第八章电泳分离技术

第八章电泳分离技术第1页，课件共78页，创作于2023年2月主要内容第一节概述第二节聚丙烯酰胺凝胶电泳第三节SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳第四节等电聚焦电泳第五节双向凝胶电泳第六节毛细管电泳第2页，课件共78页，创作于2023年2月1.1电泳的基本概念电泳：带电物质在电场中向相反电极移动的现象。电泳迁移率：在单位电位梯度的作用下，单位时间内质点所移动的距离。电泳分离技术：利用带电物质在电场中泳动速度的差别而进行分离的方法。第3页，课件共78页，创作于2023年2月1.2电泳的理论基础第4页，课件共78页，创作于2023年2月1.2.1影响电泳速度的因素①电场强度：泳动速度与电场强度成正比；②溶液的pH值：pH距待分离物质的pI越远，泳动速度越大；③溶液离子强度：离子强度越小,电动势越大,泳动速度越快；④溶液的黏度：泳动速度与溶液的黏度成反比；⑤电渗现象：在电场中，液体对于固体支持物的相对移动。⑥颗粒的性质：一般所带电荷量越大、直径越小或其形状越接近于球形，迁移率就越大。第5页，课件共78页，创作于2023年2月1.2.2两种离子型物质A和B的混合物的分离和第6页，课件共78页，创作于2023年2月1.3电泳技术分类淀粉凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳纸电泳

醋酸纤维薄膜电泳薄层电泳凝胶支持物区带电泳非凝胶支持物电泳显微电泳等电聚焦电泳等速电泳不用支持物电泳用支持物区带电泳是否用支持物第7页，课件共78页，创作于2023年2月薄层电泳板电泳柱电泳。根据支持介质形状不同电泳系统的连续性连续电泳不连续电泳分析电泳制备电泳定量、免疫电泳。用途不同电泳的方向不同水平电泳垂直电泳第8页，课件共78页，创作于2023年2月第二节聚丙烯酰胺凝胶电泳

聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamidegelelectrophoresis，PAGE）是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种电泳方法。聚丙烯酰胺凝胶具有机械强度好，有弹性，透明，化学性质稳定，对pH和温度变化小，没有吸附和电渗作用小的特点，是一种很好的电泳支持介质。PAGE按凝胶的形状可分为：圆盘状电泳垂直或平板状电泳

第9页，课件共78页，创作于2023年2月CH2=CHC=ONH2CH2=CH

C=ONHCH2NHC=OCH2=CH丙烯酰胺(Acr)N,N’-甲叉双丙烯酰胺(Bis)-CH2-CH-[CH2-CH-]nCH2-CH-C=OC=ONH2NHCH2NHC=O-CH2-CH-[CH2-CH-]nCH2-CH-C=OC=ONHNH2聚丙烯酰胺第10页，课件共78页，创作于2023年2月2.1基本原理2.1.1聚丙烯酰胺凝胶的聚合1)化学聚合

化学聚合的催化剂通常采用过硫酸铵，此外还需要加速剂TEMED（N，N，N’，N’-四甲基乙二胺），它能以自由基的形式存在。微量TEMED的加入，可使过硫酸铵形成自由基：

S2O82-2SO4-

这些自由基的产生可引发丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的聚合、交联反应，形成有一定平均孔径的聚丙烯酰胺。.第11页，课件共78页，创作于2023年2月

2)光聚合

光聚合通常用核黄素为催化剂，核黄素经光照形成无色基，再被痕量氧氧化形成自由基，引发聚合反应。TEMED的存在，可以加速聚合。上述聚合反应受许多因素的影响：（1）大气氧能淬灭自由基，阻止多聚体链长的增加。在进行化学聚合前，一般用减压抽气的办法除去溶液中溶解的空气。在胶液表面，往往覆盖一层水或溶液，隔绝空气，可加速聚合。（2）低温、低pH都会减慢聚合反应速度。（3）有些材料如聚丙烯酸甲酯有机玻璃，一些金属等可抑制聚合反应。第12页，课件共78页，创作于2023年2月2.1.2凝胶用量计算聚丙烯酰胺凝胶孔径的大小取决于凝胶总浓度（T%）和交联度（C%）。

T%=

C%=式中a代表单体Arc的重量(g)，b代表交联剂Bis的重量(g)，m代表溶液的体积(mL)a+bm×100%aa+b×100%第13页，课件共78页，创作于2023年2月分子量范围适宜凝胶浓度T%

