第四章 放射自显影技术

二、制作放射自显影的基本过程生物材料的标记→自显影样品的制备→自显影的制作→曝光→显影→定影→观察与分析（定位及放射性测量）。三、放射自显影的基本类型依样品和观察部位的大小，分宏观和微观自显影；后者又有光学自显影（IMARG）和电镜自显影（EMARG）。1、宏观自显影

将宏观的标记样品与固体照相乳胶接触曝光，显影，定影后，形成黑白图象，用肉眼观察或光密度计测量黑度来分析放射性物质在器官组织中的分布情况。2、光学显微自显影

通常在常规的组织学切片或涂片上涂上一层液体乳胶膜，经曝光，显影，定影后，在显微镜下观察银颗粒的分布，来了解放射性标记物在细胞间或细胞显微结构中的分布情况。观察的范围很小，要求分辨力高，在材料标记，切片制作，乳胶膜的制作及观察分析上要求更高的技术。3、电镜自显影

在超薄切片上涂上单层乳胶膜，经曝光、显影、定影后，在电子显微镜下观察银颗粒的分布，来了解放射性物质在细胞超微结构中的分布情况。甚至可观察到生物大分子的标记部位。观察的结构部位很小，要求分辨力高，在材料标记，切片制作，乳胶膜的制作及观察分析上要求更高的技术。

本文档共44页；当前第1页；编辑于星期三\14点54分本文档共44页；当前第2页；编辑于星期三\14点54分放射自显影技术本文档共44页；当前第3页；编辑于星期三\14点54分Northern杂交rat本文档共44页；当前第4页；编辑于星期三\14点54分brainRadishleaf本文档共44页；当前第5页；编辑于星期三\14点54分本文档共44页；当前第6页；编辑于星期三\14点54分四、放射自显影的特点ARG既是一种辐射探测方法，又是一项完整的同位素示踪技术。它与一般用制备的放射性样品，通过电离或闪烁探测器检测放射性的示踪技术相比，有下列主要优点：1、能够准确定位

依自显影的类型不同能检测放射性物质在器官、组织、亚细胞结构、甚至在生物大分子中的分布。至于用自显影获得的细胞，亚细胞和分子水平上放射性物质的分布是用一般的生物化学分离法难以获得或不能获得的。2、具有很高的灵敏性

因为照相乳胶对射线的反应具有累积作用，所以通过延长曝光时间可以检测到样品中微弱放射性。3、资料形象，易于保存

获得的自显影图像能清晰反映放射性物质在器官、组织、和各结构部位的分布情况，形象、客观并能长期保存。本文档共44页；当前第7页；编辑于星期三\14点54分虽然放射自显影技术有着其他方法无法比拟的优点，但同样存在一些不足之处：1、自显影的制备时间过长

手续较复杂，尤其显微自显影要求较薄的技术；2、不能直接定量一般情况下只能相对定量。因此，除了在细胞学、分子生物学和遗传学研究中的特殊目的外，在一般的示踪实验中，放射自显影作为放射性检测的一种手段，补充提供放射性物质的吸收，运转和分布的资料。

本文档共44页；当前第8页；编辑于星期三\14点54分第二节宏观放射自显影（Macro-autoradiography）的制作以宏观材料制作的自显影，肉眼或光密度计观察组织、器官中放射性物质的分布。一、样品的制备1、植物材料

整株或部分器官（枝条、叶片、花蕾等），压制成标本要求干而不脆，平整。若植株过大可折转或剪断。若观察放射性物质在茎杆中的分布，可制成茎杆的纵横切片。2、动物材料

整体切片：纵剖面或横剖面，或组织的宏观切片。3、层析谱

纸层或薄层板展开后，充分干燥，可喷射聚氯乙烯或硝化纤维（polyvinylchlorideornituocellalose），以防止自显影时薄层板上吸附剂粉的移动。4、凝胶电泳块

