第六章-黄酮类化合物完整版本

第六章

黄酮类化合物毛主席万岁概述

结构与分类

理化性质提取与分离、检识

结构研究、中药实例第六章黄酮类化合物概述黄酮类化合物大多具有颜色，在植物体内大部分与糖结合成苷，一部分以游离形式存在。

黄酮类化合物广泛分布于植物界中，而且生理活性多种多样，引起了国内外的广泛重视，研究进展很快。概述概述色原酮2-苯基色原酮

以前，黄酮类化合物(flavonoids)主要是指基本母核为2-苯基色原酮(2-phenyl-chromone)类化合物，现在则是泛指两个苯环（A-与B-环）通过中央三碳链相互联结而成的一系列化合物。概述C6-C3-C6

根据中央三碳链的氧化程度、B-环连接位置（2-或3-位）以及三碳链是否构成环状等特点，可将重要的天然黄酮类化合物分类如下：结构与分类

黄酮类黄酮类(flavones)

结构与分类-黄酮类结构与分类-黄酮类常见的黄酮及其苷类有芹菜素、木犀草素、黄芩苷等。芹菜素木犀草素结构与分类-黄酮类结构与分类-黄酮类黄芩苷结构与分类-黄酮类黄酮醇类黄酮醇(flavonol)

结构与分类-黄酮醇类结构与分类-黄酮醇类常见的黄酮醇及其苷类有山柰酚、槲皮素、杨梅素、芦丁等。山柰酚杨梅素结构与分类-黄酮醇类槲皮素R=H芦丁R=芸香糖结构与分类-黄酮醇类二氢黄酮类

二氢黄酮类（Flavanones）结构与分类-二氢黄酮类结构与分类-二氢黄酮类如橙皮中的橙皮素和橙皮苷；甘草中的甘草素和甘草苷。橙皮素R=H橙皮苷R=芸香糖甘草素R=H甘草苷R=glc结构与分类-二氢黄酮类二氢黄酮醇类二氢黄酮醇类（Flavanonols）结构与分类-二氢黄酮醇类结构与分类-二氢黄酮醇类如满山红叶中的二氢槲皮素和槲皮素共存，桑枝中的二氢桑色素和桑色素共存。二氢槲皮素二氢桑色素结构与分类-二氢黄酮醇类结构与分类-二氢黄酮醇类黄柏叶中具有抗癌活性的黄柏素-7-O-葡萄糖苷也属于二氢黄酮醇类。黄柏素-7-O-葡萄糖苷结构与分类-二氢黄酮醇类异黄酮类异黄酮类（Isoflavanone）结构与分类-异黄酮类结构与分类-异黄酮类豆科植物葛根中所含有的大豆素、大豆苷、大豆素-7，4’-二葡萄糖苷、葛根素和葛根素木糖苷均属于异黄酮类化合物。大豆素R1=R2=R3=H大豆苷R1=R3=HR2=glc葛根素R2=R3=HR1=glc大豆素-7，4’-二葡萄糖苷R1=HR2=R3=glc葛根素木糖苷R1=glcR2=xylR3=H结构与分类-异黄酮类二氢异黄酮类

二氢异黄酮类（Isoflavanones）结构与分类-二氢异黄酮类如中药广豆根当中含有的紫檀素、三叶豆紫檀苷、高丽槐素具有抗癌活性，苷的活性强于苷元。毛鱼藤中所含有的鱼藤酮也属于二氢异黄酮的衍生物，具有较强的杀虫和毒鱼作用。它们都属于二氢异黄酮类的衍生物。结构与分类-二氢异黄酮类紫檀素R=CH3三叶豆紫檀苷R=glc高丽槐素R=H鱼藤酮结构与分类-二氢异黄酮类查耳酮查耳酮类（Chalcones）结构与分类-查耳酮在酸的作用下，查耳酮可转化为无色的二氢黄酮，碱化后又转为深黄色的2’-羟基查耳酮。2’-羟基查耳酮二氢黄酮结构与分类-查耳酮结构与分类-查耳酮如红花的花中含有的红花苷红花苷结构与分类-查耳酮二氢查耳酮类