<10420~301-4×10415~204104-1×10510~15105-5×1055~10>5×1052~5表分离蛋白质选择聚丙烯酰胺凝胶浓度参考值在浓度为7.5%的凝胶中，大多数生物体内的蛋白质能得到满意的分离效果。因此，把浓度为7.5%凝胶称为标准胶。对于一个未知样品，常用7.5%的标准胶或4%-10%的凝胶梯度来测试，而后选出适宜的凝胶浓度。第14页，课件共78页，创作于2023年2月2.1.3分离效应聚丙烯酰胺凝胶电泳分为:连续性电泳不连续性电泳:凝胶层的不连续性缓冲液离子成分的不连续性pH值的不连续性电位梯度的不连续性电泳时产生的3种物理效应:浓缩效应电荷效应分子筛效应第15页，课件共78页，创作于2023年2月A.样品的浓缩效应缓冲液成分及pH的不连续性浓缩胶pH6.7缓冲液浓缩胶Tris-HCl,电极缓冲液Tris-Gly缓冲液样品浓缩胶分离胶第16页，课件共78页，创作于2023年2月缓冲液成分及pH的不连续性导致蛋白质样品浓缩效应示意图快离子慢离子蛋白质样品

解离度：Cl>蛋>

Glymclcl>m蛋蛋>mGlyGly凝胶中Cl－为快离子，Gly－为慢离子，蛋白质样品被夹在中间。第17页，课件共78页，创作于2023年2月凝胶层的不连续性

样品进入浓缩胶有一个堆积浓缩效应(缓冲液pH8.3)

蛋白质从“－”极向“＋”极移动，从浓缩胶进入分离胶，速度变慢，堆积浓缩。缓冲液样品浓缩胶分离胶第18页，课件共78页，创作于2023年2月E：每厘米的电压降

E＝I(电流强度)/(电导率)E与电泳速度成正比电泳开始后，由于快离子泳动率最大，在快离子后面形成一个离子浓度低的低电导区，产生较高的电位梯度，使蛋白质和慢离子加速移动，蛋白质样品被进一步浓缩。电位梯度的不连续性第19页，课件共78页，创作于2023年2月B.

电荷效应蛋白质样品进入分离胶后，pH增大(pH8.9)，Gly－解离度增大，不存在快、慢离子之分，蛋白质样品在均一电场强度和pH条件下泳动。由于各种蛋白质pI不同，所载有效电荷不同，因此质点的有效迁移率不同，形成不同区带。缓冲液浓缩胶分离胶第20页，课件共78页，创作于2023年2月C.

分子筛效应分离胶的孔径小，各分子由于大小和形状不同，所受阻力不同，表现出不同的泳动速度，即分子筛作用。分子量小，形状为球形的泳动速度最快。缓冲液浓缩胶分离胶第21页，课件共78页，创作于2023年2月2.2PAGE的优点1）聚丙烯酰胺凝胶电渗作用较小；2）聚丙烯酰胺凝胶孔径可控制；3）聚丙烯酰胺凝胶对热稳定，无色透明；4）丙烯酰胺是比较纯的化合物。5）分辨率高，尤其在不连续凝胶电泳中。第22页，课件共78页，创作于2023年2月2.3影响凝胶聚合的因素1）形成凝胶的试剂的纯度；2）凝胶浓度；3）温度和氧气的影响。第23页，课件共78页，创作于2023年2月第三节SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳

加入SDS（十二烷基磺酸钠）和少量巯基乙醇，则生物大分子的迁移率主要取决于它的分子量，而与原来所带电荷、分子形状无关。第24页，课件共78页，创作于2023年2月3.1基本原理：

1、由于SDS是阴离子，使多肽表面覆盖的负电荷远远超过蛋白质分子原有的电荷量，消除了原来的电荷差异。2、改变了蛋白质单体分子的构象，不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都相同，长轴长度随其分子量的大小成正比变化。

