新鲜蔬菜水果中农药多残留快速检测技术文稿教学课件

新鲜蔬菜水果中农药多残留快速检测技术文稿演示（优选）新鲜蔬菜水果中农药多残留快速检测技术（一）专业术语一农药残留（pesticideresidue）农药使用后残存在生物体、农副产品和环境中的微量农药母体、有毒代谢物、降解物和杂质的总称。以mg/kg,ug/kg,ng/kg表示。中国一般只检测农药母体。发达国家检测母体、代谢物、环境降解产物、工业品杂质。（一）专业术语二农药残留分析（pesticideresidueanalysis）

对待测样品中微量农药残留进行定性、定量分析。目的:为新农药提供其在农作物上的残留动态和最终残留量。制定农药最大残留限量和合理使用准则。评价农药残留对农畜产品和环境的危险性。为制定防治农药污染措施提供依据。（一）专业术语二农药残留分析（pesticideresidueanalysis）特点:分析目的物含量低，在样品中仅以ug,ng甚至pg、fg量存在目的物种类多，化学结构差异大。样品种类多，干扰物成分各异。方法要求快速、简便、成本低、灵敏、准确、安全（QuEChERS)。对样品的前处理和仪器测试要求越来越高。（一）专业术语二农药残留分析（pesticideresidueanalysis）分类:1单残留分析（singalresidueanalysis)对待测样品中某类某一种农残定性定量（已知、未知）农药注册（中国、外国）中国国标方法2多残留分析（multiresidueanalysis）对待测样品中多类多种农药残留同时定性和定量（已知、未知）单种类农药多残留分析（有机磷、有机氯等）中国国标方法多种类农药多残留分析未知多类多种残留分析（快速扫描-MRSM）（CDFA、FDA、Canada）（一）专业术语三农残分析基本概念1添加回收率（fortifiedrecovery）空白样品中加入一定浓度某一种或几种农药（C1）后，其样品中此农药浓度测定值（C2）对加入值的百分率（F）。F=C2/C1*100%添加回收率旨在衡量测定值与真值之间的误差，是制定农残分析方法准确度和可行性的指标。一般以MRL值水平高一个数量级、低一个数量级和同一个数量级三个浓度水平进行添加，或者在1、5和10LOQ水平添加，测定添加回收率；可以单个农药添加测定单残留添加回收率，也可多种农药同时添加，测定多残留添加回收率。至少重复三次。测试样品具代表性（3-4种）。测试农药具代表性（4类-5类）。单残留回收率：80—100%，多残留回收率：70—120%。（一）专业术语三农残分析基本概念

2变异系数（Coefficientofvariation,CV）衡量回收率偏异程度，判定农残分析方法的精确度（重现性）指标。

CV=标准偏差/平均回收率*100%一般≤20%（一）专业术语三农残分析基本概念3检出限，定量限（1）检出限（limitofdetection）衡量仪器或方法灵敏度（检出目的物）的指标。要求低于测定目的物的MRL值（最好低一个数量级）。在色谱图上可清楚确认的分析目的物色谱峰的下限。通常为噪音3倍（S/N=3）。分为仪器检出限和方法检出限仪器检出限无样品基质存在，在与样品测定完全相同的条件下，某种分析仪器能够检出分析目的物的最小量或最低浓度。方法检出限有样品基质存在，在与样品测定完全相同的条件下，某种方法能够检出分析目的物的最小量或最低浓度。（一）专业术语三农残分析基本概念3检出限，定量限（2)定量限（limitofquantitation）衡量仪器或方法灵敏度（定量目的物）的指标。在色谱图上可准确定量分析目的物色谱峰值的下限。通常为噪音10倍（S/N=10）。分为仪器定量限和方法定量限仪器定量限无样品基质存在，在与样品测定完全相同的条件下，某种分析仪器能够准确定量分析目的物的最小量或最低浓度。方法定量限有样品基质存在，在与样品测定完全相同的条件下，某种方法能够准确定量分析目的物的最小量或最低浓度。（一）专业术语三农残分析基本概念3检出限，定量限（3）测定方法仪器检出限或定量限,用某分析目的物的最低浓度标样测定。Agilent仪器化学工作站可以直接测定S/N。如:α-BHC标样浓度为0.01ppm，S/N=30，则仪器LOD=0.001ppm,仪器LOQ=0.003ppm方法检出限或定量限,用添加某分析目的物最低浓度水平或预测水平的样品，经过该方法的全部操作程序测定。重复实验两次。如:α-BHC添加在韭菜中，CDFA方法添加水平为0.01ppm，样品最终浓度为0.01ppm，S/N=12，方法LOD=0.0025ppm，方法LOQ=0.008ppm。（一）专业术语三农残分析基本概念4农残分析方法认证指标准确度（Accuracy）真值（truevalue）回收率精密度（Precision）重现性（reproducibility），变异系数灵敏度（sensitivity），检出限，定量限仪器线性范围（Linearity），标准曲线（standardcurves）（五个不同浓度，覆盖三个数量级或1X,5X,10XLOQ水平）相关系数（R≥0.9900),测定天数（≥3days）（一）专业术语三农残分析基本概念5农残分析质量保证和质量控制（QA/QC）试剂空白实验（reagentblank）（每日）基质空白实验（matrixblank）（每日）农药标样（基质中添加农药混合标样；至少两种基质；2XLOQ水平）（每日）添加回收率（添加混标，轮换添加）（每日）LOD、LOQ、仪器、方法（仪器、方法条件改变时）仪器线性关系、标准曲线、相关系数（至少三天）三农残分析基本概念6最大残留限量（MaximumResidueLimit，MRLs）在农畜产品中农药残留的法定最高允许浓度，又称最高残留限量，以每千克农畜产品中农药残留的毫克数（毫克/千克）表示。制订目的：控制食品中过量农药残留以保障食用者安全，对超标的产品采取措施，即禁止食用。推行和指导合理用药，农产品监测超标时，表明未按规定用药。减少国际贸易纠纷，各国均制订本国的MRLs，国际组织FAO/WHO也制定其相应的MRLs标准。制订方法：按照农药标签上规定的施药剂量和方法使用农药后，在农产品中的最大残留浓度，其数值必须是毒理学上可以接受的，由各国政府部门按法规公布。在农残检测中，以MRL值判断是否超标。（一）专业术语食品中农药的最大允许残留限量（mg/kg）（强制性国家标准）谷类稻谷蔬菜水果食用油茶叶辛硫磷敌百虫亚胺硫磷甲胺磷乙酰甲胺磷二嗪磷杀螟硫磷甲拌磷倍硫磷敌敌畏呋喃丹久效磷甲基对硫磷毒死蜱乐果马拉硫磷对硫磷0.050.10.50.20.15.00.020.050.10.1（成品粮）0.053（成品粮),80.10.10.50.020.10.050.10.50.20.50.5不得检出0.050.2