为防止水分对乳胶的影响可采取：（1）干燥；（2）包蔽；（3）冰冻：在低温条件下曝光。5、其他如土壤剖面，可将土壤切成平整的剖面，用薄的聚氯乙烯膜包蔽。

本文档共44页；当前第9页；编辑于星期三\14点54分二、自显影的制作1、感光材料通常为乳胶，其基本组成为溴化银晶体、支持物、明胶（溴化银晶体的支持物）。各种感光材料主要由于银盐的浓度，结晶颗粒的大小和乳胶层的厚度不同而具有不同的敏感度和分辨能力，适于不同目的的自显影。颗粒越大、越多，即越容易形成潜影。而分辨力与颗粒的大小和乳胶层的厚度相关。照相乳胶的类型有X光片、幻灯片或电影正片、核乳胶、乳胶干板、加强膜（荧光片增强感光）、照相底片。2、自显影的制作一般采用接触曝光，将样本平整的一面与X光片或其它固体照相材料紧密接触，样本的另一面填上泡沫塑料等松软材料。X光片上覆盖一层薄纸，压紧，使其和样本紧密接触。市售的X光曝光盒底层有泡沫塑料，放一张保护纸后，放样本，X光片在样本上面，再覆盖保护纸将盖子扣紧，就能完全曝光。为防止薄层板上分离的纯化学物质或土壤中的化学物质对感光材料的作用，可再薄层板或剖面上加保护膜，这对32P样品没有影响，对14C、35S等软β核素，可能将一部分射线挡除，而对3H则完全把射线隔断。

本文档共44页；当前第10页；编辑于星期三\14点54分三、照相过程1、曝光（1）潜影的形成过程射线粒子进入晶体，能从溴离子中打出电子，形成电子与银离子的离子对，只要能量足够，这个电子能离开轨道，进入导电带，在晶体内移动，并移向缺陷处，形成阴电层，银离子向阴电层移动，获得电子，形成银原子，银原子聚集形成潜影。同时，失去电子的溴离子成为溴原子，并从晶体表面释放出，跑到明胶中。（2）曝光条件紧密曝光，固定，安全曝光，无外源放射性，安全位置，别人不会拿动或作上标记，湿度不能太高，低温下能增加敏感度。（3）曝光时间曝光时间不足，来不及形成潜影，不能得到显影形象。因为在一般显影条件下，要使银粒显影，需要有一定的银粒数及每粒含有一定数量的银原子数。曝光时间过长，本底增加，降低了分辨力，特别是β射线，由于散射使形象模糊。在曝光时间过长情况下，有时感光度反而降低，因为银原子与溴原子重新结合，称为潜影衰退（imagefadding）。过量的水分，大气中的O2、H2O2过大或不均匀的压力，过高的温度都能增加潜影衰退。因此在曝光之前必须使乳胶完全干燥，如需长时间曝光，可除去空气，在N2或氩气中暴光，并且在低温下进行。本文档共44页；当前第11页；编辑于星期三\14点54分本文档共44页；当前第12页；编辑于星期三\14点54分曝光时间的长短和射线的种类(能量、半衰期)、活度和感光材料的类型及自显影的种类有关，同时也要考虑到放射性分布的无均匀性。对X-光片，105～106粒/cm2能产生可显影的潜影，107～1010粒子/cm2产生好的潜影。因此可以此数除以单位面积样品的放射性活度（dpm/cm2）来粗略的估计曝光时间（t=(dpm/cm2)/(107～1010粒子/cm2)，再结合实验曝光确定适宜的曝光时间，即在正式制片的同时，压制相同样品的预备片，在不同时间取出显影，直至出现清晰的图象。2、显影

