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植物体内可溶性糖含量的测定(蒽酮法)糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。不同载培条件,不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定,可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。一、 目的:糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。不同载培条件,不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定,可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。二、 原理糖类遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物,反应如下:1i敝HsSO4 —H1i敝HsSO4 —H(_H.CH11OHOHHOOH(THOH| I 報HzlSOjHO—CH3— CH—CH(>- —\I 4OMOH—CHCH UNO十常醛長£i卩真槪醛已俯糠醛或羟甲基糠醛进一步与蔥酮试剂缩合产生蓝绿色物质,其在可见光区620nm波长处有最大吸收,且其光吸收值在一定范围内与糖的含量成正比关系。此法可用于单糖、寡糖和多糖的含量测定,并具有灵敏度高,简便快捷,适用于微量样品的测定等优点。三、实验材料、仪器及试剂1材料:植物组织叶片仪器:分光光度计恒温水箱20ml具塞刻度试管(3支)漏斗100ml容量瓶刻度试管试管架剪刀研钵3•试剂:(1)200yg/ml标准葡萄糖:AR级葡萄糖lOOmg,蒸馏水溶解,定容至500ml。蒽酮试剂:lg蒽酮,用乙酸乙酯溶解,定容至50ml,棕色瓶避光处贮藏;浓硫酸四、实验方法1•葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管,编号,按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂,再缓慢地加入5ml浓H2SO4,摇匀后,打开试管塞,置沸水浴中煮沸10分钟,取出冷却至室温,在620nm波长下比色,测各管溶液的光密度值(OD),以标准葡萄糖含量为横坐标,光密度值为纵坐标,作出标准曲线。管号12*56I标淮葡萄糖原液(ml)(200g/ml)00.204Q.60.81.0蒸懈水2.01.81.61.41.21.0401201602002•样品中可溶性糖的提取称取1克叶片,剪碎,置于研钵中,加入少量蒸馏水,研磨成匀浆,然后转入20ml刻度试管中,用10ml蒸馏水分次洗涤研钵,洗液一并转入刻度试管中。置沸水浴中加盖煮沸10分钟,冷却后过滤,滤液收集于100ml容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀备用。糖含量测定用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中,加1ml水和0.5ml蒽酮试剂。再缓慢加入5ml浓H2SO4(注意:浓硫酸遇水会产生大量的热!),盖上试管塞后,轻轻摇匀,再置沸水浴中10分钟(比色空白用2ml蒸馏水与0.5ml蒽酮试剂混合,并一同于沸水浴保温10分钟)。冷却至室温后,在波长620nm下比色,记录光密度值。查标准曲线上得知对应的葡萄糖含量(gg)o
五、结果计算五、结果计算样品件糖最(g/ioog鲜重)查表所得糖含気(Pg)K稀释倍数
样品重(戸X10e样品件糖最(g/ioog鲜重)六、附注(
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