1（叶菜）1不得检出不得检出0.05（全果）0.10.50.50.50.5不得检出0.050.21（梨果）0.3（柑桔）1不得检出不得检出不得检出不得检出0.01不得检出0.05（棉籽油）0.1（棉籽油）0.05（棉籽油）不得检出不得检出0.5摘自“农产品农药残留限量标准汇编”农业部农药检定所2001.9（二）基本程序前处理仪器分析预处理农残分析提取净化浓缩ECD、ELCDFPD、NPDAED、XSDGCHPLCGC/MSLC/MSEI、CI其它UV、FLD、DAD样品采集贮藏ESI、APCITLC、CEELISA

（三）农残分析结果计算与表述

（外标法，单点定量）第二部分农残检测技术综述（一）农残检测前处理技术简介一样品予处理取样：均匀、代表性处理：水样，过滤；土样，阴干、研细、过筛（40目）；动植物样：高水分（水果、蔬菜），切块、食品加工器中加工低水分（粮食）磨碎，过筛高脂肪（畜产品），切块，搅肉机中加工。（一）农残检测前处理技术简介二提取用溶剂把分析目的物从样品中溶解抽提出来。溶剂的选择：目的物溶解度大，基质干扰物溶解度小，纯度高（农残级、HPLC级、分析纯重蒸，浓缩200X，仪器检测）（一）农残检测前处理技术简介二提取按溶剂类型分类乙腈法—CDFA（US）Dr.Mill乙酸乙酯法—欧盟法(Sweden)丙酮法—FDA（US）Dr.Luke混合溶剂法（乙腈-丙酮-甲醇）—FDA（US）（测定牛奶中有机磷、有机氯）（一）农残检测前处理技术简介二提取按样品类型分类浸泡、振荡、索氏提取-土壤（非结合残留）匀浆外搅拌器：水果、蔬菜、茶叶、粮食，（脂肪<2%）。内搅拌器：畜产品，（脂肪>2%）其它—SFE，超声波提取（一）农残检测前处理技术简介三净化1液液萃取法（LLE）分析目的物在两种不相溶的溶剂中进行分配。利用目的物与干扰物在两种不相溶的溶剂中溶解度差异而达到分离目的。根据目的物与干扰物性质，选择溶剂对。传统方法多采用（如国标法）。逐渐被取代（费时、费试剂、回收率易偏低）。乙酸乙酯高丙酮乙腈农药回收率高较好高除脂肪

一般好好好

较好一般好一般

低低除蛋白较好好好除糖份较好除水分一般一般较好GC兼容性较好SPE兼容性一般一般好GPC兼容性一般挥发性一般一般成本较高毒性低低较低较低有机溶剂提取效果比较（一）农残检测前处理技术简介三净化

2固相萃取法SPE固相微萃取法SPME分析目的物在键合硅吸附剂与溶剂中进行分配，而与干扰物分离。原理：如图1，图2适用范围广，各种不同结构类型的SPE商品柱适用于各种结构类型的农药分析。如表1优点：如表2已成为农残分析主要前处理手段，代替LLE。发达国家广泛应用，我国正在推广。Next（一）农残检测前处理技术简介图1（一）农残检测前处理技术简介图2Back（一）农残检测前处理技术简介键合官能团分析官能团基质典型洗脱溶液应用范围非极性萃取C18-OcatadecylC8-OctylC2-EthylCH-CyclohexylPH-PhenylCN-End-cappedCyanopropyl疏水基：芳香环烷基链水基质：水缓冲溶液生物流体甲醇乙腈乙酸乙酯氯仿酸化甲醇己烷滥用药物肽农药治疗类药物的监测极性萃取CN-Cyanopropyl2OH-DiolSl-SilicaNH2-Aminopropyl亲水基团：羟基胺基杂原子（S.O.N)非极性基质：己烷油类氯仿脂肪类甲醇异丙醇丙酮维生素D代谢物脂肪分离油类添加剂碳水化合物酚类阳离子交换萃取SCX-BenzenesulfonicAcid(Strong)PRS-PropylsulfonicAcid(Strong)CBA-CarboxylicAcid(weak)阳离子：胺类嘧啶类水基质：水酸性缓冲溶液生物流体碱性缓冲溶液高离子强度缓冲溶液儿茶酚胺类除草剂药物阴离子交换萃取SAX-QuaternaryAmine(Strong)PSA-Primary/SecondaryAmineNH2-Aminopropyl(Weak）DEA-Diethyl-aminopropyl(Weak)阴离子：羧酸磺酸磷酸盐（或酯）水基质：水碱性缓冲溶液生物流体酸性缓冲溶液高离子强度缓冲溶液有机酸维生素脂肪酸磷酸盐（或酯）表1（一）农残检测前处理技术简介键合官能团分析官能团基质典型洗脱溶液应用范围共价萃取PBA-Phenyl-boronicAcid连位二醇水基质：碱性缓冲溶液生物流体酸性缓冲溶液酸化甲醇核苷酸类核苷类碳水化合物儿茶酚胺类特殊相BondElutCertify阳离子型滥用药物药物水基质：水酸性缓冲溶液生物流体强酸强碱酸/碱性有机混合物碱性药物中性药物BondElutCertifyII阴离子型滥用药物药物羧酸磺酸水基质：水碱性缓冲溶液生物流体强酸强碱酸/碱性有机混合物酸性药物EnvirElut疏水基：芳香环烷基链水基质：水流体己烷二氯甲烷油、油脂、脂肪农药酚类多环芳烃续表1（一）农残检测前处理技术简介键合官能团分析官能团基质典型洗脱溶液应用范围特殊相AccuCAT阴，阳离子水基质：水生物流体缓冲溶液酸性/碱性缓冲溶液高离子强度缓冲溶液有机酸儿茶酚胺类碱性药物TCA疏水基：芳香环烷基链水基质：生物流体甲醇碱性甲醇TricyclicsBenzodiazepinesLMS疏水基：芳香环烷基链水基质：水流体乙腈药物ENV疏水基：芳香环烷基链水基质：水流体乙腈甲醇乙酸乙酯爆炸物农药PPL疏水基：芳香环烷基链水基质：水流体甲醇乙酸乙酯酚类续表1Back（一）农残检测前处理技术简介