显影过程是在显影剂的作用下，使感光的银颗粒还原，使潜影显现出来。是一个自催化的过程，在还原已开始的晶粒中比还原还没有作用的晶粒还原的快，因此在含有潜影银的晶粒中首先开始作用，溴化银转化成银原子，聚积在潜影形成的位置上，溴离子从晶粒中扩散出去。在没有潜影的银粒中也能显影，但要慢的多，显影要掌握在正好使感光晶粒还原，而未感光的晶粒还未还原，结果使形象显示出来。显影液一般用D19-6或市售的显影粉配置。温度在19±1℃，时间一般在2～3min。本文档共44页；当前第13页；编辑于星期三\14点54分3、定影定影剂的主要成分是Na2S2O3（硫代硫酸钠），目的是去掉未显影的晶体颗粒，使图像得以长久保存。其反应式如下：Na2S2O3+AgBr→NaAgS2O3+NaBr；NaAgS2O3+Na2S2O3→Na3Ag(S2O3)2。定影的时间一般为15min或更长，温度控制也没有显影过程那么严格。定影完成后，充分水洗，除去定影剂和硫化物，然后凉干。本文档共44页；当前第14页；编辑于星期三\14点54分四、宏观自显影（Macor-autoradiography）的观察1、肉眼观察观察发黑的部位和程度，如果放射性只分布在个别部位，或放射性比较弱，发黑不明显，必须有实物照片比较观察。用X－看片灯可以观察的比较清楚。2、光密度测量肉眼观察只能获得不同器官或组织放射性多少的相对印象，不能给出具体的数据。光密度测量是用光密度计测量透过部位的光的强弱，对底片黑化程度能给出定量数据。因此能较客观评价各部位、器官、组织的放射性的相对分布。这种自显影定量的关键在于制备和应用放射性阶标。即用逐级降低的已知放射性活度的阶梯性标准（简称为放射性阶标），与待测样本一起曝光和加工，通过与阶标的黑度相比，来确定标本的放射性（参考王成方等“大豆光合产物运转分配的定量自显影研究”原子核农业应用，1985，4：26-29）。由于标本各处的组织结构的差异，自吸收及对乳胶接触的几何条件不同，因而必须对用阶标法测出的标本的放射性活度进行修正后，才是标本的实际放射性活度。即在自显影后，将标本的代表性部位取下，称量，并液体闪烁计数仪测量放射性，与自显影片的值相比较，求出R值（R=标本液闪测得放射性活度/自显影测得的放射性活度），再进行校正。（参见刘鼎新，放射自显影技术的一些新进展，1980，1，核医学进展；RogersA.W.，PracticalAutoradiograph，EnglandReview，1979，（20））。本文档共44页；当前第15页；编辑于星期三\14点54分第三节光学显微自显影（IMARG）的制作IMARG是在光学显微镜的水平上观察放射性物质的分布，所用的样品通常是粘在载玻片上的切片。根据所研究物的性质和观察的结构部位的大小，制作不同厚度的包埋切片或细胞涂片。然后在切片上覆盖乳胶膜。经暴光，显影，定影后，连同切片一起观察乳胶中的银粒分布。一、固定和包埋材料及切片的制备1、石蜡包埋切片取新鲜的组织块（经放射性标记，0.5cm×0.5cm×0.5cm）→固定（保持新鲜状态的结构，一般采用卡诺氏Ⅰ（96%乙醇：冰醋酸=3：1V/V）或卡诺氏Ⅱ（96%乙醇：氯仿：冰醋酸＝6：3：1V/V/V）固定液固定24小时，若要保存核蛋白，可采用甲醛：70%乙醇：冰醋酸=5：90：5（V/V/V）固定液）→脱水（用逐级酒精脱水）→浸透（1/2二甲苯+1/2酒精→二甲苯）→透明（1/2二甲苯+1/2石蜡）→包埋（将融化石蜡中的组织块，量于用纸折成或特殊的包埋盒内的适宜位置，灌入融化石蜡，投入冰水中冷却）→修块（将样本周围所涂石蜡切掉，修成适宜切片的一定形状的蜡块）→切片→展片→脱蜡→复水→干燥。若要在高倍显微镜下观察，制作0.5～1μm的半薄切片，则采用树脂包埋。其处理过程与上述基本相同，但要求更精细的操作，要用性能良好的切片机和玻璃刀。本文档共44页；当前第16页；编辑于星期三\14点54分2、冰冻切片冰冻切片用以研究可溶性的小分子放射性成分的分布，必须将新鲜组织块量于液氮冷却的异戊烷或丙烷中或干冰丙酮中快速冷冻，固定活体结构，防止冰晶形成，然后以不同方法进一步处理。（1）组织块处理①冻干－渗蜡首先深冻组织块，低温真空干燥，通过升华使组织脱水；然后真空渗蜡：冻干组织块置于试管固体石蜡上，抽真空后，在60℃水浴渗蜡。②冷冻取代用有机溶剂取代水分子而使组织脱水。吉林农科院：在广口热水瓶中放入干冰，在有胶塞的试管中充入经无水硫酸钠反复脱水和蒸馏后的纯丙酮，插入干冰中预冷。速冻的组织块于低温干燥条件下迅速转入试管中，密封。并置于冰箱中，每天加干冰，一周后，拉试管胶塞于冰面中，自然升温至室温，取代完毕。（2）恒冷切片箱中切片冰块装于恒冷箱切片机上，在低温下切片，切片浮于益玻片上，再将盖玻片于黑暗中沾于乳胶干板上，在低温下曝光，即为融表法。

