消毒灭菌定稿

消毒灭菌定稿第1页，课件共47页，创作于2023年2月内容提要:一、物品清洗二、消毒灭菌方法1.物理法2.化学法第2页，课件共47页，创作于2023年2月一、清洗

体外细胞对任何有害物质都非常敏感培养器皿严格清洗，依材料不同选择不同清洗方法。第3页，课件共47页，创作于2023年2月1.常用玻璃器皿清洗浸泡刷洗浸酸冲洗烘干（晾干）第4页，课件共47页，创作于2023年2月（1）浸泡初次使用和培养使用后的玻璃器皿均需先用清水浸泡，以使附着物软化或被溶液掉。新玻璃器皿表面带有大量的干固的灰尘及对细胞有害的物质等。新瓶先用自来水简单刷洗，再用5%稀盐酸液浸泡过夜，以中和碱性物质。再次使用的玻璃器皿则常附有大量蛋白质，干固后不易洗掉，故用后要立即完全浸入水中。

第5页，课件共47页，创作于2023年2月（2）刷洗

浸泡后的玻璃器皿一般要用毛刷沾洗涤剂刷洗，以除去器皿表面附着较牢的杂质。刷洗要适度，过度会损害器皿表面光泽度。

第6页，课件共47页，创作于2023年2月（3）浸酸（关键）清洁液：由重铬酸钾、浓硫酸和蒸馏水配制而成。去污能力很强，对玻璃器皿无腐蚀作用。浸泡时器皿要充满，勿留气泡。浸泡时间一般为过夜，不应少于6小时。

注意：配酸时须穿戴耐酸手套和围裙。先重铬酸钾溶于水中，再缓慢加浓硫酸并不停搅拌。配制溶液应选择塑料制品。配成后一般为棕红色。时间长会变色失效第7页，课件共47页，创作于2023年2月清洁液的配制第8页，课件共47页，创作于2023年2月（4）冲洗：清水充分洗涤。可用洗涤装置或手工操作（20次）蒸馏水清洗3-5次去离子水冲洗一遍

（五）烘干用烘箱烘干或自然晾干第9页，课件共47页，创作于2023年2月2.胶塞、盖子等的清洗

不能用清洁液浸泡，常规清洗后，2％NaOH中煮10－20min，洗净晾干，再用1％稀HCL泡30min,冲洗，蒸馏水2－3次，三蒸水一次，晾干备用第10页，课件共47页，创作于2023年2月3、塑料制品的清洗2%NaOH浸泡过夜自来水充分冲洗5%盐酸溶液浸泡30分钟自来水和蒸馏水冲洗干净，晾干备用。第11页，课件共47页，创作于2023年2月二、消毒灭菌

（一）消毒灭菌有关概念

1消毒：指杀死病原菌，但不包括芽胞。用以消毒的化学药物称为消毒剂。2灭菌：是指杀灭物体上所有微生物3无菌：物品中没有活的微生物存在。4防腐：是指防止或抑制微生物生长繁殖的方法。同一种化学药品在高浓度时为消毒剂，低浓度为防腐剂5、无菌操作：防止细菌进入机体或物品的操作技术。第12页，课件共47页，创作于2023年2月擦拭法高压蒸汽灭菌法（二）常用消毒灭菌的方法物理法化学法浸泡法熏蒸法喷雾法热力消毒法生物净化法辐射消毒法燃烧法烤箱法煮沸法干热法湿热法日光曝晒法紫外线灯照射法电子灭菌灯法电离辐射法第13页，课件共47页，创作于2023年2月1.物理消毒灭菌法：（1）热力消毒灭菌法：①干热灭菌法：焚烧废弃物、尸体烧灼接种环、试管口干烤高温不损害、不变质、不蒸发物品第14页，课件共47页，创作于2023年2月干烤用于消毒玻璃器皿，利用干烤箱灭菌（160~170ºC，2h）优点：器皿干燥，易保存缺点：热传导慢，需较长时间和较高温度注意：消毒完不可突然开烤箱门，以免冷空气突然进入，影响消毒效果和损坏玻璃器皿或发生事故。第15页，课件共47页，创作于2023年2月干燥箱第16页，课件共47页，创作于2023年2月2、湿热消毒灭菌法：巴氏消毒法