项目方法液-液萃取法（LLE)固相萃取法(SPE)取样量1000ml×42-200ml×4包装运输贮藏大量水样少量柱或溶剂（田间过柱、洗脱或实验室洗脱）萃取有机溶剂用量操作时间100ml/样0.5小时/样（萃取），4—8小时（脱水）/样8ml/样5—10分钟（过柱，100ml)6分钟/样（转移、定容）浓缩100ml

1ml(100倍）20分钟不需浓缩过键柱时100ml1ml(100x)净化过净化柱不需净化总耗时间6—10小时/样10—20分钟/样优缺点费时、费溶剂、设备复杂结果准确度、精密度较低省时，省溶剂、操作简单、易实现半自动化、自动化，结果准确度、精密度较高表2固相萃取法与液-液萃取法操作比较Back（一）农残检测前处理技术简介三净化3凝胶渗透法（GPC）.原理：基于物质分子大小和形状不同来实现分离的。主要依据相对分子量的差别，通过GPC将农药与农药、农药与共提取物分开。从而使之得到分离和净化。（大多数农药分子量小于500）如图3优点：净化容量大，适用于有机磷、有机氯农药的提取，去除脂肪和色素。大多数农药回收率较高。容易实现自动化。缺点：凝胶柱成本较高，溶剂用量大。欧洲应用的较多。（一）农残检测前处理技术简介图3（一）农残检测前处理技术简介三净化4超临界萃取法（SFE）用超临界流体为萃取剂，从复杂组分中把目的物组分提取出来。原理：依据超临界流体中不同物质的溶解度不同达到分离的目的。优点：①快速方便、选择性强；②流体密度、溶解度、粘度都能通过压力控制；③超临界流体常温下可自然挥发，省去了浓缩步骤；④可与GC、LC及超临界色谱联机；⑤样品用量少、回收率高等。缺点：①设备投资大、技术要求高；②分析物质浓度过高干扰检测；③基质对萃取过程影响较大；④适用的农药和样品范围较窄SFE是农药多残留分析中具有发展前景的技术。（一）农残检测前处理技术简介三净化5其它：磺化法、冷冻法、凝结沉淀法。磺化法：利用脂肪和蜡质能与浓硫酸进行磺化反应的原理，有效去除基质中的脂肪和蜡质（前提是测定的农药不与硫酸反应，常用于有机氯农药检测）。冷冻法：低温下有机溶液里，动植物中脂肪、蜡质沉淀析出，而农药留在溶液中，达到分离目的。凝结沉淀法：用凝结剂将脂肪和色素等杂质沉淀的净化方法，适用于极性较强，在水中有一定溶解度的农药。（一）农残检测前处理技术简介四浓缩真空旋转蒸发法：处理溶剂量大、速度快、损失率高。KD浓缩器：处理量大、农药提取较充分、损失率较真空旋转蒸发器低、耗时较长。氮吹仪：浓缩效率高，农药损失率低，溶剂处理量小，与SPE净化方法结合是理想的浓缩装置。自然挥发法：浓缩慢，适于体积小，易挥发的溶剂。（二）国外农残检测技术发展趋势一趋势:对农产品,食品安全高度重视,表现在:-体系完备；法规、标准健全；机构、人员、设备完善-监控、检测及时有力；确保消费者身体健康和商品在国际市场上的竞争力

为达到ISO9000和各国政府法律法规和标准（如GLP），要求检测技术：-检测能力大-方法指标严-样品处理量小-分析目的物种类,数量多-准确度精确度灵敏度要求高-数据文件处理量大（二）国外农残检测技术发展趋势二概况:GC-挥发性农药快速筛选HPLC-半挥发,不挥发,极性,热不稳定性农药确证(结构鉴定)-GC/MS,LC/MS分析目的物-母体,农药代谢物,降解产物,结合残留（二）国外农残检测技术发展趋势

1前处理技术(1)传统技术如液-液萃取(LLE);索式提取(SoxhletExtraction);振荡-过滤(Shake-Filter);匀浆(blending)等仍在使用(参考文献1)。(2)最大进展是固取萃取(SPE)广泛用于农残分析,集萃取、净化、浓缩于一步,具有缩短分析时间,降低成本,节省有机溶剂,可实现半自动化,全自动化操作等优点(参考文献2,3)。(3)用活性碳柱和SPE柱净化,GC/MS和HPLC-FLD，检测水果,蔬菜中200多种有机氯、有机磷、含氮和氨基甲酸酯类农药残留方法已发表(参考文献7)。二概况:（二）国外农残检测技术发展趋势二概况:1前处理技术(4)非极限萃取(nonexhaustiveextraction)、用SPE拄(Cartridges)和膜(disks)结合GC和GC/MS方法，在线和非在线液体提取；固相微萃取(SPME)；超临界萃取(SFE)；基质固相分散萃取(Matrixsolid-phasedispersionextraction)；苯乙烯-二乙烯基苯共聚物萃取；多孔碳柱和SPE拄或膜(特别是C8,C18)结合使用；加速溶剂萃取(acceleratedsolvantextraction)；微波萃取；钝化扩散聚合物膜(passivediffusionthroughpolymericmembranes)；离心分离层析；自动液-液、索氏和SPE萃取；自动化凝胶渗透层析；液体样品经固相沉淀后，SFE萃取水中挥发和半挥发农药；顶空SPME等前处理技术，在制备液体和固体样品时如何应用均有报导(参考文献4,5,6)。（二）国外农残检测技术发展趋势