本文档共44页；当前第17页；编辑于星期三\14点54分二、显影的制作1、固体乳胶法在低温显微镜下观察比较厚的组织切片的自显影，可用电影正片、幻灯片、乳胶干板或涂有液体乳胶膜的玻片，可用下列方法制备自显影：（1）接触法

（2）湿贴法

（3）湿贴-接触法

2、液体乳胶法将核乳胶于40-50℃水浴中融化，稀释，轻轻搅拌均匀，用涂布法，滴加法，常用浸蘸法制备乳胶膜覆盖于切片上，待乳胶冷却、凝固、干燥后，置于暗盒中，加入干燥剂，黑纸包裹。为防止胀力显影，干燥过程不要太快。核乳胶是对射线敏感，对普通光线相对不敏感，专为自显影而制造的照相乳胶。呈淡黄色，在常温呈牛乳状，平时必须保存于4～8℃冰箱中。3、揭膜法揭膜乳胶如AR-10是10nm的明胶层上加一层5μm的乳胶层，使用时将其从玻片上连同明胶一起揭下来，漂浮于25℃蒸馏水中，将玻片插入水中，切片朝上，对准乳胶膜，将其置于标本上。揭膜法的优点是厚度一致，重复性好。但由于明胶层的覆盖，增加染色的困难。

本文档共44页；当前第18页；编辑于星期三\14点54分三、照相过程1、曝光曝光时间一般为两周左右，正确的曝光时间凭经验或实验曝光确定。即制备一些同样的实验切片，间隔一定时间抽出2～3片显影、定影，直至清晰的自显影图象出现，再把全部材料显影。曝光条件：除宏观自显影的条件外，要求乳胶充分干燥，低温下曝光（4℃左右）。要注意是否有潜影衰退，防止化学显影及张力显影。2、显影显影时间以乳胶种类，显影剂和观察方法等确定。一般D+19b，在19±1℃条件先显影，显影时间掌握在由样品放射性产生的粒子和本底粒子数最佳比例，核乳胶一般为3～5min。测试者，必须制备好一些片子，摸索适宜的显影时间。如果显影时间太短，难以控制，可将显影液稀释，延长显影时间，减少操作误差。反之，可增加显影剂浓度，缩短显影时间。同时，在显影时，要注意显影剂的搅动。3、定影

显影后经蒸馏水或1%醋酸液，再放入F-5定影液中，15min后，取出用自来水冲洗，再用蒸馏水冲洗两次，染色后，封片。本文档共44页；当前第19页；编辑于星期三\14点54分四、光学显微自显影的观察与分析1、粒子计数首先要识别银粒，区别于染料及尘埃等沾染物。显影银粒在光学显微镜水平上，在投射光视野下观察呈黑色圆子。在落射光暗视野下反射为亮点。一般在投射光明视野中就能识别。在一定银粒密度限度内，银粒数和乳胶所感受的放射性呈正比。所以在显微镜测数视野中，对一定面积或一定细胞器的显影银粒进行计数，按银粒的多少，确定或比较各部位所感受的放射性。在比较不同结构部位的放射性时，如属于同一种结构类型，或标记后不同时间蛋白质或核酸合成情况，此情况下，只要严格控制切片和乳胶的厚度、源大小、形状、密度、与乳胶的几何形状是相同的，这样，粒子数与源的放射性呈很好的正比关系。但如果银粒密度超过一定范围，非但不易计数，而且存在着颗粒感光后被重复击中的可能，使得正比关系变差。对于不同类型的源，形状、大小、密度和几何位置不同，比较就很困难，对相邻近不同源的粒子进行成对计数，然后进行t－实验，就能减少这种误差。2、径迹计数电离粒子通过乳胶时，在它的途径上会产生多个银粒子，以特定的方式排列，形成径迹。因一个径迹代表一个离子粒子，故根据径变数可以测量来自样品的粒子数。3、反射光光度测定根据银粒在暗视野中反射光的特性，用显微镜光度计测定所反射的光，可迅速而准确的测定乳胶的辐射效应。需要一个显微光度计，一个垂直落射的照相器及一个稳定的电源。4、乳胶光密度测量核乳胶由于源的放射性作用产生银粒，而降低了透光性，其光密度和辐射性成正比。所以可用显微光密度计测量乳胶层的光密度，来测量乳胶衰变的放射性剂量。

