园林物离体快速繁殖

园林物离体快速繁殖第1页，课件共28页，创作于2023年2月5.4.1污染污染：是指在组培过程中，由于真菌、细菌等微生物的污染，在培养容器内孳生大量的菌斑，使培养材料不能正常生长和发育的现象。污染的原因与控制：原因:(1)培养基及各种使用器具消毒不彻底;(2)外植体灭菌时不彻底，有菌残存在细胞组织中；（3）操作时人为因素带入；（4）环境不清洁；（5）超净工作区域污染。控制：器具灭菌；外植体；接种操作；环境条件；超净工作台。第2页，课件共28页，创作于2023年2月5.4.2材料死亡材料死亡的原因:外植体灭菌过度；污染；培养基不适宜或配置有问题；培养条件恶化。在生产过程中如何减轻或者避免植物材料的死亡？（1）选用比较温和的灭菌剂，降低药剂浓度，缩短消毒时间，选用其他部位，最好在生长季节取芽。（2）注意环境和个人卫生，严格按规程进行操作。（3）认真配制各种激素、母液、培养基，选用盐含量较低的培养基，也可试用1/2或1/4培养基，并调整各种激素额配比和用量，在培养基中适当添加抗生素、活性炭及必需的有机营养。（4）改善培养环境，及时转移和分瓶。（5）加强组培苗的过渡管理。第3页，课件共28页，创作于2023年2月5.4.3玻璃化玻璃化现象：玻璃化是试管苗的一种生理失调症状，当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状。第4页，课件共28页，创作于2023年2月玻璃化的影响是瓶内的小苗过度生长，但有用的苗很少。各种不同的花卉品种，玻璃化发生频率各不相同。在情人草中较少见；香石竹中则较普遍。据报道，已经从温度、光照、激素种类和浓度、琼脂用量、酸碱度、糖浓度、碳氮比、青霉素、乙烯等方面，对香石竹玻璃化苗的发生进行了研究。实验结果表明：玻璃化苗是在芽分化启动后的生长过程中，由碳水化合物、氮代谢、和水分状态等发生生理性异常所引起，它由多种因素影响和控制‘产生玻璃化的主要原因是：激素浓度；温度；湿度；培养基的硬度；光照时间；培养基成分。减少玻璃化现象的发生：可以通过降低培养基的水位；减少培养基中的含氮化合物的用量；增加光照强度；调整培养温度；降低培养基中细胞分裂素的用量；提高培养基的硬度等措施。第5页，课件共28页，创作于2023年2月5.4.4褐化褐化：褐化是指在组培过程中，由培养材料向培养基释放褐色物质，致使培养基逐渐变成褐色，培养材料也随之慢慢变褐而死亡的现象。第6页，课件共28页，创作于2023年2月褐化的发生是由外植体中的酚类化合物与多酚氧化酶作用被氧化形成褐色的醌类化合物，醌类化合物在络氨酸酶的作用下，与外植体组织中的蛋白质发生聚合，进一步引起其他酶系统失活，导致组织代谢紊乱，生长受阻，最终逐渐死亡。引起褐变的原因包括外植体本身、培养基及培养条件等方面的影响。（1）种类品种（2）材料的年龄和大小（3）光照（4）取材时间和部位（5）温度此外，培养基成分和培养方式等对褐化的发生也有一定影响。针对以上褐化的原因，在生产上我们该如何来减轻褐化现象？第7页，课件共28页，创作于2023年2月