二概况:2GC,GC/MS(1)高效毛细管柱(非极性和中等极性固定相）,双柱定性定量代替传统填充柱。(2)广泛使用元素选择捡定器(ECD,FPD,NPD等)。(3)GC/MS和GC/MS-MS作确证和结构鉴定。(4)SPE结合GC/MS，提供了有效和强有力的分析系统。(5)用原子发射捡定器(AED)可以筛选400多种农药残留。(6)手性高分辨率GC/MS用于选择性检测农药异构体和对映异构体。（二）国外农残检测技术发展趋势二概况:3HPLC，LC/MS(1)C8、C18反相柱最常用于HPLC农残检测。(2)吸附柱(silica,gel)；极性键合柱(cyano,amino)；离子交换；离子色谱(IC)；离子对；混合官能度柱(multimodal)也用于特殊分析。(3)HPLC-SFC/MS改善选择性,达到净化测定一体化(4)固定和可调波长UV-VIS检定器常用于HPLC农残分析，二极管陈列UV-VIS检定器和MS，提供农药结构鉴定,其他如FLD和电化学检定器用于单个或多个检定器系统。(5)LC/MS和LC/MS-MS(ES)用于农药多残留分析已有报导。（二）国外农残检测技术发展趋势二概况:4CE(capillaryelectrophoresis),IC(ionchroniatography)和其他色谱(1)SFC(超临界色谱)结合SFE用于土壤中农药分析。(2)欧洲广泛应用高效自动化薄层层析(TLC)定量检测饮用水中污染物。(3)CE,CE/MS和IC分离,测定作物和其他基质中农药、农药代谢物残留和无机物残留是很大进展。用CE分析大豆中多种极性农药是一个典型例子。(4)CE,IC和AAS(原子吸收),ICP-AES,ICP-MS结合用于重金属分析（二）国外农残检测技术发展趋势二概况:5生物技术方法(1)特异性抗体的开发，导致免疫分析方法(Immunoassay)用于实验室和田间农残分析。

(2)免疫分析商品化检测试纸，在分析有机磷、氨基甲酸酯、硫代氨基甲酸酯、氯代苯氧羧酸、均三氮苯、苯胺、有机氯等农药残留成为有价值的方法。(3)免疫分析用于大监测项目、农药登记、代谢物研究、亲合色谱(affinitychromatography)、食品调查、人类和环境对农药暴露研究等方面。

（三）国内农残检测面临任务形势:1.农药生产产量40万吨,居世界第二位(仅次于美国)，其中杀虫剂占总量70%；有机磷杀虫剂占杀虫剂产量70%；甲胺磷,甲基对硫磷,对硫磷,氧乐果，久效磷又占有机磷杀虫剂产量70%。

2.农药使用年使用量27万吨居世界前列；使用区域集中(江苏,浙江,山东等)；施用作物-蔬菜,播种面积占农作物10%,单位面积施药量最大,年人均占有量最大(300公斤)（三）国内农残检测面临任务3.农药污染(蔬菜)1)2001年全国23个城市181种蔬菜检测,超标率47.5%。2)某省五个菜市场抽检48个菜样,44个不合格,高毒农药检出率达30%。3)北京部分市场检测超标率18%,自产有机磷超标率17%,进京菜农药超标率69%。4)上海,广西,天津相继发生甲胺磷污染蔬菜造成急性中毒事件,中毒人数达数百人。5)调查结果表明，有机磷(甲胺磷,乙酰甲胺磷,氧乐果,敌敌畏等)和氨基甲酸酯(克百威)是造成蔬菜中农残超标,引发急性中毒的主要农药品种。（三）国内农残检测面临任务基于上述情况造成农产品(蔬菜),污染严重国际市场-出口受阻(面临法规,标准;检测技术,方法的严重挑战)。国内市场-消费者忧心重重(放心工程)。农业部实施无公害食品行动计划，建立农药残留检测系统。急需建立与国际接轨的农残检测技术,标准操作程序(SOP)和GLP实验室,取代我国现有检测农药品种数量单一、前处理复杂、费时、灵敏度，准确度差的农残检测方法，以出具科学,公正,国际认可的农残检测数据。（四）CDFA-MRSM特点一简介CDFA-MRSM是由CaliforniaDepartmentofFoodandAgriculture(CDFA)下属CenterofAnalyticalChemistry(CAC)开发的农药多残留快速扫描技术(Multiresiduescreenmethod-MRSM)适用于新鲜蔬菜水果中四大类（有机磷、有机氯、拟除虫菊酯、氨基甲酸酯）200多种农药母体、代谢物、降解产物的检测固相萃取代替液-液萃取,氮吹仪浓缩代替旋转蒸发仪,双毛细管柱、双检定器、GC、HPLC定性定量，GC/MS确证是美国农业部(USDA)、FDA、EPA认可的官方方法在加州CDFA、佛罗里达州FDOACS(FloridaDepartmentofAgricultureandConsumerServices)和WashingtonDepartmentofAgriculture等实验室使用，质量保证和方法认证程序，遵从美国农业部农药数据库项目(USDA、PDP)和EPA、FDA的GLP规定97年引入中国，在农业部环境监测总站（天津），Agilent实验室，北京锦绣大地农业股份有限公司检测中心验证和应用，即将批准为国家标准和农业行业标准检测方法。