本文档共44页；当前第20页；编辑于星期三\14点54分第四节电镜显微自显影（EMARG）的制作以超薄切片为材料，涂上单层乳胶膜，在电镜下观察的放射性物质在超微结构中的分布或生物大分子的标记部位，所以是亚显微或分子水平上的放射自显影。在切片的制作，单层乳胶膜的制作及观察与分析方面，要求更高的技术。一、超薄切片的制作不同显微切片的厚度：光学显微自显影用厚切片：3-20µm；石蜡切片：3-5µm；冰冻切片：10µm。高倍显微镜：用树脂切片：1-0.5µm；电镜观察的超薄切片在0.1µm以下，一般为0.06µm。超薄切片的制作程序与石蜡切片的基本相同，不同的是制作超薄切片时用戊二醇和锇酸进行双固定，以环氧树脂或甲基丙烯酸脂为包埋剂，用超薄切片机或玻璃刀切成0.1µm以下的超薄切片，一般为0.06µm的厚度。过程如下：采样（1mm3）→固定→脱水→环氧丙烷处理两次→渗透（1/2环氧丙烷+1/2包埋剂）→包埋→超薄切片→用玻璃刀切片（约0.06µm）→切片漂于水滴上→沾于涂有化棉胶膜的铜网上→无尘空气中干燥→喷碳膜（50—60Å）（看前染，去喷碳膜之前用重金属盐进行电子染色）。本文档共44页；当前第21页；编辑于星期三\14点54分二、自显影的制作电镜自显影的特点是切片很薄，样品量少，源和要求观察的分辨力高。因此对感光膜有特殊要求：乳胶层必须是单分子层，也就是AgBr颗粒不重叠，其厚度即为AgBr颗粒的直径（0.15m以下）；AgBr颗粒要细而均匀，密度要大，基本上铺满单分子层；膜坚固，能耐受电子轰击。单层乳胶膜的制作方法：1、金属环套法（wireloopmethod）乳胶45℃融化→无离子水稀释→45℃保温15min→冰浴3min→室温静止10～15min，使成半凝胶状态→将100p往乳胶中一浸取出，在红灯下检查乳胶的凝胶状态，并确定为单分子层→覆盖于铜网切片上。单分子层：环中的乳胶膜若较快达到稳定状态，即膜厚薄均匀，很少流动，则表明乳胶已达理想状态，就可使用。2、浸液法将乳胶融化，用水稀释，调匀→在蒸馏水表面制火棉胶膜或带带福尔马林膜，载有切片的铜网板上，用玻片往上一捞，凉干，在贴有铜网的玻片往乳胶液一浸，提起，沥去多余乳胶，凉干。3、其他方法平板法或涂布法等。本文档共44页；当前第22页；编辑于星期三\14点54分三、照相过程1、曝光将铜网量于塑料暗盒，充分干燥后，放入干燥剂，黑纸包封，已4℃水箱中曝光。时间一般为同样IMARG的10倍左右。为了准确掌握曝光时间，每隔1～2周，取1～2个铜网检查。2、显影D19-6；18-20℃；显影2-4min；1%醋酸停显。3、定影用25～30%硫代硫酸钠定影→无离子水漂洗→无尘空气中凉干。4、后处理固明胶的存在，减少了EMARG的反差，需要除去明胶，再用醋酸钠和柠檬酸铅进行染色，染色时间可比通常的要短。采取后染色是防止照相过程对染色剂的影响，及染色剂对乳胶的影响。本文档共44页；当前第23页；编辑于星期三\14点54分第五节与放射自显影质量有关的几个因素一、各种核射线在乳胶中的径迹各种射线α、β、γ、质子、中子，在厚层乳胶中所留下的径迹是不同的（表4-1）。α粒子具有较大的质量而运动速度小，所以对乳胶表现出很强的电离作用。它4径绩直，密度均匀，所得自显影像最为清晰，但有生物学意义得元素都不是α粒子得辐射体。β粒子得径迹复杂，因为它能量小，电离密度比α粒子低。在路径上易受原子作用引起倾斜，所以在乳胶中容易弯曲的径迹。β粒子在乳胶中射程因能量不同（如32P>35S>14C>3H）所以其径迹长度也不相同。农业生物学中应用的放射性核素，大多数是β辐射体。γ射线质量小，能量高，散射强，穿透力强，而对乳胶作用极小，在乳胶不留径迹。所以，纯γ射线的核素不能用于放射性自显影，但是值得注意的是在以电子俘获或内转换电子衰变方式的核素中能放出俄歇电子，这些俄歇电子能量较低，能够得到清晰的径迹。本文档共44页；当前第24页；编辑于星期三\14点54分表4-1放射性自显影中使用的几种放射性核素