62℃30秒牛乳、酒精煮沸法

100℃5分钟细菌繁殖体芽孢需1-2h流通蒸气消毒法

100℃15—30分钟繁殖体高压蒸气灭菌法

103.4kPa.121.3℃

15—20分钟芽孢第17页，课件共47页，创作于2023年2月高压蒸气灭菌法灭菌效果最好。高压蒸气灭菌器是一个密闭、耐高压蒸锅。

103.4kPa（1.05kg/cm2）温度可达121.3ºC15~20min，可杀灭包括细菌芽胞在内的所有微生物。常用于一般培养基、生理盐水、实验用品等耐高温、耐湿物品的灭菌。消毒前包装：用硫酸纸、牛皮纸或棉布等。离心管、瓶塞、滴管等可放入铝制饭盒中消毒。第18页，课件共47页，创作于2023年2月注意事项：1.灭菌包不宜过大，不超过30cm×30cm×25cm，放置时各包之间留有空隙，便于蒸汽流通。2.有孔的容器应将孔盖打开，以利蒸汽进入。3.布类物品放在上层，瓶装液体不宜过满（不超过3/4)。4.被灭菌物品应待干燥后，才能取出备用。5.定期监测灭菌效果。6.灭菌物品，有效时间十天至两周第19页，课件共47页，创作于2023年2月监测灭菌效果的方法有：1.物理监测法：用150℃或200℃的留点温度计，灭菌后检查其读数是否达到灭菌温度。

2.化学监测法：临床常用的有化学指示卡与化学指示胶带，化学指示卡放在包的中央，化学指示胶带粘贴在包的外面。

3.生物监测法：是最可靠的监测法，利用对热耐受力较强的非致病性嗜热脂肪杆菌芽胞作为指示剂。

第20页，课件共47页，创作于2023年2月高压蒸汽灭菌锅第21页，课件共47页，创作于2023年2月湿热与干热灭菌效果的比较热型温度（℃）时间布层内的温度（℃）灭菌效果（h）20层40层100层湿热90-105.33101101101.5完全干热130-1404867270.5不完全

湿热优势：1细菌蛋白质在有水的情况下易于凝固变性2湿热穿透力强3湿热蒸气有潜热存在，水蒸气凝固成水释放潜热，迅速提高被灭菌物体的温度第22页，课件共47页，创作于2023年2月日光曝晒法：6h可达消毒目的适用：被褥、床垫、毛毯、衣物等注意：定时翻动

利用紫外线或其他一些射线，使菌体蛋白质光解变性而死亡。（2）辐射杀菌法①日光曝晒第23页，课件共47页，创作于2023年2月②紫外线灯管消毒法UVA:UVB:UVC:第24页，课件共47页，创作于2023年2月②紫外线灯管消毒法最佳杀菌波长：253.7nm最佳温度、湿度：20℃以上，40％～50％，有效距离：物品：25～60cm,空气：＜2m照射时间：灯亮5～7min后记时，＞30min适用：室内空气、物体表面(穿透力差)特点：简单、方便、无损物品类型：悬吊式、移动式、屏幕式第25页，课件共47页，创作于2023年2月杀菌机制使菌体DNA失去转换能力而死亡；破坏菌体蛋白质中的氨基酸，使菌体蛋白光解变性；降低菌体内氧化酶的活性，使氧化能力丧失；使空气中的氧电离产生具有极强杀菌作用的臭氧。杀菌特点：可杀灭多种微生物，包括杆菌、病毒、真菌、细菌繁殖体等。第26页，课件共47页，创作于2023年2月房间内应保持清洁、干燥；被消毒物品不能有遮蔽，经常翻动。灯管表面保持清洁。温度过低或相对湿度过高，应延长照射时间。注意保护眼睛、皮肤，避免人体直接照射。注意保护灯管，关闭后勿即开和移动。定期监测紫外线消毒效果。定期测量灯的输出强度或建立使用登记本。紫外线消毒的注意事项第27页，课件共47页，创作于2023年2月紫外线灯管强度监测1.将强度测定仪置于灯管正中垂直1m处，开灯照射5min，仪表即可指示强度，若低于70μW/cm2时，应予更换。一般每3~6个月测定一次；2.无强度测定仪，则应建立使用时间记录卡，凡使用时间超过1000h，则应更换。第28页，课件共47页，创作于2023年2月

利用丙种（ｒ）射线或高能量电子束进行灭菌，又称“冷灭菌”，具有广谱杀菌作用。③电离辐射灭菌法特点：不使物品升温、穿透力强、操作 简便、成本低适用：忌热物品，如一次性医疗物品、精密器械、生物制品、药品、食品。第29页，课件共47页，创作于2023年2月

臭氧发生管利用电场作用，将空气中的氧气转换成高纯臭氧，依靠其强大的氧化作用而杀菌。

④臭氧灭菌灯消毒法注意：关闭门窗、离开现场，结束后 20～30min进入第30页，课件共47页，创作于2023年2月（3）过滤除菌法：

用物理阻流的方法除去液体或空气中的细菌，达到无菌的目的。主要用于不耐高温的血清、抗毒素、抗生素、药液以及空气等的除菌。第31页，课件共47页，创作于2023年2月用于滤过除菌的各式滤器第32页，课件共47页，创作于2023年2月

