地中海贫血的实验室诊断

地中海贫血的实验室诊断在日常生活中，人们对于“贫血”这两个字都比较熟悉，但是很少有人了解地中海贫血这一疾病。地中海贫血疾病属于遗传病中的一种，其主要产生原因是人们体内造血红细胞内血红蛋白数量与质量发生变化致使红细胞在体内生存时间变短，从而导致血红蛋白的生理特性和功能异常。患有这一疾病的患者大部分都是天生的，后天形成几乎没有。根据相关人员调查发现，这一疾病最早在地中海地区的人群中被发现，故称为地中海贫血（简称“地贫”），又被称为海洋性贫血或珠蛋白生成障碍性贫血。人类珠蛋白基因是本病的致病基因。由于地中海贫血疾病属于遗传疾病的一种，所以，在临床人员对这一疾病进行筛查和预防时，也会通过遗传咨询、产前检查等方式及早干预，从而避免中重度患儿的出生。当前，随着科学技术的发展，地中海贫血检测手段也逐渐增多，其也被应用到实验室诊断中。1、地中海贫血筛查方式1.1红细胞参数检测这一检测方式是临床检测中较为常见的一个方式。患有地中海贫血的患者，其体内红细胞参数会与正常人有明显不同，最为明显的特征是患者体内红细胞性低色素。当前，相关人员在进行地中海贫血疾病进行筛查时，会将MCV<80、MCH<27pg这一标准作为基础筛查标准，根据此筛查标准，医护人员会发现患者的体内红细胞、白细胞以及血色素等出现异常。1.2红细胞形态学检查法根据相关人员研究发现，患有地中海贫血的患者其血内红细胞大小不一，在不同状态下，患者的红细胞会呈现出靶形红细胞、嗜碱性点彩红细胞等异常形态，患病严重程度不同，红细胞异常这一症状表现也会存在一定差异。1.3红细胞渗透脆性试验法这一检测方式主要是对检测体内红细胞渗透性，主要取决于红细胞的表面积与体积之比。根据实验结果对红细胞抵抗能力进行判断，以及相关数据的对比确定病情。红细胞抵抗能力不同，在实验中也会有不同表现。比如，在检查中，如果工作人员通过检查发现患者体内红细胞小细胞表面积与体积都比较大，并且对低渗盐水抵抗力较大，就表明小细胞的脆性比较小，反之则证明脆性大。如果检查中，发现患者体内红细胞脆性小于正常值，医护人员可以根据监测结果结合其他检查结果以及临床表现初步判断检查人员患有地中海贫血病，如果检查中各项数值都在正常范围内，则表明患者可能未患有这一疾病。1.4血红蛋白检测这一检测方式是医护人员通过对患者体内血红蛋白进行检查，对血红蛋白、血红蛋白定量进行分析，从而确定疾病性质。1.4.1血红蛋白常规检测常规检测主要包含了热变性试验检测、异丙醇试验检测、包涵体检测等，每一种检测方式都不相同。同时，对于不同检测方式，都有着自己的特点。1.4.2血红蛋白定量检测血红蛋白检测对病情判断有着重要作用，在这一检测方式中，医护人员经常利用的监测方式也有五种。第一种检测方式是琼脂糖定量法。第二种检测方式是醋酸纤维薄膜电泳法。在这一检测方式中，医护人员会根据检测后图表对患者血红蛋白情况进行判断，根据相关结果确定病情。第三种检测方式是聚丙烯酰胺凝胶检测方式。在运用这一检测方式时，需要工作人员有一定工作经验才可以准确判断出病情。同时，由于这一检测结果具有许多不确定性，也使得这一检测结果在一定程度存在不准确的问题。第四种检测方式是高效液相色谱分析，研究发现，这一检测方式操作起来比较简单，并且检测结果准确度也较高，因此，这一检测方式也成为医护人员比较喜欢的检测方式。第五种检测方式是毛细管电泳检测法，其主要是通过血红蛋白分离的方式对血红蛋白进行检测。除去上述地中海贫血检测之外，也有一些其他检测方式，但由于每一种检测方式特点、检测结果准确性、参考价值都不相同，所以临床上在对这一疾病进行检查与诊断时，也会根据实际情况选择合适的检查方式。1.5地贫筛查地贫筛查是地中海贫血筛查，地贫是我南各省（区）最常见、危害最大遗传，人群发生率高达10以上。地贫主要分α和β两种，以α地贫较常见。2、基因诊断随着现代科学技术的发展，不仅为临床试验研究提供了较大技术支持，也促进了实验室研究的发展。在基因诊断中，临床人员根据诊断研究结果将地中海贫血病划分成了四个类型，第一个是静止型，这一类型病症患者几乎没有什么异常表现。第二种是轻型病症，这一病型患者基本无贫血特征，但是可以在患者脐带血中检测出这一病症，其表现特征是小细胞低色素贫血的特征（MCV、MCH降低）。第三种病症为中间型，这一病症患者在发病时严重程度不一，并且发病年龄小，其病情严重程度也高。第四种为重型病症，这一病症也被临床称作为HbBart's胎儿水肿综合征。重型ɑ（--/--）地中海贫血是HbBart's使胎儿严重缺氧所致。2.1RFLP连锁分析RFLP连锁分析主要是通过医学技术对DNA进行分割，而后通过切割结果中核苷酸序列排序对酶切片断大小进行解读，并根据这一结果进行最终判断。在得到一定的DNA片段，如果碱基出现突变情况，会让酶切位点出现丢失或者是形成，从而使酶切片段的大小出现变化。而后，相关工作者可以根据基因突变后限制性内切酶水解后获得的结果、泳条带数量变化、大小变化确定突变是否存在。2.2等位基因特异性寡核苷酸(ASO)技术这一检查方式是将PCR与寡核苷酸探针结合在一起，检测待测位点是否发生异常，根据结果判断受检人员是否患有地中海贫血疾病。同时，在医护人员进行检查时，也会将检查人的DNA进行切割，并将切片放入进行电泳分离，而后根据检测分离结果与正常检测结果进行对比。在这一过程中，工作人员会对PCR产物与探针进行杂交，根据杂交后是否产生信号对检查片段是否存在突变位点进行确定。在这过程中，实际上操作流程比较多，工作人员要对杂交过程进行严格把控，以此避免出现杂交结果错误。但同时，这一检查方式也可以提升检查结果的准确程度，降低误诊几率。2.3缺口PCR技术和反向斑点杂交技术缺口PCR技术：在地中海贫血疾病发生时，患者的基因位点会发生缺失，此方法通过分别在待检测的缺失区域外侧及缺失区域内各设置一对引物，通过多种PCR技术，可一次性扩增出特定的DNA片段，最终将纯合子及杂合子携带者检测出来。反向斑点杂交技术：反向斑点杂交技术与传统的等位基因特异性寡核苷酸探针点杂交的原理基本相同。目前被广泛应用于地中海贫血的检测。2.4基因芯片这一基因诊断方式是工作人员将地中海贫血样本的基因检查结果与正常人样本的基因检查结果进行对比，对已知的序列顺序进行测定。这一基因测定方式主要特点是简单、方便操作，但由于基因芯片制造成本昂贵，想要将这一检测方式运用到临床检查中，还有一定难度