二氢查耳酮类（Dihydrochalcones）结构与分类-二氢查耳酮类二氢查耳酮在植物界分布极少，如蔷薇科梨属植物根皮和苹果种仁中含有的梨根苷。梨根苷结构与分类-二氢查耳酮类橙酮类橙酮类结构与分类-橙酮类结构与分类-橙酮类此类化合物较少见，主要存在于玄参科、菊科、苦苣苔科以及单子叶植物沙草科中，如在黄花波斯菊花中含有的硫磺菊素属于此类。硫磺菊素结构与分类-橙酮类花色素类

花色素类（Anthocyanidins）结构与分类-花色素类结构与分类-花色素类结构与分类-花色素类花色素在中药中多以苷的形式存在。花色素是使植物的花、果、叶、茎等呈现蓝、紫、红等颜色的色素，如矢车菊苷元、飞燕草苷元和天竺葵苷元以及它们所组成的苷最为常见。矢车菊苷元R1=OHR2=H飞燕草苷元R1=R2=OH天竺葵苷元R1=R2=H结构与分类-花色素类黄烷-3-醇类

黄烷-3-醇类（Flavan-3-ols）结构与分类-黄烷醇类结构与分类-黄烷醇类主要存在于含鞣质的木本植物中。如儿茶素为中药儿茶中的主要成分，有四个光学异构体，但在植物中主要有异构体两个，儿茶素和表儿茶素。儿茶素表儿茶素结构与分类-黄烷醇类黄烷-3，4-二醇类黄烷－3，4－二醇类（Flavan-3,4-diols)结构与分类-黄烷醇类这类化合物在植物界中分布很广，在含鞣质的木本植物和蕨类植物中更为多见，如：无色矢车菊素。无色矢车菊素结构与分类-黄烷醇类天然黄酮类化合物多和糖形成苷而存在，并且由于糖的种类、数量、连接位置及连接方式不同，组成了各种各样的黄酮苷类。结构与分类

组成黄酮苷的糖类主要有单糖、双糖类、三糖类和酰化糖类。单糖类：D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、L-鼠李糖、L-阿拉伯糖及D-葡萄糖醛酸等。结构与分类

除氧苷外，天然黄酮类化合物中还发现有C-键苷，如：葛根黄素木糖苷。和葛根素共同构成了中药葛根扩张冠状动脉的有效成分。葛根黄素木糖苷结构与分类

生物活性抗肝脏毒作用2抗菌及抗病毒作用4对心血管系统的作用31抗炎33雌性激素样作用6清除人体自由基作用8解痉作用35泻下作用37生物活性理化性质

显色反应

酸碱性溶解性

性状

黄酮类化合物多为晶状固体，少数（如黄酮苷类）为无定形粉末。旋光性：苷元中，二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷及黄烷醇具有手性碳，具旋光性，其余黄酮类无旋光性。理化性质形态旋光性性状黄酮的色原酮部分无色，在2-位上引入苯环后，即形成交叉共轭体系，使共轭链延长，因而呈现出颜色。黄酮、黄酮醇及其苷类多显灰黄~黄色，查耳酮为黄~橙黄色，异黄酮类显微黄色，二氢黄酮、二氢黄酮醇不显色。颜色性状理化性质在上述黄酮、黄酮醇分子中，尤其在7-位及4’-位引入—OH及—OCH3等供电基（助色团）后，通过电子转移、重排使化合物的颜色加深，但在其它位置引入—OH、—OCH3等供电基影响较小。花色素及其苷元的颜色随pH不同而改变，一般显红色(pH7)、紫色(pH8.5)、蓝色(pH8.5)等颜色。理化性质一般来说，游离苷元难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中。黄酮、黄酮醇、查耳酮等平面性强的分子，难溶于水;而二氢黄酮及二氢黄酮醇等非平面分子，分子间排列不紧密，分子间引力较低，有利于水分子进入，易溶于水。理化性质溶解性花色苷元（花青素）类以离子形式存在，水中溶解度较大。黄酮类苷元分子中羟基数越多，水中的溶解度越大。理化性质黄酮苷类，因为引入糖，水溶性比相应苷元为大；糖链越长，则水溶度越大，一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中，但难溶或不溶于苯、氯仿等有机溶剂中。理化性质黄酮类化合物因分子中多含有游离酚羟基，故显酸性，可溶于碱性溶液中。酸性强弱顺序依次为：7，4’-二OH7-或4’-OH一般酚OH5-OH

