实验5小鼠脑片免疫组织化学(SABC法)实验课件_第1页
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实验5小鼠脑片免疫组织化学(SABC法)实验实验目的了解免疫组织化学实验原理,熟练掌握实验操作步骤。二、实验原理免疫组织化学技术(Immunohistochemistry)是指用免疫学原理(从组织细胞水平进行抗原和抗体结合),通过特异的抗原抗体反应标记上可见的显示物系统来检查细胞及组织上原位抗原或抗体成分的方法。般认为凡具有抗原性或半抗原性物质都可以用免疫细胞化学方法检测并显示出来。在光学显微镜、荧光显微镜或电子显微镜下观察其性质定位,还可以利用细胞分光光度计、图像分析仪、共聚焦显微镜等进行细胞原位半定量测定。免疫组织化学的显著特点是特异性强,因为免疫学的基本原理是抗原与抗体“一对一”的特异结所以免疫组织化学从理论上讲也是“一对一”的组织细胞中抗原的特定显示。如角蛋白keratin)显示上皮成分LcA显示淋巴细胞成分。只是当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应。二是敏感性高:由于ABC法或SP法的出现,使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍乃至可在组织细胞中与抗原结合,这样高敏感性的抗体抗原反应使免疫组化的方法越来越方便地应用于常规诊断工作中。三是定位准确、形态与功能相结合:虽然聚合酶链反应(PcR)方法已经广泛地应用于疾病的诊断,但由于不能在组织和细胞内进行明确的定位而限制了PcR在病理组织学上的应用。免疫组化则可在组织和细胞中进行抗原的准确定位,因而可以同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察,这样就可以进行形态与功能相结合的研究,对于病理学研究的深入是十分有意义实验器材镊子,剪刀,针管,输液管,蛙板四、实验步骤1.载玻片准备将新载玻片置于洗涤剂中煮沸30min,先后用清水和蒸馏水冲洗干净,晾干,放入浓硫酸-重铬酸钾洗液中浸泡12小时,流水冲洗后再用蒸馏水清洗,干燥,在95%的酒精中浸泡24h,擦干。盖玻片直接泡酸,其余处理步骤同载玻片。处理后的载玻片用稀释度为1:10的多聚赖氨酸(防脱片:能较好吸附细胞和组织)浸泡5min,37℃烘干,密封后保存备用。2.取材昆明品系小鼠,用0.4%戊巴比妥钠行腹腔麻醉,迅速打开胸腔,暴露心脏,经左心室快速灌注37℃生理盐水及4℃、4%的多聚甲醛磷酸盐缓冲液(PFA)各50ml,开颅取脑,后固定2小时用0.01M的PBS冲洗脑中的残留固定液,重复6次,每次h;再依次移入75%、80%、95%及100%的梯度酒精中脱水,二甲苯透明,浸蜡,包埋后进行连续石蜡冠

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