放大染色胃镜下氩气刀治疗胃黏膜隆起糜烂的临床研究

放大染色胃镜下氩气刀治疗胃黏膜隆起糜烂的临床研究【摘要】目的建立反相高效液相色谱法测定奥扎格雷的含量。采用KromasilC18(×150mm,5μm)色谱柱以/L磷酸二氢钾-乙腈为流动相，流速为/min，以左羟丙哌嗪为内标物，检测波长为274nm。结果奥扎格雷的回归方程Y=+(r=)，其线性范围为～416μg/ml，平均回收率为%。结论本法可用于奥扎格雷的含量测定，操作简便，结果准确。

【关键词】反相高效液相色谱法；奥扎格雷；含量测定

Abstract:ObjectiveTodevelopaRP-HPLCprocedureindeterminationthequantityofozagrel.MethodsHPLCwascarriedoutusingaKromasilC18column(×150mm,5μm)with/LPotassiumdihydrogenphosphate()-acetonitrile(85∶15)asthemobilephase,theflowratewas/min,theinternalstandardwaslevodropropzine.TheUVwavelengthwas274nm.ResultsTheregressionequationwasY=+(r=).Thelinearrangedfromto416μg/ml.Themeanrecoverywas%andRSDwas%.ConclusionTheproposedmethodissimple,selectiveaccurateandprecise.

Keywords:reversed-phasehighperformancechromatography;ozagrel;quantitydetermination

奥扎格雷为高效、选择性血栓素合成酶抑制剂，通过抑制血栓烷A2的产生及促进前列环素的生成而改善两者间的平衡失调，具有抗血小板聚集和扩张血管作用。能抑制大脑血管痉挛，增加大脑血流量，改善大脑内微循环障碍和能量代谢异常，从而改善蛛网膜下腔出血术后患者的大脑局部缺血症状和脑血栓患者的运动失调。用于急性血栓性脑梗塞和脑梗塞所伴随的运动障碍。国内有采用高效液相色谱法(HPLC)外标法测定奥扎格雷及其制剂的含量［1,2］，及奥扎格雷中有关物质的报道［3］。笔者采用内标法对该药进行含量测定，现将其测定方法报道如下。

1材料与方法

材料SYSTEM,JASCOPU-980IntelligentHPLCPump,JASCOUV-975型紫外检测器；7725手动进样阀，JASCOLIBRORL-200SM十万分之一光学天平；TDX高速离心机；涡旋震荡仪，PHS-3CPH仪；超声震荡仪。奥扎格雷，内标左羟丙哌嗪。注射用奥扎格雷钠为市售。乙腈、甲醇为色谱纯，水为二次蒸馏水。

方法与结果

色谱条件色谱柱：KromasilC18(×150mm,5μm)；流动相为/L磷酸二氢钾-乙腈，冰醋酸调至pH；检测波长：274nm；柱温为室温；流速：/min；进样量：20μl。流动相经μm的微孔滤膜滤过后使用。

对照品溶液准确称取奥扎格雷对照品，置于10ml量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释成每1ml中含1mg的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液取本品，准确称定，置于10ml量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液。

内标溶液准确称取左羟丙哌嗪适量置于100ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得内标液440mg/L。

在上述色谱条件下，通过对奥扎格雷、溶剂及辅料进行HPLC分离检测，结果见图1～3。

线性关系考察精密称取奥扎格雷对照品适量，置于10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即为奥扎格雷标准贮备液416μg/ml，精密量取1，，，5，分别置于10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，与奥扎格雷标准贮备液416μg/ml各进样20μl，依法测定，记录峰面积。以峰面积积分值做为纵坐标，奥扎格雷浓度做为横坐标，得线性回归方程为：Y=+，r=。表明浓度在～416μg/ml范围内，峰面积与测定浓度成良好线性关系。

精度度试验取同一样品溶液20μl，重复进样5次，结果样品含量的RSD为%。

重复性试验取同一批号样品6份，精密称定，按照含量测定项下的方法，测定奥扎格雷的含量，RSD为%，表明本法重复性较好。

样品溶液稳定性试验取样品溶液于室温避光放置0，2，4，12，24，48h分别进行测定，峰面积比基本不变，RSD为%。结果表明，样品溶液48h内可保持稳定。

图1奥扎格雷对照品及内标的HPLC色谱图

1.奥扎格雷2.左羟丙哌嗪

图2奥扎格雷及内标的HPLC色谱图

1.奥扎格雷2.左羟丙哌嗪

图3空白样品的HPLC色谱图

回收率试验采用加样回收的，取已测定含量的同批样品适量共9份，3份为一组，分别加入奥扎格雷对照品4，5，6mg，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀后按测定项下的方法分别测定含量，减去样品本底，回收率，测得3种浓度奥扎格雷的平均回收率分别为%，%，%，RSD分别为%，%，%。试验结果见表1。

表1回收率试验结果

样品含量测定取3批奥扎格雷，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇稀至刻度，摇匀。经μm滤膜滤过，精密量取1ml，加内标物100μl，置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，取20μl进样，内标法以峰面积计算样品中奥扎格雷的含量，见表2。

表2奥扎格雷含量测定结果

2讨论

乙腈含量对色谱行为的分别配制乙腈含量为20%，15%，10%的流动相，考察乙腈含量对色谱峰的影响。结果表明，乙腈含量为20%时，主峰与杂质峰的出峰时间相近，杂质峰对主峰影响较大。乙腈含量为10%时，检测灵敏度降低，峰高明显降低。采用乙腈含量为15%的流动相较为适宜。

用甲醇代替乙腈对色谱行为的影响鉴于乙腈成本高、毒性大，故在上述的基础上，将流动相体系的组成成分进行改变，试验以甲醇代替乙腈的分离效果。结果显示，醇羟基对奥扎格雷有影响，造成峰拖尾严重。

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［1］姚秀琼，程华.HPLC测定奥扎格雷及其制剂的含量［J］.广东药学，2005,15(4):1