3、由于不同蛋白质的SDS复合物具有相同的荷质比，并具有相似的构象，因而有如下公式：

lgM=K1—K2μR（K1、K2为常数，μR为相对迁移率）第25页，课件共78页，创作于2023年2月

实际测定时，以几种标准单体蛋白质分子量的对数值对其μR作图，根据样品的μR值，从标准曲线上就可查出其分子量。标准蛋白分子量未知蛋白在一定的凝胶浓度下，多肽链分子量的对数与多肽链的相对迁移率成线性关系，所以可以通过标准曲线求未知多肽链分子量。相对迁移率第26页，课件共78页，创作于2023年2月3.2SDS的操作步骤1.安装膜具（1）（2）第27页，课件共78页，创作于2023年2月（3）（4）（5）第28页，课件共78页，创作于2023年2月2.配制凝胶溶液3.灌胶

凝胶配方储存液凝胶终浓度T(C=3%)3%5%10%15%20%单体储液ml3.45101520浓缩胶缓冲液2.4分离胶缓冲液7.57.57.57.510%SDS0.20.30.30.30.3双蒸水1417.212.27.22.210%过硫酸铵ul1010101010TEMEDul1010101010第29页，课件共78页，创作于2023年2月插入梳子第30页，课件共78页，创作于2023年2月胶凝后用夹子将玻璃夹出将封胶条轻轻撕掉第31页，课件共78页，创作于2023年2月旋转180度，

凹玻璃向里加缓冲液第32页，课件共78页，创作于2023年2月4.样品制备

将0.5ml样品液，0.25ml10%SDS和0.25ml1%巯基乙醇于小试管中，置100℃水浴中煮沸3分钟后，取出冷却，然后，加入0.25ml上样缓冲液(0.05%溴酚兰+40%蔗糖溶液)，混合。取出混合样品40微升加入样品槽，每个样品重复两个。第33页，课件共78页，创作于2023年2月5.加样第34页，课件共78页，创作于2023年2月6.电泳接通电源，电流恒定为80mA，待溴酚兰指示剂移至离下端0.5cm（约3小时），切断电源，拔去插头，倒出电极缓冲液。第35页，课件共78页，创作于2023年2月7.剥胶注意保持胶的完整性。第36页，课件共78页，创作于2023年2月8染色

1.染色液：考马思亮蓝G-2501.0克甲醇450ml

冰醋酸100ml

加H2O到1000ml9脱色

1.脱色液：甲醇100ml

冰醋酸100ml

加H2O到1000ml第37页，课件共78页，创作于2023年2月电泳后的凝胶经考马斯亮篮染色、脱色后的凝胶照片Mark:Myosin200000wβ-galactosidase116250Phosphorylaseb97400Serumalbumin66200Ovalbumin45000Carbonicanhydrase31000Trysininhibitor21500Lysozyme14400Aprotinin6500第38页，课件共78页，创作于2023年2月10凝胶（脱色之后）结果分析

1、计算迁移率（Rm值）：相对迁移率=2、绘制标准曲线：以标准蛋白亚基的Rm值为横坐标，以相应分子量的对数值为纵坐标，即可绘制出测定蛋白质分子量的标准的线图。3、计算未知蛋白亚基样品的分子量：根据未知样品样的Rm值，从上述标准曲线图中即可查出其分子量。蛋白样品距加样端迁移距离(cm)溴酚蓝区带中心距加样端距离(cm)第39页，课件共78页，创作于2023年2月3.3注意事项

1．丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺是神经毒性试剂，并对皮肤有刺激作用，注意避免直接接触。大量操作时应在通风橱中进行。2．丙稀酰胺和甲叉双丙烯酰胺溶液应装在棕色瓶中，置冰箱内（4℃）保存。可贮存1～2个月。测定pH（4.9～5.2）可检查其是否失效，失效不能聚合。

3．TEMED要密封保存，过硫酸铵溶液最好当天配制，以防止氧化失效。

4．凝胶的聚合速度与温度关系很大，温度低时，聚合速度减慢，必须根据实验时的温度调整3号、4号试剂的用量，以使凝胶在30min内聚合。第40页，课件共78页，创作于2023年2月等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在电场中移动；当蛋白质迁移至其等电点位置时，其静电荷数为零，在电场中不再移动，据此将蛋白质分离。第四节等电聚焦第41页，课件共78页，创作于2023年2月两性电解质载体(carrierampholytes)(1)易溶于水，在pI处应有足够的缓冲能力，形成稳定的pH梯度，不致被蛋白质或其它两性电解质改变pH梯度。(2)在pI处应有良好的电导及相同的电导系数，以保持均匀的电场。(3)分子量小，可通过透析或分子筛法除去，便于与生物大分子分开。(4)化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，也无变性作用，其化学组成不同于蛋白质。第42页，课件共78页，创作于2023年2月

