离心机操作及血液样本处理

实验(shíyàn)基础技能培训李玉涛2017-07第一页，共三十七页。整理课件Part1血液基本成分及其分离方法(fāngfǎ)Part2离心机简介及使用第二页，共三十七页。整理课件Part1血液(xuèyè)基本成分及其分离方法一、血液基本成分二、血液物理性质三、血液采集常用方法四、血液成分(chéngfèn)分离方法第三页，共三十七页。整理课件一、血液(xuèyè)基本成分血细胞形态、数量、比例和血红蛋白含量的测定称为血像。患病时，血像常有显著变化，故检查血像对了解机体状况和诊断疾病十分(shífēn)重要。第四页，共三十七页。整理课件1、红细胞红细胞（erythrocyte，redbloodcell）直径7～8.5μm，呈双凹圆盘状，中央(zhōngyāng)较薄（1.0μm），周缘较厚（2.0μm）红细胞的这种形态使它具有较大的表面积（约140μm2），便于携O2和部分CO2。成熟红细胞无细胞核，也无细胞器，胞质内充满血红蛋白（hemoglobin,Hb）。红细胞的渗透压与血浆相等，使出入红细胞的水分维持平衡。当血浆渗透压降低时，过量水分进入细胞，细胞膨胀成球形，甚至破裂，血红蛋白逸出，称为溶血（hemolysis）第五页，共三十七页。整理课件2、白细胞白细胞（leukocyte,whitebloodcell）为无色有核的球形细胞(xìbāo)，体积比红细胞(xìbāo)大，能作变形运动，具有防御和免疫功能。第六页，共三十七页。整理课件白细胞分类(fēnlèi)光镜下，根据(gēnjù)白细胞胞质有无特殊颗粒，可将其分为有粒白细胞和无粒白细胞两类。有粒白细胞又根据(gēnjù)颗粒的嗜色性，分为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。无粒白细胞有单核细胞和淋巴细胞两种。第七页，共三十七页。整理课件2.1、中性(zhōngxìng)粒细胞中性粒细胞（neutrophilicgranulocyte,neutrophil）占白细胞总数的50%－70%，是白细胞中数量最多的一种。具有活跃的变形运动和吞噬(tūnshì)功能。细胞呈球形，直径10－12μm，核染色质呈团块状。核的形态多样，有的呈腊肠状，称杆状核；有的呈分叶状，叶间有细丝相连，称分叶核。第八页，共三十七页。整理课件中性(zhōngxìng)粒细胞异常中性粒细胞增高见于：a．急性感染和化脓性感染：肺炎、败血症、脓肿等。b．组织损伤：大手术后、心肌梗塞、肺梗塞等。c．恶性肿瘤：急、慢性(mànxìng)白血病、淋巴瘤等。d．各种中毒：尿毒症、糖尿病酸中毒等。中性粒细胞减少见于：a．某些传染病：流感、伤寒、付伤寒、麻疹。b．某些血液病：再障、粒细胞缺乏症、白细胞减少症。c．化疗或放疗后，抗癌药物，X线及镭照射。d．其它：脾功能亢进，自身免疫性疾病，高度恶病质。第九页，共三十七页。整理课件2.2、嗜酸性(suānxìnɡ)粒细胞嗜酸性粒细胞（eosinophilicgranulocyte,eosinophil）占白细胞总数的0.5%－3%。与变态反应(biàntàifǎnyìng)有关，并有吞噬抗原抗体复合物的作用。细胞呈球形，直径10～15μm，核常为2叶，胞质内充满粗大（直径0.5～1.0μm）、均匀、略带折光性的嗜酸性颗粒，染成桔红色。第十页，共三十七页。整理课件嗜酸性(suānxìnɡ)粒细胞异常嗜酸性粒细胞增多见于：a．变态反应性疾病：支气管哮喘、药物过敏、荨麻疹等。b．寄生虫病：蛔虫病、钩虫病、血吸虫病(xuèxīchónɡbìnɡ)。c．某些皮肤病：湿疹、牛皮癣、剥脱性皮炎等。d．某些血液病：慢粒、恶性淋巴瘤、嗜酸性粒细胞性白血症等。嗜酸性粒细胞减少见于：a．应用糖皮质激素、促肾上腺皮质激素。b．伤寒、副伤寒等病患者。第十一页，共三十七页。整理课件2.3、嗜碱性(jiǎnxìnɡ)粒细胞嗜碱性(jiǎnxìnɡ)粒细胞（basoophilicgranulocyte,basophil）数量最少，占白细胞总数的0～0.15。细胞呈球形，直径10－12μm。胞核分叶或呈S形或不规则形，着色较浅。胞质内含有嗜碱性颗粒嗜碱性粒细胞主要参与特殊的免疫反应。第十二页，共三十七页。整理课件嗜碱性(jiǎnxìnɡ)粒细胞异常增多见于：a．慢性(mànxìng)粒细胞白血病、嗜碱性粒细胞白血病。b．某些转移癌及骨髓纤维化。减少一般无临床意义。第十三页，共三十七页。整理课件2.4、淋巴细胞淋巴细胞（lymphocyte）占白细胞总数的20%～30%，圆形或椭圆形，大小不等。T细胞约占淋巴细胞总数的75%，参与细胞免疫，如排斥异移体移植物、抗肿瘤等，并具有免疫调节功能。B细胞约占血中淋巴细胞总数的10%～15%。B细胞受抗原刺激后增殖分化为浆细胞，产生(chǎnshēng)抗体，参与体液免疫。第十四页，共三十七页。整理课件淋巴细胞异常(yìcháng)增多见于：a．某些病毒(bìngdú)或细胞所致的传染病：传染性淋巴细胞增多症、传染性单核细胞增多症、传染病恢复期、结核病、百日咳。b．淋巴细胞性白血病、白血性淋巴肉瘤。减少见于：a．应用肾上腺皮质激素、接触放射线。b．细胞免疫缺陷病、某些传染病的急性期。第十五页，共三十七页。整理课件2.5、单核细胞单核细胞（monocyte）占白细胞总数的3%～8%。具有游走性和吞噬作用。单核细胞为白细胞中体积(tǐjī)最大的细胞。直径14～20μm，呈圆形或椭圆形。胞核形态多样，呈卵圆形、肾形、马蹄形或不规则形等。胞质较多，呈弱嗜碱性，含有许多细小的嗜天青颗粒第十六页，共三十七页。整理课件单核细胞异常(yìcháng)增多见于：a．某些感染：伤寒、结核、疟疾、黑热病、亚急性细菌性心内膜炎。b．某些血液病：单核细胞性白血病、淋巴瘤、骨髓(ɡǔsuǐ)异常增殖综合症、恶性组织细胞病。减少一般无临床意义。第十七页，共三十七页。整理课件二、血液(xuèyè)物理特性血液(xuèyè)密度为1.050—1.060×10^3kg/m^3，红细胞的密度为1.090×10^3kg/m^3，血浆的密度为1.025—1.030×10^3kg/m^3。第十八页，共三十七页。整理课件血液(xuèyè)的颜色通常抽的是静脉血，所以外观看上去呈暗红色。若血含较多的是高铁血红蛋白或其他血红蛋白衍生物，则呈紫黑色。血浆（或血清）因含少量胆红素，看上去呈透明淡黄色；若含乳糜微粒，则呈乳白浑浊(húnzhuó)；若发生溶血，则呈红色血浆。第十九页，共三十七页。整理课件三、血液(xuèyè)采集常用方法红色试管帽采血管采血管中不含任何添加剂，适用于常规生化血清(xuèqīng)检验，对检验结果无影响，缺点：离心不到位或者温育时间不够，容易形成纤维蛋白，容易堵塞设备针孔第二十页，共三十七页。整理课件三、血液采集(cǎijí)常用方法紫色试管帽采血管

