血清肌酸激酶MB同工酶测定

血清肌酸激酶MB同工酶测定1检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。2实验原理使用CK-M多克隆抗体对肌酸激酶（CK）中CK-M同工酶的活性进行抑制后，采用德国临床化学会（DGKC）和国际临床化学会（IFCC）推荐的连续监测法测定余下的肌酸激酶（CK）活性。其反应原理如下：⑴CK-MM型同工酶+CK-M抗体→CK-MM型同工酶的活性被抑制；CK-MB型同工酶+CK-M抗体→50%的CK-MB型同工酶的活性被抑制；⑵剩余的50%无活性的CK-MB型同工酶+N-乙酰半胱氨酸→有活性的CK-B型同工酶CK同工酶CK同工酶⑶磷酸肌酸+ADP肌酸+ATP己糖激酶(HK)己糖激酶(HK)(G6P-DH)ATP+葡萄糖ADP+葡萄糖-6-磷酸(G6P-DH)葡萄糖-6-磷酸+NADP+6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+式中：ADP为二磷酸腺苷；ATP为三磷酸腺苷；NADP+为氧化型辅酶II；NADPH+H+为还原型辅酶II。在上述反应中，NADPH+H+的生成速率与样本中肌酸激酶B型同工酶（CK-B）的活性成正比。通过在波长340nm处监测吸光度值的上升速率，即可测得样本中肌酸激酶B型同工酶（CK-B）的活性。肌酸激酶B型同工酶（CK-B）活性相当于1/2肌酸激酶MB型同工酶的活性，将所测得的肌酸激酶B型同工酶（CK-B）的活性乘以2，即为肌酸激酶MB型同工酶（CK-MB）的活性。3标本： 3.1病人准备：无特殊。3.2类型：血清或肝素血浆。3.3标本存放：稳定性：-20℃保存稳定4周（避光保存）。活性损失：2～8℃保存24小时或18～22℃保存1小时至少损失10%。3.4标本运输：常温条件下保存运输。血标本应尽快送往化验室,室温下放置30―45分钟,后离心,放置时间不得超过3h.血清必须吸出,转移至有盖的试管中.3.5标本拒收标准：细菌污染的标本。4实验材料4.1试剂：上海复星长征医学科学有限公司CK-MB试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号YZB/沪1546-40-2014）4.1.1试剂组成试剂1（R1）：D-葡萄糖27mmol/L咪唑缓冲液60mmol/L乙酸镁14mmol/LNADP2.7mmol/LN-乙酰半胱氨酸27mmol/LAMP7mmol/L试剂2（R2）：磷酸肌酸160mmol/L6-磷酸葡萄糖脱氢酶≥20KU/LADP11mmol/L糖激酶≥20KU/LCK-M抗体4.1.2试剂准备：试剂为即用式。4.1.3试剂稳定性与贮存：2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。试剂1与试剂2启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定20天。4.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。4.1.5注意事项：试剂中含稳定剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。4.2校准品：4.2.1采用以检测用水为空白的方式进行校准。4.2.2校准及校准频次的要求：正常情况下，应每周至少对测定进行一次校准。当发生下列情况时（如：使用的试剂批号发生改变时、使用的仪器进行维修、保养或关键部件进行更换后、质控品的测定结果发生漂移或超出规定的范围等），应重新对测定进行校准后再对患者的样本进行检测。4.3质控品：使用正常值、病理值复合控制品。5仪器AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪,西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪。6操作步骤6.1样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。6.2试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。6.3项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪,西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪,西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。7质量控制在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。8计算方法在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以U/L报告。9参考值范围：0-24U/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。我室参考值0-25u/L10临床意义肌酸激酶主要由存在于肌肉中的同工酶（CK-M）和存在于脑中的同工酶（CK-B）组成。在血清中CK形式为CK-MM，CK-MB，CK-BB和巨酶等的二聚物。在检测心肌损伤时CK-MB特异性很高。因此，CK-MB常用于心肌梗死的诊断和监视。11操作性能11.1试剂空白：a)试剂空白吸光度应不大于0.500；b)试剂空白吸光度变化率(△A/min)应不大于0.001。11.2分析灵敏度：20U/L样本的吸光度变化率（ΔA/min）应不小于0.002。⒌线性范围：试剂（盒）线性范围应覆盖[0～1000]U/L。a)线性相关系数（r）应不小于0.990；b)[≤50]U/L范围内线性偏差应不超过±10U/L，[＞50]U/L范围内线性偏差应不超过±10.0%。⒍准确度：回收率（R）应在[100±15]%范围内。11.3精密度：（1）重复性：变异系数（CV）应不大于5%；（2）批间差：相对极差（R）应不大于10%。11.4稳定性：试剂（盒）在2～8℃贮存至12个月末，试剂性能应符合试剂空白、分析灵敏度、线性范围、精密度（重复性）和准确度的要求。12超出范围结果处理本法对CK-Mb活力的线性上限为1000U/L，当测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液1:4稀释，重新测定。结果乘以5。13病危报警值的处理无警告/危急值。14方法局限性14.1测定结果的准确性依赖于对所使用分析仪器校准、测定温度和测定时间的控制。14.2样本中甘油三酯浓度≤1500mg/dL、胆红素浓度≤20mg/dL、血红蛋白浓度≤50mg/dL时，对测定结果无干扰。14.3试剂启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定20天。若试剂混浊，或以水为空白在波长340nm处的吸光度值大于0.5，则不能使用。15补救措施当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行