二CDFA-MRSM在中国实验室验证技术指标表

项目

类别添加浓度范围（ppm）平均回收率（%）变异系数MDL（ppm）Agilent实验室CH:0.01-1.00OP:0.05-3.00CARB:0.05-0.5070-120%<20%CH:0.0001-0.0480(μECD)OP:0.0250-0.6000(FPD)CARB:0.0010-0.0030(FLD)

农业部环境监测总站（天津）CH:0.01-4.25OP:0.05-2.00CARB:0.10-0.5570-120%<20%CH:0.0011-0.1154(ECD)OP:0.0065-0.1725(FPD)0.0104-0.8625(NPD)CARB:0.0051-0.0106(FLD)北京锦绣大地检测中心CH:0.01-1.00OP:0.05-3.00CARB:0.05-0.5070-120%<20%CH:0.0001-0.0170(μECD)OP:0.0100-0.2000(FPD)CARB:0.0010-0.0020(FLD)CDFACH:0.2–1.6OP:0.25CARB:0.2570-120%<20%0.005-0.2三方法评价

CDFA-MRSR与传统方法比较MRSM（CDFA)传统方法(国标方法)萃

取方式固相萃取液-液萃取溶剂用量15ml士/样100ml士/样时间10-15分/样（不需脱水）60-120分/样（脱水）浓

缩仪器氮吹仪旋转蒸发仪或K-D浓缩器时间3-5分/样15-20分/样损失率<3%10-20%或<10%净化时间不需净化柱层析（有机氯），30-60分/样溶剂用量0ml/样50-100ml/样前处理总消耗时间0.5-1小时/样2-3小时/样（有机磷）8-12小时/样（有机氯）检测农药类型一次处理可同时检测有机磷、有机氯、菊酯、氨基甲酸酯类不同农药采用不同方法分别处理检测农药数量200种（一次处理）其中：有机磷80种、有机氯、菊酯100种氨基甲酸酯20种34种（分类处理）其中：有机磷20种有机氯11种菊酯3种检测准确度、灵敏度步骤简单、损失小；毛细管柱，双柱、双检定器同时定性、定量。检测准确度、灵敏度高。步骤多、易损失；一般用填充柱、单检定器定性、定量检测时间未知扫描200种（一次处理）1-1.5小时/样<20种/类(一次处理)4-13小时/样方法特点省溶剂、省时、省工；前处理设备简单，一次处理检出农药多，适合于未知农药多残留快速扫描。用于果蔬批发市场和生产基地，进出口基地执法检测。溶剂、时间、人工消耗较多，前处理设备复杂（索氏提取器、K-D浓缩器、旋转蒸发器）；一次处理检出农药少，适于已知单残留检测。难以满足市场检测需要。方法项目

CDFA-MRSM与酶法比较检测方法酶法MRSM法（CDFA)检测农药类型1.有机磷2.氨基甲酸酯1.有机磷2.氨基甲酸酯3.有机氯4.拟除虫菊酯检测农药数量约20多种（仅1，2类）约200多种（其中1类80多种，2类20多种，3、4类100多种）检测蔬菜品种叶菜类；不适于果菜及根菜类适用于各类蔬菜（叶菜、果菜、根菜、茎菜等）检测灵敏度有的农药灵敏度很低，如：甲胺磷感度为65.62ppm对各类农药灵敏度均较高，如：甲胺磷可检出0.01-0.05ppm检测方式可在现场检测（便携式）在实验室进行检测准确度对残毒愈高的样品误差愈小用双色谱柱双检定器同时定性定量，准确度均较高检测数据的可靠性通常检测数据不能直接作为执法依据，还需用化学法验证后方可生效检测数据可直接作为执法依据检测时间与成本快速、简单、易操作、成本低较酶法慢，一个样品扫描200种农药需1.0-1.5小时。成本高。

FDA、CDFA、Canada方法比较方法提取溶剂SPE柱农药数量回收率综合比较FDA（GC、HPLC、GC/MS)丙酮C18,SAX100以上80-110%甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧乐果、氯硝铵、异菌脲R>80%成本高，步骤多（LLE，CH2CL2)灵敏度、准确度高CDFA（GC、HPLC、GC/MS)乙腈FL,NH2-Propyl20070-120%成本较低快速简便（无LLE，少量CH2CL2)Canada(GC/MS)乙腈C18,

EnvirocarbNH2-Propyl;Chorcoal-celite20170-110%DDVP、甲胺磷、乙酰甲胺磷、百菌清、氯硝铵R<70%成本较高简便快速（无LLE，CH2CL2)（五）CDFA—MRSM要求的仪器配置

农药类别仪器进样器色谱柱检定器数据处理有机氯、菊酯类GCAgilent6890自动进样器HP-1或DB-130m×0.25mm×0.25μmHP-50+或DB-1730m×0.25mm×0.25μmECDECD一台化学工作站控制二台气谱有机磷类GCAgilent6890自动进样器HP-1或DB-130m×0.53mm×1.5μmHP-17或DB-1730m×0.53mm×1.0μmFPDFPD氨基甲酸酯类HPLC(带柱后衍生系统)Agilent1100Pickering5200自动进样器或手动进样C84.6mm×250mm，5μC184.6mm×250mm，5μFLD积分仪或化学工作站确证GC-MSAgilent5973自动进样器HP-5MS30m×0.25mm×0.25μmMSD化学工作站（六）保留时间锁定功能