采血管中含EDTA-K2抗凝剂，一般(yībān)采取喷雾制作，使得抗凝剂均匀分布管壁，制备标本为全血，一般(yībān)适用于常规的血液学检测第二十一页，共三十七页。整理课件常用(chánɡyònɡ)抗凝剂（1）乙二胺四乙酸二钠（简称EDTANa2）抗凝原理：可螯合血液中的钙离子而阻止血液凝固(nínggù)。优点：抗凝作用强，且不改变血细胞的形态和体积，可防止血小板聚集。应用：适于血液学检验，但输血不能用。草酸盐合剂（草酸钾及草酸铵合剂）抗凝原理：夺取血中的游离钙而形成不溶解的草酸钙，而达到抗凝。优点：溶解度大，抗凝作用强。缺点：草酸钾使红细胞缩小约6％，而草酸铵可使红细胞膨胀。应用：适于除红细胞压积容量测定的血液检验。第二十二页，共三十七页。整理课件常用(chánɡyònɡ)抗凝剂（2）枸橼酸钠（柠檬酸钠）抗凝原理：与血中游离钙离子形成非离子化的可溶性的枸橼酸钙复合物，从而阻止血液(xuèyè)凝固。优点：与血中游离钙离子结合松散。缺点：引起水及无机盐在血细胞及血浆之间分布的改变。应用：常用于血沉淀及输血时的抗凝，不适用于血液化学检验。肝素抗凝原理：阻止血中的凝血酶原转变为凝血酶，防止血凝。优点：抗凝作用强，不影响红细胞的大小，对血液化学分析干扰少。缺点：价格贵，抗凝时间短，其抗凝血做白细胞分数计数时，白细胞着色不佳。应用：血液有机成分、无机成分的分析。第二十三页，共三十七页。整理课件四、血液成分(chéngfèn)分离1血清(xuèqīng)血浆分离2白细胞分离 2.1裂解红细胞法 2.2Ficoll分离法第二十四页，共三十七页。整理课件1、血清(xuèqīng)血浆的分离血清(xuèqīng)和血浆的最大区别就是血清(xuèqīng)中不含纤维蛋白原紫色采血管颠倒混匀后，1200g离心10min，4度，取上清。红色采血管需用枪头搅匀后，1200g离心10min，4度，取上清第二十五页，共三十七页。整理课件2.1、白细胞分离(fēnlí)-裂解红细胞法红细胞裂解液主要成分：NH4Cl，KHCO3，Na2EDTA红细胞裂解液裂解原理：氯化铵通过在其细胞膜进行氢氧根／碳酸氢根和氯离子的交换，改变其渗透压，造成(zàochénɡ)红细胞胀大破裂；外周血淋巴细胞受影响较少因其细胞膜的离子转运通道不同。第二十六页，共三十七页。整理课件2.1、白细胞分离(fēnlí)-裂解红细胞法主要实验流程：将10X储存(chǔcún)液稀释到1X工作浓度；加入血沉棕黄层的6-10倍体积的1X红细胞裂解液，吹打均匀冰上裂解10分钟。裂解完毕后，50ml离心管中液体应呈透明红色，且下方无红色沉淀。1500g，10min，4度离心，弃去上层液体，仅保留下层白色沉淀。第二十七页，共三十七页。整理课件2.2、白细胞分离(fēnlí)-Ficoll分离法原理:

