。③硫唑嘌呤：是一种抗代谢药，影响DNA合成，干扰细胞的增殖，从而抑制自身免疫、HVGRV及D此外也抑制抗体生成，但对细胞的抑制强于细胞。此类药物的主要副作用是对骨髓和肝脏的毒性，为减少毒性作用，自环孢素问世后，合。胺：主要作用于细胞分裂周期的G期，分裂速度快的细胞比细胞对其更为敏感。⑤他克莫司（TacrolimuFK品名为普乐可复（Pro克莫司的免疫抑制作用机制与环孢素相似，通过抑制多种相关细胞因子的产生和表达来抑制细胞的活化，其对细胞的抑制作用比环孢素强1010。⑥麦考酚吗乙酯（M霉酚酸酯）：是2世纪9年代问世的一种强力而有效的新型免疫抑制剂，它在体内转化为活性成分霉酚酸（M，通过选择性抑制、细胞的次黄嘌呤单磷酸脱氢酶，阻断了细胞DAR合成，抑制、细胞的分化、增殖。2.物性免疫抑制剂临床上已使用的生物性免疫抑制剂及其作用机制：①抗淋巴细胞球蛋白（A或抗胸腺细胞球蛋白（A。②细胞性单克隆抗体：只针对单一种细胞发挥作用，其作用更加特异。③某些融合蛋白：如可杀伤过客细胞的CD克隆抗体与蓖麻毒素的融合蛋白；能特异性杀伤IL-2R阳性细胞的IL白喉毒素的融合蛋白；阻断B与CD合的CTLA白等。④反义寡核苷断、胞达。3.些中草药。导理6/8施于。节排斥应的免监测一、体液免疫与细胞免疫水平检测的临床意义义1.异性抗体水平的检测相关的免疫指标包括：A血型和H体、抗供者组织细胞抗体、血管集原体赖胞试。2.体水平的检测挥着重要作用。当移分补可采用溶血法或比浊法进行检测。此外，补体的裂解产物，如CCC的测定，对了解补体的活性的等。义指斥应意。1.周血细胞及其亚类的计数免疫荧光法或流式细胞仪测定细胞及其亚群，在急性排斥反应临床症状出现前～天，细胞总数和CD4高，巨细胞病毒感染时此比值降低。一般认为，CD4于1，预示急性排斥即将发生，而此比值小于1.则发生感染的可能性很大。若进行动态监测，对急性排斥反应和感染具有鉴别诊断的意义。此外，淋巴细胞转化试验也可用于细胞总数和功能的测定，例如小时细胞转化试验，是一项预报急性排斥反应危象较为满意的方法。2.胞活性测定3.清细胞因子测定骨髓移植中发生的GV移植排斥反应的特殊类型。4.附分子及其配体的检测。诸如ELAM-1AMC和HLA子等。二、尿微量蛋白检测的临床意义的制。目前已能检出的尿微量蛋白种类、数量较多，常见有：①血浆蛋白，包括白蛋白（A、IIAI轻链（κλ）、补体C、α微球蛋白（α1），α2-球蛋白（α2M、转铁蛋白（TF、游离血红蛋白（H）、肌红蛋白（Mb及其他血浆蛋白和酶；②非血浆蛋白，诸如肾脏的Tamm-Horsfall蛋白（T、SIgA小球基底膜（G抗原等。已知，α微球蛋白是能较早反映肾功能损害的指标，尿α微球蛋白和尿I肾移植受者短期肾功能关系密切。三、急性时相反应物质检测的临床意义反应蛋白（C、IL、IL-6NF以及H炎症分子，是发生炎症反应的标志性分子，在发生感染性疾病和自程于的C平增高，且在移植后发生细菌或真菌感染时更为显著。7