保留时间锁定软件（RetentionTimeLocking）介绍气相色谱是现代分析仪器当中分析复杂有机样品的有力工具。气相色谱依据样品当中不同化合物在同一根色谱柱上保留时间的差异对其进行定性分析。在不同的操作条件下，不同的仪器上同一化合物的保留时间会发生漂移。即使在同一台仪器上，相同的操作件下，由于载气压力的变化或者由于色谱柱的长度发生变化同样会导致化合物的保留时间发生变化。所有这些都给化合物的定性带来困难。Agilent公司独有的保留时间锁定软件利用6890N气相色谱精确的EPC控制技术，通过绘制保留时间与载气压力的关系曲线，可将目标化合物的保留时间牢牢锁定。而分析方法一旦被锁定，在其被移植到其它仪器上时，也能确保目标化合物的保留时间保持恒定。第三部分CDFA-MRSM标准

操作程序(SOP)（一）流程示意图技术关键:1.前处理采用固相萃取2.气相色谱配置双柱双检定器液相色谱配置荧光检定器和柱后衍生系统3.用气质确证称样溶剂提取静止分层，取3份蒸发浓缩溶解（己烷）固相萃取柱（FL，1g）定容GC-ECD（100种）溶解（丙酮）定容确证GC-MS溶解（甲醇/二氯甲烷）固相萃取柱（NH2，0.5g）微孔滤膜LC-FLD（20种）定容微孔滤膜GC-FPD（80种）（二）操作程序一目的为了保证新鲜水果和蔬菜中的农药残留在法定的最大残留允许限量（MRLs）以下，达到安全农产品的要求，提供CDFA—MRSM方法的一个标准操作程序，以便对有机磷（OP），有机氯（包括拟除虫菊酯）（CH）和N—甲基氨基甲酸酯（CARB）类农药准确定性、定量。（二）操作程序二内容提纲1．仪器设备2．试剂和实验材料3．样品制备方法4．分析方法5．定性6．定量7．确证8．报告9．每日仪器状态测试10．农药标准品的管理及标样配制操作规程11．仪器常规维护

三正文1仪器设备食品加工器HobartChoppermodel8181或博郎食品加工机（1L,德国）恒温水浴锅（六孔或八孔)旋涡混合器匀浆机OMNIMIXERHOMOGENIZER17106氮吹仪N—EVAPNitrogenEvaporationSystemModels112气谱配有双电子捕获检测器（ECD）气谱配有双火焰光度检测器（FPD）液谱（梯度淋洗）配有柱后反应装置和荧光检测器（FLD）（二）操作程序三正文

2试剂和材料乙腈（农药残留级）丙酮（农药残留级）已烷（农药残留级）甲醇（农药残留级、色谱纯级）氯化钠（ACS级）检验不含有机干扰物，在120℃下烘过夜试剂1：NaOH溶液（0.5N）pickering®(cat.NOCB130)试剂2：OPAdiluentpickering®(cat.NOCB910O-Phthaladehyde(OPA)pickering®(cat.NO0120)Thiofluorpickering®(cat.No3700-2000)（二）操作程序三正文2试剂和材料具塞量筒（100ml）玻璃注射器（5.0ml，1.0ml）玻璃漏斗（60°,φ9公分，短颈3-4吋）刻度离心试管（15ml）聚乙烯塑料并（300ml，可在-18℃冷冻柜中放置）定量滤纸检验无干扰物（φ15公分）烧杯（100ml）移液器10.0mlFlorisil®固相萃取柱（1g，Agilent，AccuBONDII，PartNo.188-2460或Supelco，SupelcleanEnvi-Florislil，ReorderNo.57053)Aminopropyl®固相萃取柱（500mg，Agilent，AccuBONDII，PartNo.188-1050或Supelco，SupelcleanLC-NH2，ReorderNo.57014）（二）操作程序三正文

2试剂和材料微孔滤膜（0.2μmφ25mm，0.45μmφ13）样品瓶（棕色或无色，2ml，AgilentPartNo.5182-0554或5018-0864）标样储备瓶AgilentPartNo.5183-4529（16ml），5183-4530（40ml）GC预柱1.0m（Agilent脱活石英柱0.25mmPartNo.19091-60610；0.53mmPartNo.19095-60610）HPLC预柱C-18预柱（Pickering，4.6mm×4.5cmPartNo.18ECG002）

分析柱：

ECD100%聚二甲基硅氧烷（DB-1或HP-1）30m×0.25mm×0.25μm，HP-1PartNo.19091Z-433或J&W，DB-17PartNo.122-1732（二）操作程序三正文2试剂和材料FPD100%聚二甲基硅氧烷(DB-1或HP-1)30m×0.53mm×1.50μm，HP-1PartNo.19095Z-323；或J&W，DB-1PartNo.125-103250%聚二苯基甲基硅氧烷(DB-17或HP-50+)30m×0.53mm×1.0μm，HP-50+PartNo.19095L-023；或J&W，DB-17PartNo.125-1732MSDHP-5MS30m×0.25mm×0.25μm，HP-5MSPartNo.190191S-433HPLCC84.6mm×25cm，5μmPickering，PartNo.1846250C184.6mm×25cm，5μmPickering，PartNo.1846150（二）操作程序三正文3样品制备方法3.1样品处理a.每日从市场抽测蔬菜水果样品进行OP、CH、CARB类农药快速扫描，样品数量不少于5个，重量不少于454克。样品按照联邦法规40#(40-CodeofFederalRequlations)第180.1条规定的方法处理。不进行洗涤。

（二）操作程序下面列举某些样品的处理方法

种类处理杏仁和所有坚果去壳取果肉鳄梨去籽香蕉、芭焦去冠、去干、去皮豆类、利马豆、豆角全部甜菜、日本萝卜、小红萝卜根茎和叶子分别取样，检测胡萝卜去顶樱桃去籽柑橘类(桔子、柠檬、酸橙、柚子)剥皮椰子取果肉、果汁玉米去种皮日本萝卜同甜菜大蒜、洋葱去茎、去皮(剥净)葡萄去茎韭葱去根芒果去核下面列举某些样品的处理方法瓜去茎油桃去核葱去根番木瓜果去核豌豆全部桃去核花生只要花生仁青椒全部菠萝去皮李子去核小红萝卜同甜菜草莓去帽小南瓜带茎西红柿全部种类处理三正文3样品制备方法3.1样品处理b.对于较大样品如西瓜、土豆、茄子等先切成块，以适于在食品加工器中加工，切样品时，菜板上要垫牛皮纸，每个样品换一张，菜刀每个样品要冲洗一次。要保证样品均匀有代表性，不要切的太碎或成为液体。c.在食品加工器中加工样品，将加工好的样品装入聚乙烯瓶中（图4）。（二）操作程序图4.样品处理-切块、食品加工器加工三正文