此性质可用于提取、分离及鉴定工作。理化性质酸性酸碱性黄酮类化合物分子中-吡喃酮环上的1-位氧原子，因有未共用的电子对，故表现微弱的碱性，可与强无机酸，如浓硫酸、盐酸等生成钅羊盐，但生成的钅羊盐不稳定，加水可分解。理化性质碱性酸碱性理化性质

黄酮类化合物的提取1黄酮苷类以及极性稍大的苷元一般可用丙酮、乙酸乙酯、乙醇提取3在提取花青素类化合物时，可加入少量稀盐酸2一些多糖苷类可用沸水提取4大多数黄酮苷元宜用氯仿、乙醚、乙酸乙酯等中极性溶剂提取，而对多甲氧基黄酮类游离苷元，甚至可用苯等低极性溶剂进行提取

黄酮类化合物的提取粗提物的精制处理方法有：（一）溶剂萃取法：利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同，选用不同溶剂进行地萃取可达到精制纯化目的。例如植物叶子的醇浸液，可用石油醚处理，以便除去叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素。某些药料水溶液则可加入多倍量浓醇，以沉淀除去蛋白质、多糖类等水溶性杂质。

黄酮类化合物的提取有时溶剂萃取过程也可以用逆流分配法连续进行。常用的溶剂系统有：水-醋酸乙酯，正丁醇-石油醚等。溶剂萃取过程在除去杂质的同时，往往还可以收到分离苷和苷元或极性苷元与非极性苷元的效果。

黄酮类化合物的提取（二）碱提取酸沉淀法

黄酮类化合物的提取(黄酮苷类)碱性水提取碱水提取液酸沉淀药材槐米中芦丁的提取槐米（槐树SophorajaponicaL.花蕾）加约6倍量水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳至pH=8~9，在此pH条件下微沸20~30分钟，趁热抽滤，残渣同上再加4倍水煎1次，趁热抽滤。合并滤液，在60~70℃下，用浓盐酸调至pH=5，搅匀，静置24小时，抽滤。沉淀物水洗至中性，60℃干燥得芦丁粗品，于水中重结晶，70~80℃干燥得芦丁纯品。

黄酮类化合物的提取在用碱酸法进行提取纯化时，应当注意所用碱液浓度不宜过高，以免在强碱性下，尤其加热时会破坏黄酮母核。在加酸酸化时，酸性也不宜过强，以免生成钅羊盐，致使析出的黄酮类化合物又重新溶解，降低产品收率。

黄酮类化合物的提取当药料中含有大量果胶、粘液等不溶性杂质时，如花、果类药材，宜用石灰乳或石灰水代替其它碱性水溶液进行提取，以使上述含羟基的杂质生成钙盐沉淀，不致溶出。这也有利于黄酮类化合物的纯化处理。

黄酮类化合物的提取较常用的分离方法有：（一）柱层析法分离黄酮类化合物常用的吸附剂或载体有硅胶聚酰胺氧化铝

黄酮类化合物的分离1.硅胶柱层析：此法应用范围最广，主要适于分离异黄酮二氢黄酮二氢黄酮醇高度甲基化（或乙酰化）的黄酮及黄酮醇类少数情况下，在加水去活化后也可用于分离极性较大的化合物，如多羟基黄酮醇及其苷类等。

黄酮类化合物的分离2.聚酰胺柱层析：对分离黄酮类化合物来说，聚酰胺是较为理想的吸附剂。其吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中羟基的数目与位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小。

黄酮类化合物的分离聚酰胺柱层析可用于分离各种类型的黄酮类化合物，包括苷及苷元、查耳酮与二氢黄酮等。

黄酮类化合物的分离黄酮类化合物从聚酰胺柱上洗脱时有下列规律：（1）若以含水移动相（如甲醇-水）作洗脱剂，黄酮苷比游离黄酮先洗脱下来，且洗脱的先后顺序一般是：叁糖苷＞双糖苷＞单糖苷＞游离黄酮；若以有机溶剂（如氯仿-甲醇）作洗脱剂，结果则相反，游离黄酮比苷先洗脱下来。

（2）母核上增加羟基，洗脱速度减缓。

黄酮类化合物的分离（3）不同类型黄酮化合物，先后流出顺序一般是：异黄酮二氢黄酮醇黄酮黄酮醇（4）分子中芳香核、共轭双键多者则吸附力强，所以查耳酮往往比相应的二氢黄酮难于洗脱。

