恶性胸腔积液患者T淋巴细胞亚群的变化意义

恶性胸腔积液患者T淋巴细胞亚群的变化意义【摘要】目的：探讨检测恶性胸腔积液(MPE)患者外周血(PB)和胸水(PE)中T淋巴细胞亚群(TLS)的意义及化疗前后TLS的变化.方法：对比良性胸腔积液(BPE)、MPE患者外周血和胸水及健康正常人外周血中TLS的水平；对比MPE患者外周血和胸水中TLS的水平；对比MPE患者化疗前、后外周血和胸水中TLS的水平.结果：TLS在胸腔积液患者外周血和胸水中分布相似；MPE患者外周血中CD8+T细胞水平高于正常人，CD4+T细胞相仿，CD4+/CD8+低于正常；与BPE患者相比，MPE患者外周血和胸水中CD4+T细胞、CD4+/CD8+较低，而CD8+T细胞较高；化疗后MPE患者外周血和胸水中CD8+T细胞水平明显降低，CD4+/CD8+明显升高.结论：检测外周血可以了解胸水中TLS水平；检测外周血和胸水中TLS水平有助于BPE和MPE的鉴别；化疗可部分改善MPE患者的细胞免疫抑制状态.

【关键词】胸腔积液；T淋巴细胞；CD4；CD8

0引言

肿瘤的发生、发展与细胞免疫功能降低密切相关,T淋巴细胞在其中起中心调控作用［1］.为比较良性胸腔积液和恶性胸腔积液(malignantpleuraleffusion,MPE)患者的T淋巴细胞亚群(TLS)分布水平及对原发病的诊断价值，和化疗对其影响，我们选择BPE，MPE患者的胸腔积液和外周血及正常健康人外周血进行TLS检测.

1对象和方法

对象诊断明确MPE32(男21，女11)例，平均年龄岁，鳞腺癌4例，腺癌28例；BPE(结核性)29(男17，女12)例，平均年龄岁；正常对照组选自体检合格、肝、肾、肺功能完全正常健康人27(男14，女13)例，平均年龄岁.患者于治疗前行胸腔穿刺术，收集胸腔积液，同时抽取静脉血10mL.MP患者经NP方案化疗2个周期后，收集胸腔积液，同时抽取静脉血10mL.采集体检正常健康人静脉血10mL.

方法胸腔积液用200μm尼龙网过滤组织于离心管；加入5mLRPMI；18℃，200g离心10min，去除上清液，混悬细胞沉淀于20mLRPMI，重复离心1次，重混悬细胞沉淀于5mLRPMI,加入PBS冲洗细胞，室温下，200g离心10min，去除上清液.重复此步骤.混悬细胞沉淀于适量RPMI备用.用台盼蓝计数活细胞百分率.将肝素化的新鲜去红细胞混悬液室温下加入等量PBS混匀，每10mL去红细胞混悬液/PBS混悬液中加入3mLFicollHypaque液.18℃，900g，离心30min.移除上层的血浆和血小板，缓慢的转移中层的单个核细胞层到锥形管，用3倍体积的HBSS洗涤细胞，18℃，490g，离心10min.去除上清液.用HBSS重新混匀细胞、洗涤并离心1次，去除上清液.混悬细胞于RPMI备用.用台盼蓝计数活细胞百分率.计数外周血和胸腔积液淋巴细胞，用RPMI调整细胞度至×109/L，将l06淋巴细胞悬于100μLHanks缓冲液(含1g/L牛血清蛋白、g/L叠氮钠)中，分别与20μL抗CD3APC(UCHT1)、抗CD4FITC(RPAT4)及抗CD8Cychrome(RPAT8)mAb或相应IgG对照蛋白(均购自美国BDPharmingen公司)于4℃孵化30min，Hanks缓冲液洗涤2次，5g/L多聚甲醛固定.24h内用FACStarPlus流式细胞仪检测CD3，CD4，CD8细胞，计算CD4/CD8比值.

统计学处理：用SPSS统计软件，数据以x±sx表示.组间比较用MannWhitneyU检验.组内前后比较用Wilcoxonsignedrank检验.