3样品制备方法3.2.1

在匀浆机的玻璃瓶中准确称取50.0g或25.0g在食品加工器中加工好的样品（图5）。聚乙烯瓶中剩余的样品放入冷冻柜中保存。

在样品中加入农药标样，测定添加回收率(图6)。

（二）操作程序图5.样品萃取-匀浆机瓶中称取样品图6.在样品中加入农药标样，测定添加回收率三正文

3样品制备方法3.2.2.加入100ml或50ml乙腈(图7）（二）操作程序图7.加入乙腈提取液三正文

3样品制备方法3.2.3在匀浆机中高速匀浆2分钟（图8）。（二）操作程序图8.在OMNI匀浆机中高速匀浆三正文3样品制备方法3.2.4

在100ml具塞量筒内放10-15g或5-7.5gNaCl(图9)，放一铺有滤纸的玻璃漏斗，过滤匀浆好的样品(图10)。（二）操作程序图9.具塞量筒内加入NaCl图10.过滤样品三正文3样品制备方法3.2.5收集约80ml-100ml或40ml-50ml滤液。3.2.6盖上塞子，剧烈震荡1分钟。3.2.7在室温下静置约10分钟，让乙腈相和水相分层(图11）。（二）操作程序图11.静置分层（二）操作程序三正文3样品制备方法3.3样品净化3.3.1蒸发a.准确吸取10ml×3乙腈相溶液（上层）分别放入3个100ml烧杯中。b.将烧杯放在水浴锅（80℃）上用蒸汽加热，杯内缓缓通入氮气或空气流吹动（注意：气管距液面有一定距离），蒸发近干（图12）。分别加入2ml丙酮、2ml已烷和2ml1%甲醇/二氯甲烷溶液（v/v），盖上铝箔以免蒸发，用于OP、CH和CARB检测。图12.恒温水浴锅上蒸发赶走乙腈溶剂三正文3样品制备方法3.3样品净化3.3.2用于有机磷检测a．将烧杯中用2ml丙酮溶解的样品溶液，完全转移至15ml离心管中，再用约3.0ml丙酮分二次洗烧杯，并转移至离心试管，最后准确定容至5.0m。b．在旋涡混合器上混匀试管中的溶液。c．分别倒入二个气相色谱样品瓶中，用GC-FPD分析。d．混匀后，如样品过于混浊，可用0.2μm滤膜，放在5ml注射器顶端，将丙酮溶液过滤,再用GC分析。（二）操作程序三正文3样品制备方法3.3样品净化3.3.3用于有机氯检测a．Florisil®固相萃取柱（1g），用5ml10%丙酮/已烷（v/v）,条件化，再加5ml已烷。b．当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即将烧杯中用2ml已烷溶解的样品溶液加到已条件化的Florisil柱上，并用15ml离心管接受洗脱液。靠重力过柱，逐滴流下。如果流速过慢适当加点正压，使溶液成滴连续流下（图13）。（二）操作程序图13.有机氯样品用FlorisilSPE柱净化

三正文3样品制备方法3.3样品净化3.3.3用于有机氯检测c．用5ml10%丙酮/已烷（v/v）洗烧杯，当液面到达柱吸附层表面时，加到柱上洗脱。d．重复3.3.3.Ce．将15ml离心管收集的洗脱液放在氮吹仪（水浴温度55℃）上，通氮气或空气，缓缓蒸发至5.0ml。f．用已烷准确定容至5.0ml。g．在旋涡混合器上混匀试管中的溶液。h．分别倒入二个气相色谱样品瓶中，用GC-ECD分析。（二）操作程序三正文3样品制备方法3.3样品净化3.3.4用于N-甲基氨基甲酸酯检测a．aminopropyl固相萃取柱，用4ml1%甲醇/二氯甲烷（v/v）条件化。b．当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即加入用2ml1%甲醇/二氯甲烷（V/V）溶解的样品溶液，用15ml离心管收集洗脱液，靠重力过柱，逐滴流下（图14）。（二）操作程序图14.氨基甲酸酯样品用NH2SPE柱净化三正文3样品制备方法3.3样品净化3.3.4用于N-甲基氨基甲酸酯检测c．用2ml1%甲醇/二氯甲烷（V/V）洗烧杯，过柱。d．重复3.3.4.Ce．将15ml离心管收集的洗脱液放在氮吹仪（55℃）上，在缓缓的氮气或空气流下蒸发至近干（<0.1ml）（图15）。（二）操作程序图15.样品在氮吹仪上浓缩三正文3样品制备方法3.3样品净化3.3.4用于N-甲基氨基甲酸酯检测f．用甲醇准确定容至2.5ml。g．在混合器上混匀试管中的溶液（图16）。h．用0.2μm滤膜放在5ml注射器顶端，将甲醇溶液过滤，用HPLC分析。（二）操作程序图16.漩涡混合器上混匀样品（二）操作程序三正文

4分析方法

4.1进样程序遵循下列程序：溶剂、低浓度混标、高浓度混标、溶剂、样品（≯13个），低浓度混标。4.2有机磷扫描4.2.1仪器配置：气谱装有双柱（DB-1、DB-17）、双FPD（P型）、自动进样器，恒压控制、化学工作站或数据处理机。（Agilent6890）4.2.2进样量：1μl4.2.3操作条件：进样口220℃，检测器250℃，柱温150℃，保持2min，以8℃/min升温至250℃，保持12min；载气为氮气或氦气，流速分别为10ml/min或氦气DB-1，12ml/min；DB-1712ml/min，保持13min，以2ml/min速度增加至15ml/min，保持5min，氢气75ml/min，空气100ml/min。三正文

