分瓶细胞株细胞细胞系动物细胞培养过程

动物(dòngwù)细胞培养动物(dòngwù)细胞融合单克隆抗体(kàngtǐ)制备细胞核移植动物细胞工程技术动物细胞工程的基础第一页，共四十二页。精选ppt动物细胞的培养(péiyǎng)和核移植技术一、动物(dòngwù)细胞培养第二页，共四十二页。精选ppt（一）、概念(gàiniàn)是指从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些(zhèxiē)细胞生长和增殖。（二）、原理(yuánlǐ)细胞分裂增殖第三页，共四十二页。精选ppt（三）过程(guòchéng)

幼龄动物取动物器官和组织剪碎组织胰蛋白酶处理单个细胞细胞培养第四页，共四十二页。精选ppt动物胚胎或幼龄(yòulínɡ)动物的组织、器官胰蛋白酶(yídànbáiméi)剪碎单个细胞(xìbāo)加培养液制成细胞悬浮液接触抑制部分细胞“癌变”，无限传代10代细胞原代培养传代培养细胞贴壁剥离、分瓶细胞株细胞细胞系2.动物细胞培养过程：50代细胞（大多死少不死）（大多死少不死）第五页，共四十二页。精选ppt强调一：细胞(xìbāo)贴壁过程■细胞贴壁：在培养(péiyǎng)瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。■培养瓶或培养皿壁要求：表面(biǎomiàn)光滑、无毒、易于帖附。第六页，共四十二页。精选ppt■当贴壁细胞分裂生长到表面(biǎomiàn)相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。强调(qiángdiào)二：接触抑制第七页，共四十二页。精选ppt有关(yǒuguān)概念:原代培养：从机体取出后立即培养的细胞(xìbāo)为原代细胞(xìbāo)。传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。第八页，共四十二页。精选ppt有关(yǒuguān)概念

细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。

细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分(bùfen)细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。

细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。第九页，共四十二页。精选ppt动物胚胎或幼龄动物的组织(zǔzhī)、器官胰蛋白酶(yídànbáiméi)剪碎单个细胞(xìbāo)加培养液制成细胞悬浮液接触抑制部分细胞“癌变”，无限传代10代细胞原代培养传代培养细胞贴壁剥离、分瓶细胞株细胞细胞系2.动物细胞培养过程：50代细胞（大多死少不死）（大多死少不死）第十页，共四十二页。精选ppt思考题：1、为什么选用动物胚胎或幼龄(yòulínɡ)个体的器官或组织做动物细胞培养材料？2、为什么培养(péiyǎng)前要将组织细胞分散成单个细胞？因为这些组织或器官，分裂能力(nénglì)旺盛，易于培养。成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖，且细胞不能与培养液充分接触，不利于培养。第十一页，共四十二页。精选ppt3、胰蛋白酶的作用是什么(shénme)呢？由此可说明细胞间的物质是什么(shénme)成份？催化蛋白质水解。细胞间的物质(wùzhì)主要是蛋白质(胶原蛋白等)。4、细胞膜的主要成份(chéngfèn)是什么？蛋白质和磷脂5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？能第十二页，共四十二页。精选ppt6、既然胰蛋白酶(yídànbáiméi)能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？7、能够用胃蛋白酶代替(dàitì)胰蛋白酶吗？为什么？注意(zhùyì)时间的控制

不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近第十三页，共四十二页。精选ppt3.总结：动物(dòngwù)细胞培养过程动物胚胎或幼龄动物的组织(zǔzhī)、器官细胞(xìbāo)悬浮液剪碎用胰蛋白酶处理10代细胞转入培养瓶40-50代细胞传代培养无限传代单个细胞加培养液稀释传代10代以内，遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。传代10-50代左右，增长缓慢以至于完全停止，部分细胞核型可能发生变化（遗传物质可能改变）为什么用胰蛋白酶处理？原代培养特点：细胞贴壁、接触抑制继续传代培养少部分细胞获得不死性，细胞突变，遗传物质已经改变，等同于癌细胞。原代培养第十四页，共四十二页。精选ppt归纳(guīnà)过程取

的组织(zǔzhī)、器官细胞(xìbāo)悬浮液

酶

细胞贴壁、接触抑制

培养10代细胞

培养细胞株无限传代细胞系单个细胞加

液遗传物质

改变遗传物质

改变动物胚胎或幼龄动物胰蛋白培养原代传代未已50代细胞第十五页，共四十二页。精选ppt讨论(tǎolùn)对于多细胞生物来说，细胞都生活在内环境(huánjìng)中，根据你所学的知识，认为体外培养细胞应该需要什么样的条件？第十六页，共四十二页。精选ppt4.动物(dòngwù)细胞培养的条件:1）无菌无毒的环境(huánjìng)：