黄酮类化合物的分离黄酮类化合物的分离（5）聚酰胺对处于C4羰基邻位的羟基（即3-或5-位）的吸附力小于处于其它位置的羟基；具有邻二酚羟基的黄酮的吸附力小于具有间二酚羟基或对二酚羟基的黄酮。黄酮类化合物的分离（6）洗脱溶剂的影响聚酰胺与各类化合物在水中形成氢键的能力最强，在有机溶剂中较弱，在碱性溶剂中最弱。因此，各种溶剂在聚酰胺柱上的洗脱能力由弱至强的顺序为：水＜甲醇或乙醇（浓度由低到高）＜丙酮＜稀氢氧化钠水溶液或氨水＜甲酰胺＜二甲基甲酰胺（DMF）＜尿素水溶液。3.葡聚糖凝胶柱层析：对于黄酮类化合物的分离，主要用两种型号的凝胶：Sephadex-G型及Sephadex-LH-20型。

黄酮类化合物的分离葡聚糖凝胶分离黄酮类化合物的机理是：分离游离黄酮时，主要靠吸附作用。凝胶对黄酮类化合物的吸附程度取决于游离酚羟基的数目。但分离黄酮苷时，则分子筛的属性起主导作用。在洗脱时，黄酮苷类大体上是按分子量由大到小的顺序流出柱体。

黄酮类化合物的分离分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小大顺序洗脱。分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大小顺序洗脱。总的洗脱顺序：含糖多的苷含糖少的苷游离苷元（极性小大）

黄酮类化合物的分离（二）梯度pH萃取法梯度pH萃取法适合于酸性强弱不同的黄酮苷元的分离。可以将混合物溶于有机溶剂（如乙醚）后，依次用5%NaHCO3萃取5%Na2CO3萃取0.2%

NaOH萃取4%NaOH萃取

黄酮类化合物的分离

酸性:7，4-二OH(溶于5%NaHCO3液)

7-或4-一OH（5%Na2CO3液）

一般OH（0.2%NaOH液）5-OH（4%NaOH液）

黄酮类化合物的分离1、盐酸-镁粉（或锌粉）反应：多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红~紫红色，少数显紫~蓝色，B环有-OH或OCH3取代时，颜色随之加深。查耳酮、橙酮、儿茶素类不显色。异黄酮类一般不显色。（一）还原反应检识技术-化学检识技术花色素及部分查耳酮、橙酮等在单纯浓盐酸酸性条件下颜色也会发生变化，故须先做空白对照。检识技术-化学检识技术2、四氢硼钠（钾）反应：NaBH4是对二氢黄酮类化合物专属性较高的一种还原剂。与二氢黄酮类化合物产生红~紫色。其它黄酮类化合物均不显色。（一）还原反应检识技术-化学检识技术

1、铝盐：生成的络合物多为黄色，并有荧光，可用于定性及定量分析。常用试剂为1%三氯化铝或硝酸铝溶液。（二）金属盐类试剂的络合反应检识技术-化学检识技术2、锆盐：多用2%二氯氧化锆（ZrOCl2）甲醇溶液。黄酮类化合物分子中有游离的3-OH或5-OH存在时，均可反应生成黄色的锆络合物。（二）金属盐类试剂的络合反应检识技术-化学检识技术检识技术-化学检识技术3、氯化锶（SrCl2）：在氨性甲醇溶液中，可与分子中具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物生成绿色~棕色乃至黑色沉淀。（二）金属盐类试剂的络合反应检识技术-化学检识技术在日光及紫外光下，通过纸斑反应，观察样品用氨蒸气和其他碱性试剂处理后的颜色变化的情况。二氢黄酮类可转变为查耳酮类化合物，显橙~黄色。（三）碱性试剂显色反应检识技术-化学检识技术黄酮醇类在碱液中先呈黄色，通入空气后变为棕色。当分子中有邻二酚羟基取代或3,4’-二羟基取代时，在碱液中很快氧化，最后生成棕绿色沉淀。（三）碱性试剂显色反应检识技术-化学检识技术例如：苯：甲酸甲酯：甲酸（5：4：1）苯：甲醇：HAC（35：5：5）