4分析方法

4.3有机氯扫描

4.3.1仪器配置：气谱装有双柱（DB-1，DB-17）、双ECD、自动进样器、恒压控制、化学工作站或数据处理机。（Agilent6890）4.3.2进样量：1μl4.3.3操作条件：进样口温度200℃，检测器320℃，柱温150℃，保持2min，以6℃/min升温至270℃，保持8min（溴氰菊酯保持23min）载气为氮气或氦气，流速分别为1ml/min或2.3ml/min,尾吹气为氮气60ml/min。4.3.4对于本底干扰大的样品，如绿菜花、洋葱、蒜，用4.3.1气谱上装有双ELCD（电解电导检测器）进2μl样品，进样口200℃，检测器250℃，柱温160℃，保持1min，以10℃/min升温至250℃，保持15min，氦气流速20ml/min，尾吹气氮气65ml/min。注：双柱为：DB-510m×0.53mm×2.65μm；DB-1730m×0.53mm×0.25μm.（二）操作程序三正文

4分析方法

4.4N-甲基氨基甲酸酯扫描4.4.1仪器配置：HPLC装有四元泵溶剂梯度淋洗系统，自动进样器，化学工作站或数据处理机（Agilent1100）；柱后衍生和双试剂系统（Pickering®PostColumnSystem），荧光检测器。4.4.2进样量：20μl（二）操作程序溶剂梯度

时间（min）乙腈（%）水（%）020802208016901018901018.12080三正文

4分析方法4.4N-甲基氨基甲酸酯扫描

4.4.3操作条件

a.CDFA：柱温42℃，流速1ml/min，荧光检测器（入ex330nm，入

em465nm）

（二）操作程序（二）操作程序时间（min）甲醇流速ml/min，甲醇（%）0.00

0.5ml/min0.00B15%2.00B25%8.00B25%9.00

0.8ml/min9.00B40%10.00B45%19.00B80%25.00

0.8ml/min25.00B80%26.00

0.5ml/min26.00B15%b．天津：溶剂梯度与流速三正文

4分析方法4.4N-甲基氨基甲酸酯扫描4.4.4柱后衍生：试剂1-0.5NNaoH，流速0.3ml/min；试剂2-OPA试剂，流速0.3ml/min；反应器温度—水解100℃；衍生：室温。

5定性双柱测得目的物的保留时间（RT）要与农药扫描表双柱标样的保留时间（RT）相符，对于GC，先出峰的RT误差≯0.005分钟，后出峰RT误差≯0.01分钟；对于HPLC，RT误差≯0.15分钟。（二）操作程序（二）操作程序三正文6定量6.1农药量计算6.1.1单点校正：

公式：×标样量（ng）=农药量（ng）注：a．测得的农药包括在每日检查仪器的混标中，用混标中相应标样的响应值和含量计算，b．测得的农药不包括在每日检测的混标中或者混标中峰面积变化>125%或<75%的目的物，要用相近浓度的单个标样校正，计算用校正标样的响应值和含量。c．标样量：气谱指1μl标样含标样量,液谱指20μl标样含标样量。三正文6定量6.1农药量计算6.1.2多点校正

公式：=农药量(ng)

注：配制至少三个浓度的单个标样，作标准曲线，计算斜率。

（二）操作程序三正文6定量6.2样品量计算6.2.1气谱分析或（二）操作程序三正文6定量6.2样品量计算6.2.2液谱分析或（二）操作程序三正文6定量6.3样品中农药残留量计算（以ng/mg或ppm表示）x(ppm)=6.3.1气谱分析单点校正：（二）操作程序三正文6定量6.3样品中农药残留量计算（以ng/mg或ppm表示）6.3.1气谱分析多点校正：6.3.2液谱分析

（二）操作程序三正文6定量

6.4添加回收率测定为了保证分析结果的准确，每日在分析市场样品时，要添加一组包含六种农药标样（三类农药）的混标到任意一个测试样品中，计算添加回收率。添加回收率应在70-120%范围之内。

（二）操作程序组别中文名称通用名添加水平(ppm)(50g样品添加1.0ml标样)1氨基丙氟灵Profenofos1.27甲噻硫磷Methidathion1.09氟乐灵Trifluralin0.25乙氧氟甲草醚Oxyflurofen0.11残杀威Propoxur1.05草肟威Oxamyl0.93下面列举三组作添加回收率的混标（丙酮）2毒死蜱Chlorpyrifos0.05甲噻硫磷Methidathion0.05乙烯菌核利Vinclozolin0.10七氯Heptachlor0.10草肟威Oxamyl0.25残杀威Propoxur0.253伏杀磷Phosalone2.18甲基对硫磷MethylParathion0.30氯硝铵Dicloran0.20呋喃丹Carbofuran0.54涕灭威亚砜AldicarbSulfoxide0.59涕灭威砜AldicarbSulfone0.73组别中文名称通用名添加水平(ppm)(50g样品添加1.0ml标样)（二）操作程序（二）操作程序三正文

7确证

发现样品中有超过最大残留允许限量的农药残留（简称超标），需要进一步确证，给出准确和精确的定性、定量结果。7.1在检测的当天，由另一位分析人员重新称取该样品，按照SOP程序重复分析，并将样品保存于冷冻室内，贴好标签（注明样品号、日期、超标农药、超标残留量）。

7.1.1有机磷确证在DB-1/DB-17双柱，双FPD测定基础上，再用不同的柱子如HP-5和不同的检测器如NPD和FPD（S型）进一步确证。

7.1.2有机氯确证在DB-1/DB-17双柱，双ECD测定基础上，再用不同的柱子如HP-5和不同的检测器如ELCD（如果可能）确证。三正文

7确证7.1.3氨基甲酸酯确证最初分析如在C18柱上进行，要用C8确