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全內反射荧光显撇镜医学实验05级张园郑雪飞宋一萌解依获发展与展曾优势应用分型及结构基原理发展历史发展历史英光显微镜的概念全内反動英光显做术的发展历程发展历史英光显微绕的概念胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;务有一些物质本身虽不能发荧光,但如最用荧光染料或樊光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,荧光显微饶就是对这类物质进行定性和定量研究的工兵之一。发展历史全内反射矩光显微术的发展历程在细胞生物学方面,传统光学显微镜始终不能解决生物枰本星微中的几个重要问题1.显微图像的信噪比不高;2.光娠对生物样本照射的损伤;3光学衍射所致的分辨极限(R≥0.61λ/nsin6):传统的光学显微镜由于受到光曈远场衍狲效应的影响存在分辦极,瑞利犄之归纳为R≥0.61λ/ninωu/2),其中R为分辦力,λ为成像光波破长,nsin如u/2)为物透的教值孔径,即NA值,u为孔径角,固此光学显微镜空间分辨板限~250nmo全内反射矩光显徽术的发展历程近年来人们开发出了一系列光学显微镜。其中,全内反射荧光显微术Totalinternalreflectionflu。rescencemicroscopy,TRFM是近年来新兴的一种光学成像技术。蛋后性量,方的产生光地动点动所死2019年196年Yanagida小M。ene小组该项技术已经应用到组用TRFM技又用这项技术许多单分子的研究中术首次在液体实现了限制在溶液中得到了丙烯酰胺胶体反射荧光子的荧光荧光标记的单将全』的纳米孔中的个蛋白质分子的成像单分子的三维和全新成像。90年代80年代早1965年Aeod等生物物理20新型物镜透镜、聚光20学家对TRFM技术Hirschfield世镜和超灵敏探测器的世及基本原理进行描完成了纪出现,使RM技术纪述,并探索了其生第一个得到充分发展物应用。全内反射艾光实验基本原理全内反射荧光显微镜的基本设计思路全内反射荧光显微镜的基本原理基本原理全内反射荧光显微镜的基本原理全内反射光显微、参兴的基本设计思路)令荧光激发原理全内反射荧光显微术是利用全内反射产生的消逝波激发样品从而使样品表面数百纳米厚的薄层内的荧光团受到激发荧光成像的信噪比大大提高。可以看到样品表面单分子的活动情况。这种方法的成像装置简单,极易和其它成像技术、探测技术相结合,目前已成功的实现l00nm甚至更低的空间分辨率。荧光激发原理<坐的别Refractedsn定律nisine1=n2sine2TRn1>n2当nl

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