微生物的实验室培养讲课

微生物的实验室培养讲课第1页，课件共46页，创作于2023年2月微生物的类群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌、霉菌单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等微生物包含了除植物界和动物界以外的所有生物无细胞结构真核细胞细菌、蓝藻原核细胞微生物是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。第2页，课件共46页，创作于2023年2月SARS冠状病毒、禽流感病毒病毒第3页，课件共46页，创作于2023年2月细菌的外形与大小细菌

A.球菌B.杆菌C.弧菌常见的细菌三种典型形态ABC第4页，课件共46页，创作于2023年2月细菌的结构第5页，课件共46页，创作于2023年2月放线菌第6页，课件共46页，创作于2023年2月真菌第7页，课件共46页，创作于2023年2月酵母菌酵母菌和霉菌青霉第8页，课件共46页，创作于2023年2月课题1微生物的实验室培养1.提供营养和条件2.防止污染第9页，课件共46页，创作于2023年2月一.培养基：微生物生存的环境和营养物质1.基本成分：概念：人们配制出供微生物生长繁殖的营养基质。碳源、氮源、水、无机盐⑴碳源无机碳源：有机碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物⑵氮源无机氮源：有机氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源第10页，课件共46页，创作于2023年2月2.特殊营养：维生素、氨基酸等（生长因子）（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH、氧气的需求：第11页，课件共46页，创作于2023年2月4.种类：按物理性质分：液体培养基：固体培养基：半固体培养基：应用微生物分离、鉴定、计数等按照培养基用途分选择培养基鉴别培养基按照培养基的成分来分合成培养基、天然培养基主要用于工业生产观察生物的运动和菌种保藏等微生物的分离微生物的鉴定第12页，课件共46页，创作于2023年2月固体培养基液体培养基第13页，课件共46页，创作于2023年2月牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g分析营养构成？第14页，课件共46页，创作于2023年2月二、无菌技术1.无菌技术

（1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。（2）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。（3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。（4）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。无菌技术，主要包括以下几个方面：关键是防止杂菌污染第15页，课件共46页，创作于2023年2月第16页，课件共46页，创作于2023年2月消毒：指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分的微生物（不包括芽孢和孢子）。2、消毒与灭菌

灭菌：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，而达到完全无菌的过程。提示：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。讨论2：无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？第17页，课件共46页，创作于2023年2月芽孢

有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。

细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖或休眠作用的生殖细胞。能直接发育成新个体。孢子第18页，课件共46页，创作于2023年2月消毒的方法：1、煮沸消毒法：100℃煮沸5～6min2、巴氏消毒法：70～75℃下煮30min或80℃下煮15min

如牛奶3、用体积分数为50%～70%酒精溶液等进行皮肤消毒4、氯气消毒水源5、紫外线消毒3.常用的消毒与灭菌的方法：是指用紫外线（能量）照射杀灭微生物的方法，紫外线不仅能使核酸、蛋白质变性，而且能使空气中氧气产生微量臭氧，从而达到共同杀菌作用。第19页，课件共46页，创作于2023年2月1、灼烧灭菌2、干热灭菌：160℃

-170℃下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min。常用的灭菌方法外焰灼烧第20页，课件共46页，创作于2023年2月请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手思考第21页，课件共46页，创作于2023年2月1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：培养基用量依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂→补水定容

4.灭菌：5.倒平板：培养基（调pH、分装、封口）、培养皿三.实验操作---大肠杆菌的纯化培养第22页，课件共46页，创作于2023年2月倒平板技术12342.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。3.用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10~20mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。1.将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拨出棉塞。4.等待平板冷却凝固，大约需5~10min。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。第23页，课件共46页，创作于2023年2月讨论1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基第24页，课件共46页，创作于2023年2月3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？

平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

不要空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生第25页，课件共46页，创作于2023年2月（二）纯化大肠杆菌平板划线法稀释涂布平板法1、常用的微生物接种方法：第26页，课件共46页，创作于2023年2月平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐渐分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可得到由一个微生物细胞繁殖而来的子细胞群，即菌落。第27页，课件共46页，创作于2023年2月第28页，课件共46页，创作于2023年2月

一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规则的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。第29页，课件共46页，创作于2023年2月第30页，课件共46页，创作于2023年2月问题讨论为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。第31页，课件共46页，创作于2023年2月稀释涂布平板法

是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后不同梯度的菌液分别涂布在琼脂固体培养基的表面，进行培养。第32页，课件共46页，创作于2023年2月

1.将分别盛有9mL水的6支试管灭菌，并按101~106的顺序编号。第33页，课件共46页，创作于2023年2月2.用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。第34页，课件共46页，创作于2023年2月3.从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复第2步的操作。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰1~2cm处.第35页，课件共46页，创作于2023年2月第36页，课件共46页，创作于2023年2月第37页，课件共46页，创作于2023年2月第38页，课件共46页，创作于2023年2月微生物的恒温培养第39页，课件共46页，创作于2023年2月2.培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37℃恒温箱中培养12h～24h后，观察并记录第40页，课件共46页，创作于2023年2月微生物的恒温培养微生物的恒温培养第41页，课件共46页，创作于2023年2月微生物的恒温培养第42页，课件共46页，创作于2023年2月四、课题成果评价

（一）培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同第43页，课件共46页，创作于2023年2月单个