人猪流感采集包装

1山西省疾病预防控制中心张凡非依据卫生部《甲型H1N1流感病毒实验室检测技术方案(试行)》卫生部《甲型H1N1流感预防控制技术指南（试行）》卫生部《甲型H1N1流感诊疗方案（2009年试行版第一版）》《人感染高致病性禽流感应急预案

》国家CDC《全国流感/人禽流感监测实施方案》《人间传染的病原微生物名录》《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》（2005年卫生部45号令)2人禽流感3一、采集对象及采集要求1.采集对象人禽流感医学观察病例、疑似病例、临床诊断病例及需要进一步研究的确诊病例。其他需要进行人禽流感诊断或排除者。需要采集的环境标本。4一、采集对象及采集要求2.采集要求从事人禽流感检测标本采集的技术人员必须经过生物安全培训和具备相应的实验技能。在标本的采集过程中参照《人感染高致病性禽流感应急预案》(附件5)规定的防护措施进行安全防护。5一、采集对象及采集要求2.采集要求住院病例的标本由所在医院的医护人员在当地疾病预防控制机构的专业人员指导下采集。标本采集的种类和具体数量由现场工作组确定。密切接触者标本由当地疾病预防控制机构负责采集。根据实验室检测工作的需要，结合病程再次采样。6二、标本采集的种类a.上呼吸道标本：咽拭子、鼻拭子、鼻咽吸取物、咽漱液、深咳痰液。b.下呼吸道标本：呼吸道吸取物、支气管灌洗液、肺组织活检标本。c.血清标本：每一病例必须采集血清标本，须采集急性期和恢复期双份血清。7二、标本采集的种类d.尸检标本：主要采集肺、气管组织标本，条件允许下也可采集肝、肾、脾、心脏、脑、淋巴结等组织标本。e.其他标本：如果病例有腹泻症状可在发病后采集粪便标本，有胸水者可采集胸水标本。8每个病例应尽可能同时采集上、下呼吸道标本。

需要排除人禽流感的死亡病例则根据《传染病病人或疑似传染病病人尸体解剖查验规定》（中华人民共和国卫生部令第43号）的规定采集尸体标本，没有条件进行尸体解剖的可采集呼吸道灌洗液或经皮穿刺采集肺组织标本。9三、标本采集的时间上呼吸道标本：在发病后的1～7日，最佳的采集时间为发病后3天以内下呼吸道标本：尽可能和上呼吸道标本同时采集。急性期血清：在发病后的7天内采集，恢复期血清在发病后的3～4周采集。10三、标本采集的时间尸检标本：病人死亡后应依法尽早进行解剖，在严格按照生物安全防护的条件下，进行尸检。粪便标本：在发病后有腹泻症状时采集。胸水标本：在发病后出现胸水症状时采集。11四、采样液及采样方法1.采样液：采样液应包含有一定量的蛋白质和抗菌素常用的采样液有：普通肉汤（只用于鸡胚，对细胞有毒性），pH7.4-7.6的Hanks氏液或MEM/DMEM液在采样液中需加入抗菌素，可用青霉素（终浓度为100u/ml）庆大霉素（其终浓度1mg/ml）和抗真菌药物（终浓度为2ug/ml）加入抗菌素后重新调pH为7.4，然后分装，每个采集管3ml,-20℃保存。标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存!12四、采样液及采样方法2.采样方法：

A.咽拭子

用2根拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入3ml采样液的管中，尾部弃去，旋紧管盖。13四、采样液及采样方法2.采样方法：

B.鼻拭子

将一根拭子（最好聚丙烯纤维头的塑料杆拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR实验）轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。另取一拭子？以同样的方法采集另一侧鼻孔。上述两根拭子浸入同一3ml采样液的管中，尾部弃去。旋紧管盖。1415采咽拭子的器材和容器16采鼻拭子的器材和容器四、采样液及采样方法2.采样方法：

C.鼻咽吸取物或呼吸道抽取物

用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液或从气管抽取呼吸道分泌物。将收集器头部插入鼻腔或气管，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用采样液3ml涮洗收集器1次（亦可用小孩导尿管接在50ml注射器上来替代收集器）。17四、采样液及采样方法2.采样方法：

D.深咳痰液要求病人深咳后，将咳出的痰液收集于50ml含3ml采样液的螺口采样管中。

18四、采样液及采样方法2.采样方法：

E.咽漱液用10ml不含抗菌素的采样液或生理盐水漱口。漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让洗液在咽部转动。然后将咽漱液收集于50ml无菌的螺口的塑料管中。无条件的可用平皿或烧杯收集咽漱液并转入10ml螺口塑料管中。

19四、采样液及采样方法2.采样方法：

F.呼吸道灌洗液：将收集器头部从鼻孔或气管插口处插入气管（约30cm深处），注入5ml生理盐水，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用采样液涮洗收集器1次（亦可用小孩导尿管接在50ml注射器上来替代收集器）。20四、采样液及采样方法2.采样方法：

