流式细胞仪标准操作规程

流式细胞仪标准操作规程××医院检验科临床免疫室作业指导书文件编号:XXX生效日期：共页第页1.目的建立规范标准的××型流式细胞仪操作程序，确保流式细胞检测结果准确可靠。2.仪器名称及型号××(品牌)××(型号)流式细胞仪。3.应用范围适用于免疫组经授权的检验技术人员。4.仪器简介和测试原理流式细胞仪可同时进行多参数测量，信息主要来自特异性荧光信号及非荧光散射信号，工作在测量区进行。所谓测量区就是照射激光束和喷出喷孔的液流束垂直相交点。液流中央的单个细胞通过测量区时，受到激光照射会向立体角为2π的整个空间散射光线，散射光的波长和入射光的波长相同。散射光的强度及其空间分布与细胞的大小、形态、质膜和细胞内部结构密切相关，因为这些生物学参数又和细胞对光线的反射、折射等光学特性有关。未遭受任何损坏的细胞对光线都具有特征性的散射，因此可利用不同的散射光信号对不经染色活细胞进行分析和分选。经过固定的和染色处理的细胞由于光学性质的改变，其散射光信号当然不同于活细胞。散射光不仅与作为散射中心的细胞的参数相关，还跟散射角及收集散射光线的立体角等非生物因素有关。因此流式细胞仪综合了激光技术、计算机技术、半导体技术、流体力学、细胞化学等各门学科。5.开展项目包括：常规免疫功能检测、细胞周期检测、细胞凋亡检测、免疫细胞分型、造血干细胞检测等。6.仪器环境要求无尘、通风良好的环境，无直接日照。温度：18~25℃，温度的改变应该＜2℃／h。室内7.操作规程7．1·设备每日开机程序：开启稳压电源、变压器，打开流式细胞仪电源。开启其他周边有管线及管路装置连接通畅，无扭曲、折叠。将气压阀方向调在加压位置，用手感觉鞘液桶在慢慢鼓起。排除液流过滤器中的气泡。等待机器预热5~10min后可开始实验。s在试剂盒的背面，标题是“CalibriteBeadsTM3BatchNO”，选择“FacsFlowSheath”下的编号 (右侧的编号)。APCLotID(此栏不能空，即使是三色校正试剂)。，路径“Facstation\BDfile\Facscomp\n度过低可在管中加一滴微球。液体和鞘液桶中的是否相同；③仪器做月维护，完成后再重新做Facscomp仪器质控。匀的抗凝全血，注意血不要碰到试管底部的微球(Beads)。取20μl荧光抗体加入到管中，注意：不要碰到血。涡旋混匀，室温避光放置15min。取出加入450μl1×FACS溶血素，充分混匀，避光放置15min。24h内上机用“Multitest”软件获取细胞进行检测，上机前应充分混匀。AcquisitionandAnalysis”，在“EntryLevelFileNamePrefix”中选择“SampleName”；在会自动生成一个文件，文件的默认路径“Facstation\BDfile\Multiset\DDMMYY”文件夹；在的结果。在窗口的最下方点“LotIds”，跳出一窗口，点此窗口左侧的“AbsoluteCountBeads”，在此窗口右侧输入TrucountTube的批号和Beads总数(标在包装袋上)，单击“Save”。单击Setting”，在出现的新对话框中单击“Open”；打开此路径下Facstation\BDFile\InstrumentiRunmin约1ml。将样品换成蒸馏水重复上述步骤。注意：最后要剩余约1ml蒸馏水浸泡进样针，防StandBymin后可关掉主机。退出所有应用软件，关闭电脑，关闭稳压器和变压器。将流式细胞仪的压力阀置于减压状态。8.维护保养8．1·每日维护：实验结束后，请于关机前清洁加样针的外管和内管，防止加样针堵塞或有染料残留。清洁方法同每日关机程序。8．2·每月维护：流式细胞仪使用一段时间后，在鞘液管路、废液管路和流动池中会有残使鞘液不流经滤器，直接沿鞘液管路进入流动池。鞘液筒中倒入2L浓度为0．5％~1％稀释漂白剂(注意不能使用原浓度)。上样管中加入4ml浓度为0．5％~1％稀释漂白剂。流速选择Hi档，Run运行20~30min。鞘液筒用蒸馏水清洗干净，再加入蒸馏水2L。取下有漂白剂的上样管，换上有4ml蒸馏水的上样管。流速选择Hi档，Run运行20~30min。鞘液筒中换成鞘液，重新安装好鞘液滤器管路。参照用户手册的有关内容自行更换。8．3．2空气滤网的清洁：空气滤网位于鞘液筒上方，可以用吸尘器或水洗的办法清洁。空气滤网需要定期检查，发现滤网脏了，就需要清洗了。拉出抽屉后取下空气滤网。清洁滤网，如果水洗处理，应等滤网完全干了以后，再进行安装。装回滤网，将其慢慢推回原位。安装时注意滤网的方向，气流由下往上通过。9.校准的原则，对仪器特性中涉及量值要求的项目进行控制。9．2·正常工作条件：包含校正球差、色差、慧差、场曲等在校准前的准备工作中进行说明。9．3·荧光灵敏度：根据物镜不同的数值孔径和种类，在4~15mm。规范做计量特性要求。9．6·仪器分辨率：荧光3个通道分辨率规范做计量特性要求。周血中红细胞和血小板分开。出厂保证，不直接影响测量，不列入。9．8·倍体分析线性：二倍体细胞周期分析时可分辨的荧光强度比值。出厂保证，不直接特性要求。要求。9．12·仪器稳定性：≤±10％规范做计量特性要求。明。9．16·安全医用电气安全使用要求在校准前的准备工作中进行说明。10.报警及处理“警报”窗口查看相应的警报。警报窗口识别各种系统警报状态。具体说明和消除办法。根据相应的消除办法，纠正各个警报状况。如有问题，请拨打××(品牌)××(型号)流式细胞仪客服电话。11.注意事项程中注意鞘液桶不能空，防止气体进入液路系统。11．2·液路中气泡会严重影响实验结果，开机后一定要排除气泡，包括鞘液桶上方管路排除气泡、仪器管路右侧管路排除气泡、进样针Prime2~3次。加鞘液后要稍等2~3min再排气泡。11．3·样品上机前一定要过滤(300目细胞筛或35~55μm尼龙筛网)，以防样品中