为了防止外植体的褐变，需要选取酚类化合物含量较低的实验材料，选择无机盐含量较低，不加肌醇的培养基，并在较弱的光线或黑暗的条件中进行培养。

在培养基中加入抗氧化剂是防止褐变的有效措施。常用的抗氧化剂有抗坏血酸（VC）、柠檬酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇和聚乙烯吡咯烷酮（PVP）等。可用抗氧化剂溶液预先处理外植体，或者在抗氧化剂溶液中切割和剥离外植体。必要时还可以将几种抗氧化剂结合使用。也可以将抗氧化剂加入到培养基中。另一种方法是在培养基中加入0.5～1％的活性炭，吸附对生长有抑制作用的褐色醌类物质。应当注意的是：活性炭也能吸附培养基中的激素类物质，影响茎尖的分化和生长，因此在使用活性炭的场合，需要适当提高培养基中激素的浓度。还有一种办法是不断地（每隔1～2d）将培养物转移到新鲜的培养基上，以摆脱老培养基中褐色物质的不利影响。在使用液体培养基的情况下，这种方法相当有效。第8页，课件共28页，创作于2023年2月5.4.5黄化黄化：是指在组培过程中由于培养基的成分、环境、激素、碳水化合物等各种因素引起的幼苗整株失绿，全部或部分叶片黄化、斑驳。这一现象在植物组培中比较常见，特别在部分木本花卉中较为多见。第9页，课件共28页，创作于2023年2月引起黄化的原因:是培养基中的Fe的含量不足；各矿物质营养不均衡；培养环境通气不良，瓶内乙烯含量升高；激素配比失当；糖用量不足或长时间不转移糖已耗尽；pH变化过大；培养温度不适；光照不足等。解决方法是，首先在配制母液和培养基的制作过程中，要检查仪器设备是否准确，还要认真细致地核对每项称量的每一环节；及时转接培养物；使用透气的封口膜以改善瓶内通气状况；适当调节pH、激素配比和无机盐浓度；配制培养基时切记不要忘记加糖；控制培养室的温度；适当增加光照；另外，在培养基在添加抗生素类物质如青霉素、链霉素、头孢霉素等，有时也会出现幼苗黄化现象，应适当减少用量或停止使用。第10页，课件共28页，创作于2023年2月5.4.6变异和畸形变异和畸形：是指在组培过程中，由于激素、环境等因素的作用和影响，使组培苗的外部形态和内部生理发生变化，引起的畸形、矮化、丛生、叶片增厚、茎杆变扁呈扫把状、甚至中性也发生变化的现象。第11页，课件共28页，创作于2023年2月发生变异和畸形的原因主要是由激素的种类和浓度决定’其次,温度过高也有一定的影响。不同种类和品种发生变异的频率和程度各不相同，香石竹在使用BA时比KT更容易发生丛生变异，而且在较低浓度下，就会产生三叶轮生甚至成丛状的形态变异’这些变异植株下地后不能正常地生长和开花，是生产上不能使用的无效苗。一般BA的浓度高于0.5mg/L时，香石竹的丛苗开始明显增加，BA浓度在0.2mg/L并配合KT0.1-0.3mg/L时，可使香石竹多数品种的丛生率控制在3%-5%内。在非洲菊、勿忘我中也存在比较普遍的多心丛生现象，下地后表现为分宓多，开花难，且花枝细弱，品质差的特点。在非洲菊和勿忘我的黄色品种中比较突出。通过降低细胞分裂素的用量，可以稍有好转，但增值系数明显降低，是生产成本增加。在愈伤组织诱导中，添加2，4-D会加剧变异的发生。在非洲紫罗兰叶子诱导不定芽产生时，如果细胞分裂素浓度过高，会出现不定芽只长叶子，不见成苗的情况，而且在这些叶片的表面及边缘又会在生出不定芽。在非洲菊增值中，当BA大于5mg/L时，叶片就会出现皱缩和黄化。在激素比例不均衡时，也会出现一些畸形苗。因此，可以认为细胞分裂素浓度和种类是引起变异的主要因子。第12页，课件共28页，创作于2023年2月

在环境条件恶化和不适时，也会发生一些比较明显的形态变异和畸形。长时间的过低温度会使组培苗僵化、节间矮缩；而温度过高时，苗会徒长、细弱；有时在激素的共同作用下，还可能出现瓶内开花的情况。但瓶内开花除了与环境和激素有关外，还与接种外植体的生理年龄相关。有时由于激素等因素的作用，根部会出现只有1-2条根，但特别粗、极易脱落，从形态生观察就不正常，过渡的成活率很低。非洲菊在繁殖阶段BA过高，生根时NAA浓度也高时，均会出现根系不正常的现象。根据各个花卉品种的组培生长习性，可以通过降低细胞分裂素浓度，调整生长素与细胞分裂素的比例，改善环境条件等措施来减轻变异和畸形的发生及缓解发生的程度。