核素半衰期β能量（mer）γ能量乳胶中射程（μ）平均最大平均最大3H12.3（a）0.0050.018

1614C5568（a）0.050.155

1512035S87.1（d）0.0550.167

2014032P14.3（d）0.6951.701

1400400045Ca164（d）0.1000.255

50220131I8.05（d）0.2050.608

160100058Fe47.0（d）0.1200.461.106050086Rb18.7（d）

1.771.08

22Na2.62（d）

0.541.28

42K12.4（d）

3.54

0.981.52

本文档共44页；当前第25页；编辑于星期三\14点54分二、放射自显影的本底1、定义在黑暗条件下没有放射性样本的乳胶或样本以外的乳胶部位或没有放射性的样本部位，乳胶显影以后也产生银粒而使乳胶发黑，这种与样本的放射性无关的底片发黑和显影颗粒成为放射自显影的本底。2、本底产生原因（1）显影过度黑暗即显影时间过长，会使未感光的晶粒还原，超过适宜的时间，本底增加很快。超过适宜的温度也增加本底。（2）光暗室红灯过亮，曝露时间过长或曝光期间，黑暗条件不严密或漏光，使乳胶感光产生本底。（3）外源放射性

自然界的宇宙射线和本底放射性产生的本底是不可避免的。但要除去任何人为的外源放射性对本底的影响。（4）乳胶本身乳胶存放时间太长，超过有效期，或存放不当使乳胶感光或污染均会使乳胶的本底增加。本文档共44页；当前第26页；编辑于星期三\14点54分（5）机械压力或张力核乳胶对机械压力很敏感，操作时必须避免划痕、指印或挤压，使底片受压力均匀。微观自显影因为样品中不同结构处乳胶层厚薄不均匀，干燥过程中产生胀力也能产生显影银颗粒，这种显影颗粒往往呈结构形式分布而被误认为是由放射性而产生的，称为胀力假象（pressureartifacts）。为防止胀力显影，切片的质量要好，乳胶膜厚薄尽量均匀，干燥不要过快。（6）化学物质乳胶对样品中存在的化学物质也很敏感，特别是还原剂，因为它们往往呈结构形式分布，所以也能产生假象，称为化学假象（chemogrephy）。还原剂产生的是正的化学显影（positivechemography），如存在氧化剂，能引起潜影衰退，称为负的化学显影（negativechmography）。本文档共44页；当前第27页；编辑于星期三\14点54分3、本底的检查和防止

除了宇宙射线，本底放射性，乳胶和样本本身的本底外，均可以通过小心操作，把本底控制在最低程度。至于化学显影可以设置对照样本检查并采取防止措施。

本文档共44页；当前第28页；编辑于星期三\14点54分三、放射自显影的分辨力自显影的分辨力不同于光学上的分辨力，不是指两个结构点能被区分的最小距离，而是表示自显影像与样品的标记结构符合的程度。在宏观自显影中是以两个特定大小的源能级区分的最小距离来衡量。在微观自显影中以源周围银粒的分布来衡量。即：概念上不是指自显影所能分辨的两个放射源间的最小距离或最小放射源的大小，而是从自显影像上银粒的分布来分析放射源所在的位置，即是自显影与标本中标记结构相互关系的一种度量。对于一个点状放射源来说，银粒在源周围呈辐射状分布，源上银粒密度最大，随着离源距离的增加，银粒密度迅速减少。对于一个线状放射源，银粒在源两边呈对称分布。若通过源划一条线，以这条线为横坐标，以离源的距离对银粒密度或银粒数作图，得到的图6-2和图6-3即为银粒密度曲线和银粒分布曲线。

