血红蛋白提取与分离及酶二轮复习 全国优质课一等奖

血红蛋白的提取和分离(P64)复习思考：“血红蛋白的提取和分离”实验理想的材料是什么？原因是？哺乳类动物成熟的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白。实验流程

血液组成成分

（1）洗涤红细胞

（2）释放血红蛋白

（3）分离血红蛋白

（4）透析血红蛋白1、样品处理3、纯化4、纯度鉴定2、粗分离SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白纯度凝胶色谱法进行纯化一、样品处理：1.洗涤红细胞洗涤的目的是什么？洗涤的方法是什么？洗涤干净的标志是什么？血液100mL3g柠檬酸钠低速短时间离心红细胞血浆吸出血浆红细胞5倍体积生理盐水搅拌10min重复洗涤3次，直至上清液不再呈现黄色去除杂蛋白（血浆蛋白）低速、短时间离心上清液不再呈现黄色一、样品处理：2.释放血红蛋白释放血红蛋白过程中，在洗涤好的红细胞加入了哪些物质，有什么用？目的分析：蒸馏水的作用是______________________________。加入甲苯的作用是____________________________。充分搅拌的目的是____________________________。使红细胞大量吸水涨破溶解红细胞的细胞膜加速红细胞的破裂一、样品处理：3.分离血红蛋白滤纸过滤脂类物质烧杯有机溶剂血红蛋白目的：方法：结果：分离血红蛋白与其他杂质高速、长时间离心20mmol/L磷酸缓冲液二、粗分离：透析血红蛋白透析的目的是什么？1mL1mL1mL除去血红蛋白中的小分子杂质三、纯化：凝胶色谱法本实验中使用的缓冲液的原因？

利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能。纯化的目的是什么？除去杂质蛋白注意：紧密、无气泡：成功：气泡会搅乱洗脱次序，降低分离效果红色区带均匀一致地移动实验流程：一、样品处理

目的：1、红细胞的洗涤

方法：

成功标准：2、血红蛋白的释放：3、分离血红蛋白

目的：

方法：

结果：二、粗分离

目的：

方法：三、纯化

目的：

方法：

紧密、无气泡：

成功：四、纯度鉴定

方法：

去除杂蛋白（血浆蛋白）低速、短时间离心；加生理盐水上清液不再呈现黄色蒸馏水、甲苯分离血红蛋白与其他杂质高速、长时间离心从上往下数第3层除去小分子杂质透析除去杂质蛋白凝胶色谱法气泡会搅乱蛋白质的洗脱次序红色区带均匀一致地移动SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳练习:血红蛋白是人和其他脊椎动物负责血液中O2或CO2运输的蛋白质。请回答以下有关问题：[来源:Z（1）蛋白质的提取和分离分为样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定四步，凝胶色谱法一般用于______这一步，凝胶色谱法是____________的有效方法；所用凝胶的化学本质大多为____________。（2）科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白，这种蛋白质具有极强的抗菌能力，受到研究者重视。分离该抗菌蛋白可用电泳法，其原理是根据蛋白质分子的________________不同而实现分离。（3）血红蛋白是一种含铁的蛋白质，它存在于____________中。若要根据某人血红蛋白的含量数据来判断其健康状况，则体检时________（选填“要”或“不要”）空腹做____________。若某人患有慢性贫血，则体检单上会显示血红蛋白含量_______________。（4）人口腔上皮细胞中____________（选填“含有”或“不含有”）血红蛋白，____________（选填“含有”或“不含有”）控制血红蛋白合成的基因，判断是否含有该基因的依据是____________。__[来源:学§科§网Z§X§X§K]纯化根据蛋白质的相对分子质量的大小分离蛋白质

多糖类化合物

带电情况,迁移速度

红细胞要

血液检查

低于正常值范围

不含有含有

同一生物体的所有体细胞都是由同一个受精卵有丝分裂而来的，含有相同的基因，且每个体细胞都含有该生物全部的遗传物质。一、果胶酶在果汁生产中的应用

组成：1、果胶酶作用：

影响因素：2、探究温度对果胶酶活性的影响（1）自变量：（2）因变量：（3）观察指标：（4）无关变量：二、加酶洗衣粉1、种类：2、原理：3、无关变量：

多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶、果胶酯酶提高出汁率、澄清