发酵灵芝多糖对肝癌细胞的抑制及其与血清蛋白的分子对接模拟

发酵灵芝多糖对肝癌细胞的抑制及其与血清蛋白的分子对接模拟灵芝为我国传统的名贵中药，具有抗肿瘤、提高机体免疫等功效。灵芝深层发酵技术缩短了灵芝的生产周期，增加了活性物的成分与含量，为灵芝的深度开发与利用奠定了基础。灵芝多糖为灵芝的主要活性成分之一，具有多种生物活性，特别是在抗肿瘤方面有较理想的药效。灵芝多糖在体内抗肿瘤活性的发挥也与人血清蛋白（）对其存储和运输有关，因此研究灵芝多糖与 的相互作用对灵芝多糖的开发、剂量的调节以及药理的研究具有重要的参考意义。针对目前发酵灵芝多糖抗肝癌作用机制的研究较少，并且还未见多糖与相互作用的研究，本论文以发酵灵芝多糖为研究对象，从直接抗肿瘤和免疫调节两方面探讨灵芝多糖对肝癌细胞 的抑制作用;在此基础上采用 芯片技术研究灵芝胞内多糖对 细胞 表达的影响；同时，由于典型致癌基因常为氧化受损，而 在芯片表面的连接方向为3〜'端，在芯片杂交过程中氧化受损的 因空间位阻效应而影响核苷酸之间的配对。基于此，本文采用量子化学法结合 软件研究了氧化受损核苷酸与核苷酸的相互作用。最后采用 软件的 模块研究多糖与的分子对接，从多糖对亲和力的角度来阐述多糖的抗肿瘤机制。本实验首先从灵芝深层发酵上清液中提取胞外多糖，从发酵菌丝体中提取胞内多糖。所获得的胞外多糖主要组分的重均分子量（）为 ，其单糖组成（摩尔比）为岩藻糖：氨基葡萄糖：阿拉伯糖：氨基半乳糖：半乳糖：葡萄糖：木糖：

甘露糖；2胞.内0多3糖:主8要3组.分0的8甘露糖,其相应的单糖组成（摩尔比）为阿拉伯糖：半乳糖：葡萄糖:木糖：甘露糖.木糖：甘露糖.采用法研究了灵芝胞内外多糖对肝癌细胞生长的影响。对肝癌细胞生长的影响。在浓度为M，作用时间为时，胞外多糖与胞内多糖对胞的抑制率分别为和其其。2在浓度为M，作用时间为时，胞外多糖与胞内多糖对胞的抑制率分别为和其其。2与%此同时，考察了灵芝多糖对巨噬细胞释放量的影响,结果表明胞内多糖比胞外多糖更容易激活细胞从而释放出更多的并且这两种多糖对6细4胞.无毒性。在此基础上，采用芯片技术研究灵芝胞内多糖作用于细胞后对其的调控作用。结果发现共有61种产生差异性表达，包括其中 种的表达最并且这两种多糖对6细4胞.无毒性。在此基础上，采用芯片技术研究灵芝胞内多糖作用于细胞后对其的调控作用。结果发现共有61种产生差异性表达，包括其中 种的表达最为显著，的3表1达3上1调了92倍。的调控同时反映在免疫相关和癌症直接相关的两个方面，揭示灵芝胞内多糖对细胞的抑制作用是通过这两个方面而不是通常所认为的仅仅通过免疫调控来实现的。氧化受损是基因突变诱发癌症的主要原因之一。在芯片杂交过程中氧化受损的 核苷酸因空间效应而影响其与）核苷酸的配对。受损的 核苷酸因空间效应而影响其与）核苷酸的配对。基于此本文运用量子化学法研究了种氧化受损的 核苷酸（ 、 、A、C、G、U）核苷酸的相互作用。研究表明反式构型的所形成的复合物最稳定。式构型的所形成的复合物最稳定。另外，顺式另外，顺式与形成复合物后，其分子间发生了氢迁移，从而使复合物更加稳定。灵芝胞外多糖的抗肿瘤活性较弱，本实验室对其进行硫酸化修饰后发现其抗肝癌活性有所提高。其原因之一在于多糖的硫酸化修饰改变了多糖的构型。因此，多糖的生物活性与其构型密切相关。本文根据灵芝胞外多糖的单糖组成构建多糖模型。采用软件的 模块构建了主链分别为a葡聚糖（a）、a甘露糖（a ）和a半乳糖（a）的多糖。并且对每种多糖分别考虑一和一这两种糖苷键类型。在此基础上，构建取代度分别为和的硫酸化胞外多糖。从模拟的结果来看，a一 葡聚糖有直链状构型的趋势，当硫酸基取代在和位上时该多糖构型也呈直链状，其余硫酸化的a一葡聚糖均呈无规线团；a 一葡聚糖、一一a半乳糖和一a甘露糖均以无规线团存在，它们的硫酸化衍生物大多为直链状构型；一a甘露糖的构象为直链型，且糖链带有一定柔性。硫酸基取代在位时该多糖呈无规线团。除此以外，该多糖的硫酸化衍生物均为直链状。这表明多糖经硫酸化后由于硫酸基团的静电排斥作用使得链的构型更为舒展。多糖与 的相互作用影响着多糖在体内抗肿瘤活性的发挥。本文采用分子对接法中 程序研究上述各多糖模型与 的相互作用。结果表明，大多数硫酸化多糖对 的亲和力小于未硫酸化的多糖对的亲和力。因此可以推测，硫酸化多糖在体内的游离浓度较高，利于