CHCL3：MeOH（8.5：1.5）丁醇：吡啶：甲酸（40：10：2）黄酮类化合物的检识适于苷和苷元（双向层析法）

1.溶剂的选择：

第一向：BAW洗脱、TBA第二向：水性溶剂，2～6％HAC水，3％NaCL（一）PC法黄酮类化合物的检识黄酮类化合物的检识第一向采用醇性展开剂，为正相分配色谱，极性小的化合物比极性大的化合物Rf值大。第二向常采用水性展开剂，其色谱行为类似于反相分配色谱，极性大的化合物比极性小的化合物Rf值大。黄酮类化合物的检识1．水性展开剂如3%～5%乙酸展开时，平面型分子如黄酮、黄酮醇、查耳酮等，几乎停留在原点不动（Rf＜0.02）；而非平面型分子如二氢黄酮、二氢黄酮醇、二氢查耳酮等，因亲水性稍强，故Rf值较大（0.10～0.30）。Rf值与结构之间的关系黄酮类化合物的检识2．同一类型的游离黄酮类化合物，在用醇性展开剂（如BAW）展开时，如分子中羟基数目越多，极性越大，则Rf值越小；羟基数目越少，则Rf值越大。Rf值与结构之间的关系黄酮类化合物的检识3．黄酮苷类如用醇性展开剂展开，因极性较游离黄酮增大，故Rf值较后者相应降低，故对同一类型苷元的黄酮苷其Rf值依次为：苷元＞单糖苷＞双糖苷。但在用水性展开剂如水或2%～8%乙酸、3%氯化钠或1%盐酸展开时，则上列顺序将会颠倒，游离黄酮几乎停留在原点不动，糖链越长，则Rf值越大。Rf值与结构之间的关系显色剂：（1）可见光/荧光灯分别观察（2）氨熏后荧光灯观察（3）喷AlCL3/荧光灯观察黄酮类化合物的检识黄酮类化合物的检识适于弱极性苷元和苷展开剂：苷元——有机溶剂的不同比例苷——含水的中强极性有机溶剂（二）硅胶TLC法例如：苯：甲酸甲酯：甲酸（5：4：1）苯：甲醇：HAC（35：5：5）

CHCL3：MeOH（8.5：1.5）丁醇：吡啶：甲酸（40：10：2）黄酮类化合物的检识黄酮类化合物的检识展开剂：分离检识游离黄酮常用有机溶剂为展开剂，如氯仿-甲醇（94∶6，96∶4）分离检识黄酮苷常用含水的有机溶剂为展开剂，如甲醇-乙酸-水（90∶5∶5）、甲醇-水（1∶1）Rf——在含水溶剂中服从聚酰胺吸附机制；在亲脂性溶剂中服从分配机制（三）聚酰胺薄层色谱一、目前主要采用的方法有：与标准品或与文献对照PPC或TLC得到的Rf或hRf值（Rf100）分析对比样品在甲醇溶液中及加入诊断试剂后得到的UV光谱1H-NMR13C-NMRMS黄酮类化合物的结构鉴定黄酮类化合物的检识展开剂：分离检识游离黄酮常用有机溶剂为展开剂，如氯仿-甲醇（94∶6，96∶4）分离检识黄酮苷常用含水的有机溶剂为展开剂，如甲醇-乙酸-水（90∶5∶5）、甲醇-水（1∶1）Rf——在含水溶剂中服从聚酰胺吸附机制；在亲脂性溶剂中服从分配机制（三）聚酰胺薄层色谱一、目前主要采用的方法有：与标准品或与文献对照PPC或TLC得到的Rf或hRf值（Rf100）分析对比样品在甲醇溶液中及加入诊断试剂后得到的UV光谱1H-NMR13C-NMRMS黄酮类化合物的结构鉴定二、紫外光谱在黄酮类鉴定中的应用可用于确定黄酮母核类型及确定某些位置是否含有羟基。一般程序：

①测定样品在甲醇中的UV谱以了解母核类型；

②在甲醇溶液中分别加入各种诊断试剂后测UV谱和可见光谱以了解3,5,7,3’,4’有无羟基及邻二酚羟基；

③苷类可水解后（或先甲基化再水解），再用上法测苷元的UV谱以了解糖的连接位置。黄酮类化合物的结构鉴定（一）黄酮类化合物在甲醇溶液中的紫外光谱多数黄酮类化合物由两个主要吸收带组成：

带I在300-400nm区间，由B环桂皮酰系统的电子跃迁所引起。BB黄酮类化合物的结构鉴定带II在240-285nm区间，由A环苯甲酰系统的电子跃迁所引起。AA黄酮类化合物的结构鉴定