采用空气洁净技术，通过初、中、高三级空气过滤器，选用合理的气流方式，滤除0.5~5um的尘埃，达到空气洁净的目的。适用：手术室、烧伤、血液、器官移植 病房

生物净化法第33页，课件共47页，创作于2023年2月

定义：用化学药品进行消毒。

作用机制：

①使菌体蛋白质变性或凝固，②破坏细菌的酶系统③改变细菌细胞壁或胞浆膜的通透性，导致细菌死亡。

2.化学法第34页，课件共47页，创作于2023年2月消毒剂的主要种类、浓度及用途（1）酚类：作用：高浓度使菌体蛋白凝固，低浓度破坏细菌的细胞膜，使胞质内容物渗出浓度：石炭酸为2%-5%、来苏为2%用途：地面、器具表面和皮肤的消毒第35页，课件共47页，创作于2023年2月（2）醇类作用机制：损伤细胞膜，使菌体蛋白变性，灭活酶类浓度：乙醇70%-75%用途：主要用于皮肤的消毒和体温计等的浸泡第36页，课件共47页，创作于2023年2月（3）重金属盐类作用机制：（1）使细菌发生变性和沉淀（2）使细菌的酶活性丧失种类、浓度与用途：（1）1%硝酸银新生儿滴眼，预防淋球菌感染（2）2%红汞用于皮肤、粘膜和小创伤的消毒（3）0.05-0.01%升汞，非金属器皿的消毒第37页，课件共47页，创作于2023年2月（4）氧化剂：

机制：

（1）靠氧化作用，灭活酶类（2）使蛋白质变性种类和用途：（1）0.1%高锰酸钾，皮肤、尿道、水果等（2）3%过氧化氢，创伤、皮肤粘膜消毒（3）2%-2.5%碘酒,皮肤消毒（4）0.2ppm-0.5ppm氯，饮水和游泳池消毒（5）10%-20%漂白粉，地面、厕所与排泄物消毒第38页，课件共47页，创作于2023年2月（5）表面活性剂：机制：

（1）损伤细胞（2）灭活酶类（3）蛋白质沉淀种类和用途：（1）0.05%-0.1%新洁尔灭，皮肤粘膜消毒、浸泡手术器械（2）0.05%-0.1%杜灭芬，伤口冲洗，金属器械、塑料、橡皮类消毒第39页，课件共47页，创作于2023年2月（6）烷化剂：机制：

使菌体蛋白和核酸的烷基化

种类、浓度及作用：（1）10%甲醛，物品表面、空气消毒（2）

2%戊二醛，精密仪器、内窥镜等消毒缺点：对人体有一定的毒性，且有的有致癌作用，如β-内脂第40页，课件共47页，创作于2023年2月常用消毒剂的种类、浓度、用途及作用机制（一）种类常用浓度用途作用机制1.酚类

石炭酸

2.醇类

乙醇

3.重金属盐类

硝酸银

4.氧化剂

高锰酸钾

过氧化氢

氯

漂白粉

碘酒

3%-5%

70%-75%

1%

0.1%

3%

0.2-0.5ppm

10%-20%

2.0%-2.5%

器械、排泄物消毒

皮肤、体温计消毒

新生儿滴眼

皮肤、尿道、蔬菜、水果消毒

创口、皮肤粘膜消毒

饮水及游泳池消毒

地面、厕所与排泄物消毒

皮肤消毒蛋白质变性损伤细胞膜，灭活酶类

蛋白质变性凝固、干扰代谢

氧化作用,蛋白质变性与沉淀,灭活酶类

氧化作用,蛋白质沉淀第41页，课件共47页，创作于2023年2月种类常用浓度用途作用机制5.表面活性剂

新洁尔灭

6.染料

龙胆紫

7.烷化剂

甲醛

8.酸碱类

醋酸

生石灰

0.05%-0.1%

2%-4%

10%

5-10ml/m加等量水蒸发

按1：4--1：8配成糊状

外科手术洗手,皮肤粘膜消毒,浸泡手术器械

浅表创伤消毒

物体表面消毒,空气消毒

空气消毒

地面、排泄物消毒损伤细胞膜,灭活氧化酶活性,蛋白质沉淀

抑制细菌繁殖,干扰氧化过程

菌体蛋白质及核酸烷基化

破坏细胞膜和细胞壁,蛋白质凝固常用消毒剂的种类、浓