G.胸水在B超定位下进行胸腔穿刺，抽取胸水5ml,置于无菌的塑料螺口管中。H.肺组织活检标本在超声或X线定位下，经皮穿刺取肺组织活检标本，置于含3ml采样液的塑料螺旋管中。21四、采样液及采样方法2.采样方法：

I.尸检标本每一采集部位分别使用不同消毒器械，以防交叉污染；每种组织应多部位取材，各部位应取20-50mg,淋巴结取2个。J.粪便标本采集5-10g粪便置于含5-10ml采样液无菌螺口管中，严格密封。22四、采样液及采样方法2.采样方法：

K.血清标本用真空负压管（塑料材质为好）采集5毫升血液，1500-2000rpm室温下离心10min。收集血清于2ml无菌螺口塑料管中。在4℃下运送。23四、采样液及采样方法2.采样方法：

环境样本采样液：

可使用Hank's或Eagle's等培养液加入以下抗菌素和0.5%BSA：氨苄青霉素(2x106IU/L)链霉素(200mg/L)多粘菌素B(2x106IU/L)庆大霉素(250mg/L)

制霉菌素(0.5x106IU/L)

盐酸氧氟沙星(60mg/L)磺胺甲基异恶唑(0.2g/L)。24四、采样液及采样方法2.采样方法：笼具表面标本：

用沾有采样液的带有聚丙烯纤维头的拭子擦拭笼具表面3-5个不同部位，然后将擦拭过的拭子放入含5ml采样液的采样管中，尾部弃去。

（含聚丙烯纤维拭子的采集标本:先将含聚丙烯纤维的拭子在管壁反复挤压后取出）25四、采样液及采样方法2.采样方法：水样本：在禽类活动或笼具旁的水沟或水池的不同部位采集15-20ml,置于50ml外螺旋盖的管内。水样标本到实验室后应在采样管中加入上述抗生素和0.5%BSA，再进行分装。26四、采样液及采样方法

上述标本采集后应迅速至于冰上或者4℃以下保存，因为流感病毒对热很敏感。否则，会影响病毒的分离率。27四、采样液及采样方法

所有标本采集后在生物安全二级实验室生物安全柜内分装成一式三份（分装标本的生物安全柜不能用于提取核酸）。一份当地检测用，一份送中国疾病预防控制中心检测，一份保存以备复核。28五、样品的包装依据：二○○六年一月十一日卫生部制定的《人间传染的病原微生物分类名录》二○○五年十二月二十八日发布的卫生部第45号令《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》,二○○六年二月一日起执行。

29五、样品的包装感染性物质是那些已知或有理由认为含有致病原的物质。致病原是指能使人或动物感染疾病的微生物（包括病毒、细菌、支原体、衣原体、立克次体、放线菌、真菌和寄生虫等）和其他因子，如朊病毒。国际民航组织《危险物品航空安全运输技术细则》中将感染性物质分为A、B两类。

感染性物质30五、样品的包装指在运输过程中与之接触能对健康人或动物造成永久性残疾或致命疾病的感染性物质。此处“接触”系指感染性物质离开保护性包装与人或动物的身体接触或经呼吸道吸入的情况。A类感染性物质使人染病或使人和动物都染病者联合国编号为UN2814，其运输专用名称为危害人的感染性物质；仅使动物染病者联合国编号为UN2900，其运输专用名称为仅危害动物的感染性物质。A类感染性物质31五、样品的包装不符合列入A类标准的感染性物质。其联合国编号为UN3373。运输专用名称为生命物质B类。

B类感染性物质32五、样品的包装

卫生部第45号令“可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定”第十二条规定运输高致病性病原微生物菌（毒）种或样本的容器或包装材料应当达到国际民航组织《危险物品航空安全运输技术细则》（Doc9284包装说明PI602）规定的A类包装标准，符合防水、防破损、防外泄、耐高温、耐高压的要求，并应当印有卫生部规定的生物危险标签、标识、运输登记表、警告用语和提示用语。

33五、样品的包装

这一包装系统可以应用于所有的感染性物质，由以下三层包装组成：

1.主容器：初级容器防水、防渗漏，内装标本。其外包裹有的吸收材料。

样品必须保存于大小合适、带胶垫的外螺旋盖的塑料管中，拧紧盖、封好管口（如用封口膜或防水的塑料胶带袋）管外要用油性笔注明标本的编号、种类、姓名及采样日期、采集量。

34五、样品的包装

2.次级包装：次级包装为第二层持久的、防水、防渗漏的包装，它封闭和保护初级容器。多个包有缓冲材料的初级容器可放于同一个次级包装中，但是，这要求同时也放入足够的吸收材料以确保一旦发生泄漏后所有液体都可被吸收。标本有关信息填写“疑似人感染高致病性禽流感/不明原因肺炎病例标本送检单”，用一塑料袋密封，并粘在塑料容器外面。35五、样品的包装