带II(240-285nm)（苯甲酰系统）带I(300-400nm)桂皮酰系统类型说明

250-285304-350黄酮类

-OH越多，带I带II越红移

328-357黄酮醇类(3-OR)

352-385黄酮醇类(3-OH)

245-270270-295300-400异黄酮类二氢黄酮（醇）B环上有-OH,OCH3对带I影响不大

220-270340-390或340-390(Ia)300-320(Ib)查耳酮类查耳酮2’-OH使带I红移的影响最大370-430(3-4个小峰)橙酮类

不同化合物的UV光谱5，7，4′-三羟基异黄酮5，7，4′-三羟基二氢黄酮5，7，4′-三羟基黄酮5，7，4′-三羟基黄酮醇4，2′，4′-三羟基查尔酮4，6，4′-三羟基橙酮5，7，4′-三羟基3-O-鼠李糖花青素苷(二）加入诊断试剂后引起的位移及结构测定黄酮类化合物的结构鉴定加入试剂带II带I说明样品+MeOH（黄酮类及黄酮醇类）250-285304-385两峰强度基本相同，具体位置与母核上电负性取代基(-OH,-OCH3)有关，-OH,-OCH3越多，越长移

+NaOMe40-60nm（不变或增强）50-60nm（下降）有4’-OH，无3-OH

有3-OH，无4’-OH有3,4’-OH或3,3’,4’-OH（衰减更快）

7-OH带I，II随加NaOMe时间延长，逐渐衰减

320-330nm有吸收,成苷后消失+NaOAc(未熔融)5-20在长波一侧有明显的肩峰7-OH+NaOAc(熔融)

40~65有4’-OH+NaOAc/H3BO35-1012-30有6,7-OH或7,8-OH(5,6-OH无)B环有邻二酚羟基

AlCl3/HCl

6050-6035-5517-200有3-OH有3,5-二OH有5-OH，无3-OH有6-OR无3-OH,5-OHAlCl3光谱-AlCl3/HCl光谱

30-4050-650B环有邻二酚羟基A,B环皆有邻二酚羟基A,B环皆无邻二酚羟基带II带I说明说明：（1）+NaOMe或NaOAc,OHONa，变为离子化合物，共轭系统中的电子云密度增加，红移另有3,4’-OH或3,3’,4’-OH时，在NaOMe作用下易氧化破坏，故峰有衰减。（2）NaOAc为弱碱，仅使酸性较强者，如7,4’-OH解离。黄酮类化合物的结构鉴定（3）形成络合物的能力：黄酮醇3-OH>黄酮5-OH（二氢黄酮5-OH）>邻二酚羟基>二氢黄酮醇5-OH邻二酚羟基和二氢黄酮醇5-OH在酸性条件下不与AlCl3络合；非酸性条件下，五者皆与Al3+络合；形成络合物越稳定，红移越多。黄酮类化合物的结构鉴定（4）根据只加AlCl3和加入AlCl3及盐酸的紫外光谱吸收峰位相减的结果，可以判断邻二酚羟基的取代情况。黄酮类化合物的结构鉴定山柰苷山柰酚UVλmax(nm)带II带I

带II带IMeOH265345267367NaOMe265388278416（分解）AlCl3275399268424AlCl3/HCl275399269424NaOAc265399276387NaOAc/H3BO3

265345267367从中药柴胡中分离得到山柰苷，经酸水解后，用PC检出有鼠李糖，山柰苷及山柰酚的紫外光谱数据如下：黄酮类化合物的结构鉴定山柰酚3，7-二鼠李糖苷黄酮类化合物的结构鉴定三、1H-NMR常用溶剂：氘代氯仿（CDDl3），氘代二甲基亚砜（DMSO-d6），氘代吡啶（C5D5N）。也可将黄酮类化合物制成三甲基硅醚衍生物溶于四氯化碳中进行测定。黄酮类化合物的结构鉴定黄酮类化合物1H-NMR谱(DMSO-d6)羟基的特征δ5－OH：≈12ppmδ7－OH：≈11ppmδ3－OH：≈10ppm黄酮类化合物的结构鉴定氘代二甲基亚砜（DMSO-d6）对鉴别黄酮母核上的酚羟基，是十分理想的溶剂，在试样中加入重水（D2O）羟基质子信号消失。黄酮类化合物的结构鉴定（一）A环质子1．5,7-二-OH黄酮黄酮类1H-NMR黄酮类化合物的结构鉴定黄酮类化合物的结构鉴定当7-OH成苷时，则H-6及H-8信号均向低场方向位移。黄酮类化合物的结构鉴定黄酮类化合物的结构鉴定2．7-OH黄酮H-5较H-6、H-8低场，是由于羰基的负屏蔽效应的影响。H-6、H-8较5,7-二OH黄酮在较低场，且相互位置可能颠倒。黄酮类化合物的结构鉴定黄酮类化合物的结构鉴定（二）