利用聚丙烯酰胺凝胶内的缓冲液在电场作用下沿电场方向在凝胶内制造一个pH梯度。每种蛋白质都将迁移至与它的pI相一致的pH处。凝胶中加有两性电解质溶液（pH9-3）加电场后在凝胶内形成一个稳定pH梯度加样品，然后继续电泳凝胶染色表明样品按照各自pI值沿着pH梯度分布第43页，课件共78页，创作于2023年2月等电聚焦电泳进行过程中等电聚焦电泳结束后（＋）（＋）（－）（－）低pH低pH高pH高pH第44页，课件共78页，创作于2023年2月试剂与器材试剂：两性电解质载体pH3-10、10%四甲基乙二胺、10%过硫酸铵、5%H3PO4、2%NaOH、40%蔗糖、0.04％考马斯亮兰R250、7%醋酸器材：圆盘电泳槽、稳压稳流电泳仪、脱色摇床第45页，课件共78页，创作于2023年2月操作方法1.凝胶柱的制备（1）玻璃管的一端插在橡皮帽中(与橡皮接触的部分凝胶不易聚合，可在橡皮帽中先加一滴40%的蔗糖)（2）配胶表10mL7.5%凝胶的配制试剂名称 体积(mL) 凝胶贮液 2.5 两性电解质载体 0.5 10%TEMED 0.1 蛋白质混合样品 0.1 蒸馏水 6.75 混匀后置真空干燥器中抽气10min 10%过硫酸铵 0.05 第46页，课件共78页，创作于2023年2月（3）将配好的凝胶溶液用细长头滴管加到预先准备好的玻管中，至离上端1cm处，再用注射器缓缓加水3-5mm高。（4）待凝胶聚合2.电泳

小心地拔出玻管，并用蒸馏水洗去蔗糖溶液，把管固定到电泳槽上槽的洞中（安装时要保证凝胶管垂直且橡胶塞孔密封不漏）在上槽中加入5%磷酸缓冲液，在下槽中装入2%氢氧化钠溶液。避免管下有气泡。上槽接电泳仪的正极，下槽接负极，打开电源，先调电压至100V，待电压稳定后再升到300V，电泳2h以上至电流降为0，将电压调至0，关闭电源。第47页，课件共78页，创作于2023年2月3．剥胶

电泳结束后，取下凝胶管，用蒸馏水充分洗净两端电极液，在凝胶条的正极端插一铜丝为标记。用灌满水的注射器长针头插入凝胶与玻管管壁之间，边压水边慢慢转动玻管，推针前进，同时注入水，靠水流压力和润滑力将玻璃管内壁与凝胶分开，凝胶条即可流出。4.固定染色

取其中一条凝胶条放在一块洁净的玻板上，用尺量出固定前的凝胶条长度。放入染色液中同时进行固定染色1-2h，用蒸馏水漂洗数次后用脱色液脱色，直至蛋白质区带清晰，量出蛋白带距正极端的距离。第48页，课件共78页，创作于2023年2月5.pH梯度的制作

取另一条凝胶条放在玻板上，从凝胶的正极端开始，每隔0.5cm切下一段，依次放入已编好号并装有1mL蒸馏水的试管中，浸泡过夜。次日用酸度计分别测定每管浸提液的pH值。以凝胶长度为横坐标，pH值为纵坐标，绘制标准pH梯度曲线。6.蛋白质样品等电点的计算