第13页，课件共28页，创作于2023年2月5.4.7增值率低下或过剩

增值率的高低，直接影响组培生产的成本和效益，也关系到一个有市场前景的优良品种能否很快转化为有竞争的产品，在生产上要千方百计的提高增殖率。但也要考虑到通过调整细胞分裂素浓度提高增殖率的同时，会出现增殖过剩，小苗分化过度，密集丛生，微型化，不能分株，甚至产生各种各样的形态变异，有的即使能分株，进行生根，但下地后还会保持旺盛的分生，以至发蓬过大不能正常的生产和开花。第14页，课件共28页，创作于2023年2月增值率低下或旺盛的原因关联性品种特性激素浓度配比第15页，课件共28页，创作于2023年2月组培苗瘦弱或徒长的原因（1）细胞分裂素浓度过高（2）温度过高（3）光照不足（4）培养基水分过多（5）通气不良第16页，课件共28页，创作于2023年2月5.4.8组培苗瘦弱或徒长正常的组培苗应当叶色浓绿，植株粗壮。如果在增殖阶段出现芽苗瘦弱，徒长或节间过长，这种苗应当转入生根培养时能够生根，在环境条件较好的情况下。也会稍转粗壮，但总体看来，苗的株型，叶色，叶片大小等性状还是差于生产正常的增殖苗；有时即便是正常或健壮的增殖苗，若生根阶段培养基不适宜或培养的环境条件得不到保障，往往根原基及根还未形成，就很快表现出小苗徒长，节间明显伸长，叶片变细，变薄，变嫩并出现黄化。这样的苗进行过度培养时，会出现萎焉和烂根，很容易死亡，过度成活率极低。第17页，课件共28页，创作于2023年2月措施（1）根据品种特点减少细胞分裂素用量.加速继代转瓶的速度，适当降低接种密度。（2）利用空调降低培养室温度。（3）提高光照强度和延长光照时间，充分利用较强的自然光作光源，调整摆放位置和密度（4）调整培养基硬度，改用透气膜作封口，进行培养基及环境因子的综合调整，力求获得最优质健壮的组培瓶苗。第18页，课件共28页，创作于2023年2月5.4.9不生根或生根率低在进行组培生产时，经常会碰到有的种类长时间不会生根或生根率很低，有时又是平时生根良好的品种突然长根不良或长根时间延长，无论是何种原因导致生根不好，这些苗出瓶后，在过度培养中，都和难再长出新的根系，多数情况下，这种苗移栽入基质后，不能适应外面的环境条件，有的很快死亡，有的1~2d后就开始腐烂。第19页，课件共28页，创作于2023年2月原因分析（1）种类和品种间的差异（2）激素种类和浓度（3）环境条件（4）繁殖苗基部受损第20页，课件共28页，创作于2023年2月改善措施（1）对于难生根的品种，借鉴相关或相似种类的文献资料，从激素的种类和水平，环境条件等方面进行综合调控。必要时添加有机物或减少盐分含量调整温度，光照和通气状况，改用滤纸桥进行液体培养。（2）掌握各个种类的操作要领和质量要求，切削繁殖苗基部时，刀要快，用力要均匀，做到平整而无损伤。（3）用于生根的苗，其基部要尽量不带愈伤组织，以利于提高生根的质量。第21页，课件共28页，创作于2023年2月5.4.10出瓶过渡苗死亡率高过渡是组织生产的最后一关，也是难度比较大的一个环节。是从室内各种条件相对可控，向自然环境转变的一个过渡时期，稍不小心，就会使组织苗全军覆灭。有很多组培室能够大量生产组培瓶苗，但由于过渡技术掌握不好，在过渡环节中组培苗死亡率高，而使生产无法正常进行。污染控制和提高过渡成活率是组培生产，特别是大规模工厂化生产的两个最关键技术，他直接关系到组培室能否生存和发展。第22页，课件共28页，创作于2023年2月主要原因（1）组培苗质量差（2）环境条件不适（3）过渡苗的管理不精致第23页，课件共28页，创作于2023年2月措施（1）有针对性地调整配方，改善培养条件，努力提高组培苗质量，培养叶色浓绿，株型矮壮，生根良好，大小适中，群体整齐的小苗（2）及时出瓶，根据各个种类和品种的特性，尽快移栽到适宜的培养基质中。清洗和移栽时要尽量小心，不要损伤小苗的叶片和根系，无根小苗可采取蘸取根水或生根粉后移栽，促进组培苗在栽培基质中生根。（3）改善过渡培养的环境条件，有条件的单位和企业可采用自控温室，并配合喷灌使用，能大大提高过渡的成活率，但设备的投入较大。（4）采取配套的管理措施，加强过渡苗的肥水管理和病虫害防治。（5）加强过渡苗的肥水管理和病虫害防治。第24页，课件共28页，创作于2023年2月5.4.11计划、生产与销售环节组培苗工厂化生产是一个系统工程，它包括从品种的选择→外植体选取→灭菌和消毒→初代培养→扩繁和继代→生根培养→过渡培养→商品苗→销售→田间栽培等一系列过程，只要其中的任何一个环节出现问题，都会影响到整个生产计划和任务的完成，所以在制定计划时要充分考虑到各种可能发生的情况，同时又不能把余地留的太大，以免生产过多造成浪费和增加成本，或者不能按订单提供相应的产品。第25页，课件共28页，创作于2023年2月实际操作中碰到的问题（1）品种不对路（2）数量不能满足市场需求（3）生产过量（4）不能按预定时