B环质子δ6.5-81．4’-氧取代黄酮类化合物H-3’,5’6.5-7.1,d,J=8.5HzH-2’,6’7.1-8.1,d,J=8.5Hz由于C环对H-2’,6’的负屏蔽作用大于对H-3’,5’，且H-3’,5’受4’-OR的屏蔽作用，故前者较低场；C环氧化程度越高，H-2’,6’处于越低场的位置。黄酮类化合物的结构鉴定2．3′,4′-二氧取代黄酮类化合物B环H-5′因与H-6′的邻位偶合以双重峰的形式出现在δ6.70～7.10（d,J=Ca.8.0Hz）。H-2′因与H-6′的间偶，亦以双重峰的形式出现在约δ7.20(d,J=2.0Hz)处。H-6′因分别与H-2′和H-5′偶合，则以双二重峰出现在约δ7.90(dd,J=2.0和8.0Hz)处。黄酮类化合物的结构鉴定从H-2′和H-6′的化学位移分析，可以区别黄酮和黄酮醇的3′,4′-位上是3′-OH，4′-OMe还是3′-OMe，4′-OH。在4′-OMe，3′-OH黄酮和黄酮醇中，H-2′通常比H-6′出现在高磁场区，而在3′-OMe，4′-OH黄酮和黄酮醇中,H-2′和H-6′的位置则相反。黄酮类化合物的结构鉴定3．3′,4′,5′-三氧取代黄酮类化合物如果3′,4′,5′-均为羟基，则H-2′和H-6′以一个相当于二个质子的单峰出现在δ6.50～7.50区域。但当3′-或5′-OH被甲基化或苷化，则H-2′和H-6′因相互偶合而分别以一个双重峰（J=Ca.2.0Hz）出现。（三）

C环质子

1.黄酮和黄酮醇类黄酮类H-3常以一个尖锐的单峰出现在δ6.30处黄酮醇类的3位有含氧取代基，故在1H-NMR谱上无C环质子黄酮类化合物的结构鉴定黄酮类化合物的结构鉴定（三）

C环质子

2．异黄酮类

H-2因受到1-位氧原子和4-位羰基影响，以一个尖锐的单峰出现在δ7.60～7.80，比一般芳香质子位于较低的磁场。黄酮类化合物的结构鉴定（三）

C环质子

3．二氢黄酮类H-2因受两个不等价的H-3偶合，故被分裂成一个双二重峰（Jtrans=Ca.11.0Hz，Jcis=Ca.5.0Hz），中心位于约δ5.2。两个H-3各因偕偶（J=17.0Hz）和与H-2的邻偶也被分裂成一个双二重峰（Jtrans=Ca.11.0Hz，Jcis=Ca.5.0Hz），中心位于δ2.80处黄酮类化合物的结构鉴定（三）

C环质子

4．二氢黄酮醇类

H-2和H-3为反式二直立键，故分别以二重峰出现（Jaa=Ca.11.0Hz），H-2位于δ4.80～5.00处，H-3位于δ4.10～4.30处。当3-OH成苷后，则使H-2和H-3信号均向低磁场方向位移，H-2位于δ5.0～5.60，H-3位于4.30～4.60间黄酮类化合物的结构鉴定（三）

C环质子

5．查耳酮类

H-α和H-β分别以二重峰（J=Ca.17.0Hz）形式出现，其化学位移分别约为δ6.70～7.40和δ7.00～7.70处。黄酮类化合物的结构鉴定（三）

C环质子

6．橙酮类

C环的环外质子=CH常以单峰出现在δ6.50～6.70处，其确切的峰位取决于A环和B环上羟基取代情况，增大羟基化作用，使该峰向高磁场区位移（与没有取代的橙酮相比），其中以C4-位（-0.19）和C6-位（-0.16）羟基化作用影响最明显。黄酮类化合物的结构鉴定（四）

