生物化学检验常用技术教学课件

第三章生物化学检验常用技术基电干电因泳化化光分学货增朽分分分术求技术术第一节光谱分析技术光谱分析技术是根据物质吸收或发吸收光谱分析技射辐射能而建立起来的一类分析方法,发射光谱分析技术散射光谱分析技术因不同分子的原子和原子团,其发射光谱和吸收光谱不同,而相同的物质在定条件下,其发射光谱和吸收光谐的强光谱分析技术是一种最常用的生化检度与该物质的含量成正比关系。因此可验技术,它主要包括吸收光谱分析:可见、紫外、红外分对物质进行定性和定量分析,此类技术光光度法和原子吸收分光光度法称为光谱分析技术。散射光谱分析:散射比浊法和透射比浊法发射光谱分析:火焰光度法、原子发射光谱法和荧光光谱法、吸收光谱分析法光是一种高速传播的电磁波,光的波长(2)的常用单位是纳米(nm),可见光波长00~760nm,<400n称为紫外光,>760nm称为红外光,波长愈短,能量愈大可见、紫外吸收光谱是由于多原子分子的价电子在电磁辐射的作用下,由基态跃迁到激发态,这种因物质分子对辐射能的选择性吸收而得到的光谱称为吸收光谱吸收光谱分析法包括可见、紫外、红外和原子吸收分析法。其中最常用的是可见光分析法,也被不严格地称为比色分析法,准确的名称应是可见光分光光度法用于比色分析的光源与被测溶液的颜色应为互补色0.575光源单色器吸收池检测器显示器「钨灯、卤钨灯350~100滤光片玻璃比色皿氢灯、氘灯180~360棱镜光栅石英比色皿(一)、分光光度技术的基本原理1、吸光度与透光度当光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况:一部分光被散射,部分光被吸收,另有一部分光透过溶液。设入射光强度为I,透射光强度为I,I和I之比称为透光度,即:入射光lo透射光1T×100%为T%称为百分透光度。透光度的负对数称为吸光度即A=-1gT=-1gI/Io=1gIo/2、Lambert-Beer定律当一束平行单色光通过均匀的非散射样品时,吸光度与溶液层厚度和溶液浓度成正比。loLambert-Beer定律适用于可见光、紫外光、红外光和均匀非散射的液体Lambert-Beer定律是讨论溶液吸光度冋溶液浓度和溶液层厚度之间关系的基本定律,该定律是分光分析的理论基础1.Lambert定律当一束强度为3amei定透过某种吸光溶液后,由于溶液吸收则透过的光线为I。当溶液浓度不变F液层愈厚,则光线强度的减弱愈显著合#Lame定与Ber定律可得说明吸光物质对单色光吸收的强度与物质的浓度和液层厚度成正比Beer定律当一束强度为l。的单色吸光系数的物理意义是吸光物质在单位浓七透过某种吸光溶液后,若液层厚度不变度及单位厚度时的吸光度,在给定条件下(波长、市浓不同时,溶液的度意大则透过液性,浓度取光系数是物乐的特常戴七的强度愈弱,其定量关系A=KC。K值愈大,能測定的浓度C愈小,则灵敏度愈高。当液层厚度不变时,吸光度与溶液浓意成正比,这就是Beer定律3、Lambert-Beer定律的应用条件Lambert-Beer定律适用于可见光、紫外光、红外光和均匀非散射的液体以及分散均匀的态或气态样品单色光的匀介质吸收物质元相互作用4、Lambert-Beer定律的偏离现象溶液:稀溶液、化学变化光学;非单色光、散射和折射仪器;光源、实验条件5、空白溶液的选择在分光光度法中,为消除显色剂及样品中各种共存有色物质产生的干扰、抵消比色皿和试剂对入射光的影响而用来调节仪器百分透光率为100%的溶液。蒸馏水剂品含待测元素不显1、溶剂空白:不加样品和任何试剂,用纯溶剂(如蒸馏水或其他有机溶剂)作参比溶液。先择原则:当显色剂及其它试剂均无色,被测试样中又无其他有色离子时,选用溶剂参比试剂空白:用不加样品,而显色剂和其他试剂都相同的溶液作参比溶液择原则:当显色剂本身有颜色或其它试剂有颜色,被测试样中又无其他有色离子时,选用试剂参比3、样品空白:用不加显色剂的样品溶液作参比溶液选择原则:当试样溶液有颜色,而试剂、显色剂均无颜色时,选用样品空白4、平行操作空白:按样品分析完全相同的操作步骤,用不含待测元素的样品进行平行操作以消除操作过程中引入干扰杂质所带来的误差选择原则:当操作过程中由于试剂、器皿、水和气等因素引入了一定量的被测试样组分的干扰离子5、不显色空白:可将一份试样加入适当的掩蔽剂,将被测组分掩蔽起来,使之不再与显色剂作用,而显色剂相当对均湖试料封有续包个以此作为参比溶液,这样可以消除显色剂和一些