求出蛋白质聚焦部位距凝胶条正极端的实际长度为：固定后的蛋白区带中心距凝胶条正极端的距离

固定染色前凝胶条长度固定染色后凝胶条长度 计算出蛋白质聚焦部位距凝胶条正极端的实际长度后，直接从pH梯度曲线上求出该蛋白质等电点。第49页，课件共78页，创作于2023年2月等电点聚焦的显著优点1.分辨率高2.很稀的样品都可分离，且重现性好3.可用于测定蛋白质或多肽的等电点等电点聚焦的缺点1.要求使用无盐溶液，而某些蛋白质在无盐溶液中溶解度低，可能产生沉淀；2.样品中各组分都聚焦到其等电点，对一些在等电点不溶解或发生变性的蛋白质不适用。第50页，课件共78页，创作于2023年2月注意事项盐离子可干扰pH梯度形成并使区带扭曲。为防止上述影响，进行IEF时，样品应透析或用SephadexG-25脱盐，也可将样品溶解在水或低盐缓冲液中使其充分溶解，以免不溶小颗粒引起拖尾。加样量则取决于样品中蛋白质的种类、数目以及检测方法的灵敏度。如用考马斯亮蓝R-250染色，加样量可为50-150g；如用银染色，加样量可减少到1g。一般样品浓度以0.5-3mg/mL为宜，最适当加样体积为10-30l。第51页，课件共78页，创作于2023年2月第五节双向凝胶电泳双向凝胶是一种由任意两个凝胶电泳组合而成的，即在第一向电泳后再在与第一向垂直的方向上进行第二向电泳。其基本原理一般与组成它的两个单向电泳基本原理相同。第52页，课件共78页，创作于2023年2月第一向：等电聚焦电泳第二向：SDS

双向电泳后的凝胶经染色后蛋白呈现二维分布图：水平方向反映出蛋白在pI上的差异，垂直方向反映出它们在分子量上的差别。第一向电泳：等电聚焦电泳聚焦后凝胶放置在SDS凝胶上，进行第二向电泳第二向电泳：SDS分子量大分子量小pH9pH3pH9pH3第53页，课件共78页，创作于2023年2月第54页，课件共78页，创作于2023年2月操作步骤：

蛋白样品的制备↓等电聚焦凝胶溶液的配制↓灌注毛细管凝胶↓组装第一向电泳槽↓聚焦电泳↓停止电泳↓取出毛细管胶↓毛细管胶置平衡液中平衡第55页，课件共78页，创作于2023年2月↓组装第二向电泳槽↓配制SDS-丙烯胺凝胶溶液↓灌装SDS-电泳胶↓第一向凝胶与第二向凝胶拼接↓接通电源进行SDS-电泳↓停止电泳取胶↓凝胶置固定液中固定↓银染法显色↓结果分析第56页，课件共78页，创作于2023年2月大肠杆菌全蛋白提取液双向电泳凝胶染色后照片第57页，课件共78页，创作于2023年2月样品的溶解是2-DE成功分离蛋白质的最关键因素之一。溶解的目标：1、样品中非共价结合的蛋白质复合物和聚积体完全破坏，从而形成各个多肽的溶解液（否则样品中结合牢固的蛋白复合物可能使2-DE中出现新的蛋白点，相应的表示单个多肽的点的强度会下降）；2、溶解方法必须允许可能干扰2-DE分离的盐、脂类、多糖和核酸等物质的去除；3、溶解方法要保证样品在电泳过程中保持溶解状态。第58页，课件共78页，创作于2023年2月增加样品溶解性的手段变性剂：通过改变溶液中的氢键结构使蛋白质充分伸展，将其疏水中心完全暴露，降低接近疏水残基的能量域。其典型代表是尿素和硫尿。表面活性剂：经过变性剂处理而暴露蛋白质的疏水基团后，还常需至少一种表面活性剂来溶解疏水基团。常用的表面活性剂有离子去污剂SDS、非离子去污剂TritonX-100和NP-40、两性离子去污剂CHAPS、OBG等。其中CHAPS和SB3-10最好。还原剂：在变性剂和表面活性剂联用条件下，加用还原剂可使已变性的蛋白质展开更完全，溶解更彻底。常用含自由巯基的DTT或-巯基乙醇，以及不带电荷的三丁基膦（TBP）进行还原。第59页，课件共78页，创作于2023年2月起载体作用的两性电解质：即便在变性剂和表面活性剂存在的情况下，某些蛋白质也需要在盐离子的作用下才能保持其处于溶解状态，否则这些蛋白质在其处于pI点时会发生沉淀。Carrierampholytes的作用在于捕获样品中的少量盐分，从而保证蛋白质的溶解性。应用时，两性电解质的浓度应小于0.2％（w/v)。浓度过高会使IEF的速度降低。另外，为了保证实验的精确性，在选择不同pH范围的IPG胶条时，也应使两性电解质的pH值与之相符合。第60页，课件共78页，创作于2023年2月非变性2D：两向均在非变性条件下进行，这样分离的蛋白质点的等电点和表观分子量同生理条件下获得的这些蛋白的值是一样的；非变性/SDS-2D：第一向采用非变性IEF，之后在2%SDS溶液中平衡；第二向也在SDS存在的条件下进行。适于分析非共价键连接的蛋白－蛋白间的相互作用。非变性/还原/SDS-2D：非变性条件下IEF聚焦，之后用8M尿素＋5%β-ME＋2%SDS进行平衡，再进行第二向SDS-PAG电泳。此时分离的蛋白质点可进行点的切取、蛋白酶消化、MALDI-TOF-MS分析鉴定，提供关于断裂二硫键连接的多肽的信息。变性2D：样品先用2%SDS＋5%β-ME＋95℃变性5min，IEF在8M尿素＋1%NP-40条件下进行，之后胶条用2%SDS＋5%β-ME平衡，然后进行SDS。该技术适于DNA序列和多肽结构的分析，或分析被碳氢键连接和其它翻译后修饰所引起的多肽结构微异质性，但此方式显示的大于100Kd的蛋白质点少于第三种方式双向电泳的分类第61页，课件共78页，创作于2023年2月第六节毛细管电泳