3.外层包装：次级包装包裹有合适的缓冲材料后，即可被装入外层运输包装。外层运输包装保护其内容物免受外界影响，如运输过程中的物理损坏。样品的容器要使用能够承受不少于95Kpa压力的高质量的防水包装材料并且密封，以防止运输发生内容物的外泄。36五、样品的包装感染性物质外包装件上必须做出如下的使用标记：1）托运人名称地址和收货人名称地址。2）运输专用名称：A类感染性物质为：感染性物质；B类感染性物质为：生命物质。3）联合国编号（UN编号）4）运送A、B类感染性物质的净含量：A类感染性物质要标出；B类感染性物质可以不标出。5）标记负责人姓名和联系电话。6）如使用干冰作制冷剂，应标出DryIce(干冰)、UN1845以及干冰的净重。7）生物危险标识。37五、样品的包装冷冻剂的使用:

1)在使用冰、干冰或其他冷冻剂进行冷藏运输时，冷冻剂必须放在辅助容器和外包装之间，内部要有支撑物固定，当冰或干冰消耗以后，仍可以把辅助容器固定在原位置上。如使用冰，外包装必须不透水。如果使用干冰，外包装必须能够排放二氧化碳气体，防止压力增加造成容器破裂。在使用冷冻剂的温度下，主容器和辅助容器必须能保持良好性能，在冷冻剂消耗完以后，仍能承受运输中的温度和压力。38五、样品的包装冷冻剂的使用:

2)当使用液氮对样品进行冷藏时，必须保证主容器和辅助容器能适应极低的温度。此外，还必须符合其他有关液氮的运输要求。

3)主容器和辅助容器须在使用制冷剂的温度下，以及在失去制冷后可能出现的温度和压力下保持完好无损。主容器和辅助容器必须在无泄漏的情况下能够承受95kPa的内压，并能保证在－40℃到＋55℃的温度范围内不被损坏。39A类感染性物质的包装与标签40B类感染性物质的包装与标签4142高致病性病原微生物运输登记表生物危险标识六、标本的运送要求

1.标本的运送必须专车和不少于两人的专人护送或者通过航空运输,单位或者个人不得通过公共电（汽）车和城市铁路运输病原微生物菌（毒）种或者样本。2.标本运送的生物安全要求应按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》（国务院424号令）和《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》（中华人民共和国卫生部第45号令）等有关规定执行。43七、标本的保存

新鲜的临床采集标本应在4℃条件下，24小时内运送至能开展相关检验的实验室；未能24小时内送至实验室的，应置-70℃或以下保存。如无条件的则于-20℃冰箱暂存。血清标本时间不超过3天可暂存在4℃冰箱，在-20℃以下冰箱内可长期保存。标本运送期间应避免反复冻融。标本应设立专库或专柜单独保存。44八、标本采集的防护要求

采集人禽流感临床样本时，采集人员在标本的采集过程中参照《人感染高致病性禽流感应急预案》(附件5)规定的防护措施的需要做好个人防护，戴防护口罩、帽子、护目镜、乳胶手套（双层），穿工作服、防护衣、鞋套。45九、实验室生物安全

凡涉及活病毒的操作必须在生物安全三级实验室（BSL-3级）里进行，不涉及活病毒的实验可以在生物安全二级实验室（BSL-2级）内操作，但是必须采取生物安全三级防护。所有涉及人禽流感病毒的相关活动必须符合《病原微生物实验室生物安全管理条例》（国务院424号令）的有关规定。46甲型H1N1流感人感染猪流感预防控制技术指南（试行）附件347一、标本采集所有猪流行性感冒（H1N1病毒）疑似病例？应该采集上呼吸道标本来检测猪流行性感冒（H1N1病毒）的病毒。疾病发病后应尽快采集如下标本：鼻咽拭子/吸取物或者鼻腔冲洗液/吸取物。如果不能收集这些标本，可合并鼻拭子与口咽拭子。气管插管的病人也应收集气管吸取物。标本应置于无菌病毒运输液，并立即用冰块或冰排保存或置于4℃（冰箱），并马上运送至实验室。48一、标本采集排除标本的标准：1.未在2-4°C(≤4天)或-70°C及以下保存的样本2.以上未列的其它不当样本49二、拭子理想的情况下，标本应使用头部为合成纤维的拭子（例如，聚酯纤维），用铝或塑料做杆。不推荐棉拭子和木杆。不能用海藻酸钙做的拭子收集标本。标本采集管应包含3毫升病毒运输液50常采集标本的种类1、咽拭子、鼻咽拭子2、双份血3、确诊病例出院前粪便标本

51标本采集所需要的器材1、拭子、压舌板、采样液管、剪刀2、10ml真空取血管3、记号笔、标签、登记表4、酒精、塑料袋、包装容器等5、防护用品52标本采集注意事项1、拭子不要剪得太