2结果

细胞亚群的差异MPE患者外周血(PB)CD3+，CD8+T细胞高于正常人对照组，CD4+T细胞相仿，CD4+/CD8+低于正常人对照组；BPE患者PBCD3+，CD4+，CD8+均高于正常人对照组，CD4+/CD8+相仿.BPE，MPE患者PBCD3+T细胞相仿，前者CD4+T细胞、CD4+/CD8+高于后者，而CD8+T细胞低于后者.BPE，MPE中CD3+T细胞相仿，前者CD4+T细胞、CD4+/CD8+高于后者，而CD8+T细胞低于后者.患者外周血和PE中TLS分布相似.

化疗后TLS的变化MPE患者化疗前、后PB和PE中CD3+，CD4+T细胞无明显变化，而CD8+T细胞明显降低，CD4+/CD8+明显升高.

表1胸腔积液患者/正常人T细胞亚群

表2恶性胸腔积液患者化疗后T细胞亚群变化变化

3讨论

MPE患者外周血CD3+，CD8+T细胞百分率明显高于健康人，CD4+细胞无明显差异，CD4+/CD8+比值明显低于健康人.提示MPECD4+/CD8+比值降低是由于CD8+细胞增高所导致，反映了MPE患者的细胞免疫功能处于抑制状态.而BPECD3+，CD4+，CD8+T细胞百分率均高于健康人，CD4+/CD8+比值无明显差异，反映了BPE患者的细胞免疫功能处于激活状态.在外周血和胸腔积液中，两者的CD3+T细胞百分率相似，但MPE患者的CD4+T细胞百分率、CD4+/CD8+比值低于BPE患者，CD8+T细胞百分率高于BPE患者.提示检测外周血或胸腔积液中TLS，有助于临床上对BPE，MPE患者的鉴别诊断.MPE患者的外周血和胸腔积液中CD3+，CD4+，CD8+TLS百分率和CD4+/CD8+比值均相似，说明胸腔积液和外周血的分布水平非常接近，T细胞释放到外周血和分配到胸膜腔的水平有关，通过外周血TLS的检测可反映出胸腔积液T淋巴细胞水平.化疗后CD8+T细胞明显降低，CD4+/CD8+明显升高，而CD3+，CD4+T细胞无明显变化.提示常规化疗后肿瘤细胞大量坏死或凋亡，肿瘤负荷减少而使免疫抑制因子减少，可部分改善患者的细胞免疫抑制状态，但细胞免疫功能紊乱并未得到完全纠正.

CD4+T细胞(Th)可分泌IL2，TIFN等细胞因子，并诱导或促进自然杀伤(NK)细胞等多种细胞毒性细胞的活性，共同发挥抗肿瘤作用［2］.CD8+T细胞(Ts)则抑制机体的免疫功能，与肿瘤的发生、发展和转移密切相关.恶性胸腔积液患者肿瘤细胞负荷增加，分泌免疫抑制因子增多，在抑制T淋巴细胞增殖、分化过程中造成Ts，Th细胞水平的增、减，以有利于肿瘤在宿主的转移［3］.因此，细胞比值是反映细胞免疫平衡状态的敏感性指标，本研究结果提示恶性胸腔积液患者存在明显的细胞免疫功能低下、紊乱；T淋巴细胞亚群的测定对恶性胸腔积液的诊断及疗效评估有一定价值；外周血中T淋巴细胞的检测可以反映胸腔积液中T淋巴细胞分布水平.并提示在有效化疗杀伤癌细胞的同时，应辅助以免疫调节治疗，从而提高患者的细胞免疫功能，更有利于延长患者的生存期并改善其生存质量［4-5］.

【参考文献】

［1］萧剑军，何洁冰，何庭宇，等.中晚期肺癌患者T淋巴细胞亚群和红细胞免疫功能检测及临床意义［J］.广东医学院学报，2002，20(1)：15-16.

［2］SigstadE,DongHP,NielsenS,etal.Quantitativeanalysisofintegrinexpressionineffusionsusingflowcytometricimmunophenotyping［J］.DiagnCytopathol,2005，33(5):325-331.

［3］ChenYQ,ShiHZ,QinXJ,etal.CD4+CD25+regulatoryTlymphocytesinmalignantpleuraleffusion［J］.AmJRespirCritCareMed,2005,172(11):1434-1439.

［4］DalbethN,LeeYC.Lymphocytesinpleuraldisease［J］.CurrO