本文档共44页；当前第29页；编辑于星期三\14点54分本文档共44页；当前第30页；编辑于星期三\14点54分由于很难测定由放射性产生的银粒分布的端点，故必须采用其它参数来定义分辨力。L.achmann和M.M.Salpeter（1965）将包含源产生的总银粒数的一半的以点源为中心的源的半径（半半径，HR）定义为分辨力。对于线源，则将包含源产生的银颗粒的一半时任何一边离源的距离，称为半距离（HD）。HD随样品厚度、乳胶层的厚度、晶体颗粒的大小等变化，但若以HD为单位，对源周围的银粒分布做曲线，则在所有情况下都具有相同形状的曲线，因而产生了万能曲线。它反映可在所有条件下银粒的分布，也适用于任何核素。利用万能曲线可以通过计算机来预测各种形状的源周围的粒子分布（图6-4）。就单像来说，分辨力所给的定义是以银粒密度最大的点与银粒密度减少一半的点之间距离（称为半距离HD）来表示。HD数值越小表示分辨力越高，所得到影响越清晰。反之分辨力就低，影像模糊，难以区分(表6－2)。

本文档共44页；当前第31页；编辑于星期三\14点54分本文档共44页；当前第32页；编辑于星期三\14点54分表4-2乳胶厚度、样品厚度、样品－乳胶距离与分辨力

乳胶厚度样品厚度样品－乳胶距离分辨力2202.1220.53.45505.1550.56.420509.32050.520.6本文档共44页；当前第33页；编辑于星期三\14点54分影响分辨力的因素主要有以下几个方面：1、乳胶中溴化银粒的大小

不同类型乳胶中溴化银颗粒大小不同，一般说颗粒大敏感度高，而分辨力低，颗粒小则敏感度低而分辨力高。专用的核乳胶，颗粒小、敏感度高，故多用于微观自显影，电镜自显影则要求更细的银粒。在实际应用中应尽可能采用细颗粒乳胶。2、乳胶厚度

乳胶层薄则分辨力高，反之乳胶层厚分辨力底。在电镜自显影时基本要求用单层银粒乳胶膜。但要注意到在被采用乳胶薄膜时，被射线作用的银粒会减少，故需延长曝光时间，或提高试验样品中示踪剂的数量。3、样本厚度

样本厚者，组织层次重叠，不同层次放出射线与乳胶中银粒作用后，使作用银粒子重叠，而降低分辨力。4、样本与乳胶层的距离样本与乳胶层距离越大，分辨力越差，影像越不清楚。反之越近越好。最为理想的是样本与乳胶密接在一起。本文档共44页；当前第34页；编辑于星期三\14点54分5、示踪核素的能量能量高的核素放射出的核射线的射程较长，会使放射源位置以外的银粒子也受作用，以至使分辨力降低。在条件完全相同情况下，3H、14C、32P的分辨力依次降低，因此在试验目的允许范围内尽量采用能量较低的核素。6、曝光时间曝光时间过度延长，分辨力则会下降。因为在正常曝光时间内，主要是示踪核素中低。中能量射线作用于乳胶，而在曝光时间延长时，乳胶受到高能核射线作用时间随之增加，因而使分辨力下降。所以要根据实验目的，估计样本中示踪剂分布差异的状况，选择适宜的曝光时间。7、显影显影时间过长，本地增加，甚至出现雾翳。如显影液中含碱性试剂较多，会使颗粒膨胀、集结。这些都会使分辨力降低。所以要注意显影剂选择和确定适当的显影时间。8、翳(yi)雾和本底翳雾和本底会使影像与背景模糊不清，降低分辨力。本文档共44页；当前第35页；编辑于星期三\14点54分四、自显影的效率自显影效率是反映曝光期间离开源的β粒子数与乳胶上产生的银粒数之间的关系，也即曝光时间乳胶对应于样品的放射性衰变数的反应。定义为样