又称高效毛细管电泳(HPCE),是指离子或带电粒子以毛细管为分离室,以高压直流电场为驱动力,依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的液相分离分析技术。第62页，课件共78页，创作于2023年2月

一、高效毛细管电泳基本原理

在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象，称之为电泳。由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同可实现分离。1.经典电泳分离法的不足

所用分离柱的柱径大，柱较短，分离效率不高（远低于HPLC），温度影响大。高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进。第63页，课件共78页，创作于2023年2月2.高效毛细管电泳技术上的重要突破高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进：一是采用了0.05mm内径的毛细管；二是采用了高达数千伏的电压。毛细管的采用使产生的热量能够较快散发，大大减小了温度效应，使电场电压可以很高。电压升高，电场推动力大，又可进一步使柱径变小，柱长增加，高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱，理论塔板数高达几十万块/米，特殊柱子可以达到数百万。第64页，课件共78页，创作于2023年2月3.基本概念有效长度(Ld,cm):毛细管的入口端到检测器窗口的距离；

迁移时间(tmmin):带电粒子在电场作用下做定向移动的时间；电泳速度(Uecm/s):在单位时间内，带电粒子在毛细管中定向移动的距离；电场强度(EV/cm):

在给定长度毛细管的两端施加一个电场后所形成的电效应的强度；电泳淌度(μepcm2/(V.s)):带电粒子在毛细管中定向移动的速度与所在电场强度之比；第65页，课件共78页，创作于2023年2月电渗流：毛细管内壁表面的电荷所引起的管内液体的整体流动，源于外加电场对管壁溶液双电层的作用；１.使液体沿毛细管壁均匀移动；２.使携带不同电性的分子均向负极移动，中性分子也随着电渗流一起移动。样品分子泳动方向电渗流方向第66页，课件共78页，创作于2023年2月4.分离过程

电场作用下，柱中出现：电泳现象和电渗流现象。带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流两种速度的矢量和正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出中性粒子无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出阴离子：两种效应的运动方向相反，ν电渗流>ν电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,除中性粒子外,同种类离子由于受到的电场力大小不一样也同时被相互分离。第67页，课件共78页，创作于2023年2月二毛细管电泳仪系统电泳仪进样系统分离系统检测系统数据处理系统第68页，课件共78页，创作于2023年2月进样系统

静压力进样和电动进样进样体积一般在纳升级进样长度必须控制在毛细管总长度的1%~2%，否则将影响分离效率第69页，课件共78页，创作于2023年2月

分离系统毛细管:由熔融石英制成,内径通常为25~75μm,外径为350~400μm，有效长度为80~100cm;恒温系统:控制柱温变化在±0.10C；高压电源:电流0~300μA电压0~30KV,电压稳定性在±0.1%;第70页，课件共78页，创作于2023年2月检测系统常用的检测方式是紫外-可见光吸收.检测器位于距样品盘约毛细管总长的2/3~4/5处,对毛细管壁内部分进行光聚焦；此外，荧光，激光诱导荧光，质谱等检测方法也被应用于毛细管电泳;第71页，课件共78页，创作于2023年2月高效毛细管电泳仪实图第72页，课件共78页，创作于2023年2月ＣＥ现有六种分离模式

1.毛细管区带电泳(capillaryzoneelectrophoresis,CZE)

又称毛细管自由电泳,是CE