糖上的质子糖与苷元相连时，糖上1˝-H与其它H比较，一般位于较低磁场区。因-OR(R=苷元)不表现供电子，仅表现吸电子的诱导作用，端基H受两个O的诱导，处于低场（4.0-6.0）黄酮类化合物的结构鉴定(五)其他质子1．酚羟基质子测定酚羟基质子，可将黄酮类化合物直接用DMSO-d6为溶剂测定。例如，在木犀草素-7-0-β-D-葡萄糖苷的1H-NMR谱中，酚羟基质子信号分别出现在δ12.99(5-OH)、δ10.01(4′-OH)和δ9.42(3′-OH)处。向被测定的样品溶液中加入D2O，这些信号即消失。

(五)其他质子2．甲氧基质子除少数例外，甲氧基质子一般以单峰出现在δ3.50～4.10处。虽然糖基上的一般质子也在此区域出现吸收峰，但它们均不是单峰，故极易区别。四、13C-NMR方法：（1）对比法：与简单的模型化合物如苯乙酮、桂皮酸及它们的衍生物光谱的比较；（2）计算法：用经验的简单芳香化合物的取代位移加和规律进行计算；（3）选用各种一维和二维NMR技术。黄酮类化合物的结构鉴定（一）骨架类型的判断根据中央三碳链的碳信号，即先根据羰基碳的δ值，再结合C2、C3在偏共振去偶谱中的裂分和δ值判断。黄酮类化合物的结构鉴定C=OC-2（或C-β）C-3（或C-α）归属

174.5~184.0(s)160.5~163.2(s)104.7~111.8(d)黄酮类149.8~155.4(d)122.3~125.9(s)异黄酮类147.9(s)136.0(d)黄酮醇类182.5~182.7(s)146.1~147.7(s)111.6~111.9(d)(=CH-)橙酮类

188.0~197.0(s)

136.9~145.4(d)116.6~128.1(d)查耳酮类75.0~80.3(d)42.8~44.6(t)二氢黄酮类82.7(d)71.2(d)二氢黄酮醇类五、质谱在黄酮类结构测定中的应用多数黄酮类化合物苷元在电子轰击质谱(El-MS)中因分子离子峰较强，往往成为基峰，故一般无须作成衍生物即可进行测定。黄酮类化合物的结构鉴定但是当测定极性强、难气化以及对热不稳定的黄酮苷类化合物时，则采用FD-MS和FAB-MS、ESI-MS等软电离质谱技术获得强的分子离子峰[M]+及具有偶数电子的准分子离子峰(quasi-molecularionpeak)[M+H]+。黄酮类化合物的结构鉴定(一)黄酮类化合物苷元的电子轰击质谱

(El-MS)黄酮类化合物苷元的El-MS中，除分子离子峰[M]+外，也常常生成[M-1]+即(M-H)基峰。如为甲基化衍生物，则可以得到[M-15]+即(M-CH3)离子。黄酮类化合物的结构鉴定黄酮类化合物主要有下列两种基本裂解途径：

途径-I（RDA裂解）：

120102

黄酮类化合物的结构鉴定途径-II此外，还有分子离子M+.生成[M-1]+，(M-H)及[M-28]+.(M-CO)；由A1生成[A1-28]+.，(A1-CO)及B2生成[B2-28]+，(B2-CO)等碎片离子。黄酮类化合物的结构鉴定化合物A1+.B1+.黄酮1201025，7-二氢黄酮1521025，7，4'-三羟基黄酮（芹菜素）1521185，7-二羟基，4'-甲氧基黄酮（刺槐素）152132A-环的取代图式可通过测定A1+.的m/z的值进行确定

。同样，根据B-环碎片离子的m/z值，也可精确测定B环的取代情况。一些黄酮类化合物的质谱数据ContentsClicktoaddTitle2ClicktoaddTitle4ClicktoaddTitle31ClicktoaddTitle33HotTipHowdoIincorporatemylogotoaslidethatwillapplytoalltheotherslides?Onthe[View]menu,pointto[Master],andthenclick[SlideMaster]or[NotesMaster].Changeimagestotheoneyoulike,thenitwillapplytoalltheotherslides.DiagramThemeGallery

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