常用来分离人外周血单个核细胞（PBMC）的分层液比重是1.077±0.001的聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F／H)分层液。Ficoll是蔗糖的多聚体，中性，平均(píngjūn)分子量为400,000，不穿过生物膜。红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重，离心后漂浮于分层液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液液面的细胞，就可从外周血中分离到单个核细胞。第二十八页，共三十七页。整理课件2.2、白细胞分离(fēnlí)-Ficoll分离法第二十九页，共三十七页。整理课件Part2离心机简介(jiǎnjiè)及使用/experiment/628/629/47523.htm第三十页，共三十七页。整理课件1、离心机简介(jiǎnjiè)离心机借助转轴高速旋转产生离心力，使不同密度、不同大小的物质分开，能达到初步分离纯化的目的，是实验室必不可少的仪器。按照转速(zhuànsù)可以分为低速(<8000rpm)、高速(8000-20000)、超速(>50000)三种类型。根据体积大小和摆放位置又可分为台式离心机和落地式离心机。台式离心机体积比较小，常是中低速离心机；落地式离心机体积较大，常带有降控温装置，大多是高速离心机。第三十一页，共三十七页。整理课件2、离心机的摆放(bǎifànɡ)离心机一般放在干燥、避免阳光直射的地方。离心机散热量比较大，周围不要堆放杂物，四周离墙壁、挡板等不透气、散热性差的物品至少10cm以上。离心机尽量单独放在一个房间，周围绝对(juéduì)不要放有机试剂、易燃品第三十二页，共三十七页。整理课件3、离心机使用(shǐyòng)注意事项根据实验所需和使用的离心管，含有有机试剂的液体要用特殊的离心管；选择合适的转头(zhuǎntóu)，转速绝对禁止超过转头(zhuǎntóu)标明的最高转速。离心管的对称放置和重量配平，同时应该注意离心管和转头可以承受的最大重量的溶液，液体最多装离心管全体积的3/4。第三十三页，共三十七页。整理课件4、离心机保养(bǎoyǎng)每次使用完毕，都要将离心机盖儿打开，使得热量或者水气自然蒸发，如之前使用了低温离心，可能有结冰，则要等冰融化，及时用干燥棉纱布擦洗干净，等无明显水汽时再盖上盖子。如果(rúguǒ)离心机转头可以替换，则每个转头使用完毕后都要及时取出，用干净的、干燥的医用纱布擦洗干净，倒扣放置，切勿使用锐器刮擦。操作人员离开时候要切断电源。第三十四页，共三十七页。整理课件5、具体操作流程(liúchéng)（1）1.设定使用温度（通常为4℃）后，先把离心陀放入离心舱中，注意离心陀要卡好轴心；关上舱门，离心舱的温度开始下降，预冷时间要充足。2. 把样本装入适当的离心管，双双用天平平衡重量，盖上离心管盖子并旋紧。

1）注意离心管只装七成满，虽然加有盖子，但也可能因离心力太强而外泄。

2）离心管通常都会放在碎冰上，注意取出平衡时，要把碎冰的液体擦拭干净。

3）落单的离心管要用另一只装有清水的离心管平衡。3. 把平衡好的离心管对称地放入离心陀中，盖上离心陀的盖子，注意有无(yǒuwú)旋紧。4. 关上离心机舱门，在仪表板上调好所要的转速与时间。5. 确定所有步骤无误后，按Start钮开动，离心机渐渐加速，此时要密切监控。

1）如在运行中听到不正常声音或者闻到什么异味，应立即采取刹