适宜的温度：人和哺乳动物(bǔrǔdòngwù)细胞最适温度为36.5±0.5℃。适宜的酸碱度：PH：液体合成培养基：（糖、氨基酸）、促生长因子、（无机盐、微量元素）等；通常还需加入血浆、血清等天然成分。4）气体环境：2）营养：3）温度和pH：“95％空气+5％CO2”的混合气体培养箱。氧气是细胞代谢必须的；CO2维持培养液的PH。对培养液和所有培养用具无菌处理；培养液中添加抗生素防止培养过程中污染；定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。第十七页，共四十二页。精选ppt5.动物细胞培养技术(jìshù)的应用病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体、基因工程技术、检测有毒物质、医学(yīxué)应用等。第十八页，共四十二页。精选ppt植物组织培养和动物(dòngwù)细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养原理细胞的

细胞培养基特有成分、植物激素葡萄糖、培养结果植物体培养目的快速繁殖、培育无病毒植株获得全能性增殖(zēngzhí)蔗糖(zhètáng)动物血清细胞株、细胞系细胞第十九页，共四十二页。精选ppt2、在动物细胞(xìbāo)培养过程中遗传物质发生改变的细胞(xìbāo)是（）

A．获得不死性的细胞B．10代以内细胞

C．原代细胞D．传代细胞1、动物细胞工程技术的基础是（）

A.动物(dòngwù)细胞融合B.单克隆抗体

C.胚胎移植D.动物细胞培养

AD课堂(kètáng)反馈练习第二十页，共四十二页。精选ppt3、在动物细胞培养的有关叙述中正确的是：（）A、动物细胞培养的目的只是为了获得大量的细胞分泌蛋白B、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散C、细胞的癌变发生(fāshēng)在原代培养向传代培养的过渡过程中D、培养至50代后传代细胞遗传物质没有发生改变B第二十一页，共四十二页。精选ppt4、一般说来，动物细胞体外培养需要(xūyào)满足以下条件（）①无毒的环境(huánjìng)②无菌的环境(huánjìng)③培养基需要加入血清④温度与动物体温相似⑤需要O2，不需要CO2⑥CO2能调节培养液PHA、①②③④⑤⑥B、①②③④C、①③④⑤⑥

D、①②③④⑥D第二十二页，共四十二页。精选ppt5、动物细胞培养的特点（）①细胞贴壁②有丝分裂③细胞分化④接触抑制⑤减数分裂⑥原代培养(péiyǎng)一般传1－10代A、①②④⑥

B、②③④⑤C、①③④⑥

D、③④⑤⑥A第二十三页，共四十二页。精选ppt6、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答(huídá)：（1）容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自______________________。（2）容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是

，然后用

酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是

。动物胚胎(pēitāi)或幼龄动物剪碎胰蛋白(dànbái)使细胞与培养液充分接触，便于培养第二十四页，共四十二页。精选ppt（3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分有

________________等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老(shuāilǎo)死亡，这是培养到第

代。（4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用

处理，然后配置成

，再分装。`动物(dòngwù)血清10胰蛋白酶(yídànbáiméi)细胞悬浮液第二十五页，共四十二页。精选ppt

概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体(gètǐ)。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物核移植（难度(nádù)高）受体细胞减数第二次分裂(fēnliè)中期的卵母细胞二、动物体细胞核移植技术和克隆动物胚胎细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易第二十六页，共四十二页。精选ppt卵细胞C母绵羊子宫Ａ母绵羊Ｂ母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植胚胎移植早期胚胎多利羊分娩卵裂融合后的卵细胞细胞拆合技术妊娠多莉羊的培育(péiyù)过程无性生殖(wúxìngshēngzhí)第二十七页，共四十二页。精选ppt克隆羊培育(péiyù)过程黑面绵羊去核卵细胞白面绵羊乳腺细胞核细胞核移植重组细胞电脉冲刺激早期胚胎胚胎移植另一头绵羊(miányáng)的子宫妊娠、出生克隆羊多利第二十八页，共四十二页。精选ppt１、动物的克隆(kèlónɡ)与植物克隆(kèlónɡ)一样吗？２、用动物体细胞进行克隆的过程(guòchéng),其实际操作过程是什么？动物克隆(kèlónɡ)过程的实际是细胞核移植不一样思考题第二十九页，共四十二页。精选ppt1.体细胞核移植的过程(guòchéng)（以高产奶牛为例）体细胞培养(péiyǎng)甲牛乙牛MⅡ卵母细胞去除(qùchú)核去核卵母细胞重组细胞卵裂重组胚胎代孕母牛丙移植体细胞群克隆牛细胞核移植胚胎移植物理或化学方法激活体细胞注入细胞融合第三十页，共四十二页。精选ppt供体细胞（供核）细胞培养体细胞卵巢(luǎncháo)卵母细胞（MⅡ中期：供质）去核无核卵母细胞注入(zhùrù)细胞(xìbāo)融合重组细胞重组胚胎胚胎移植代孕母体生出与供体奶牛遗传基础相同的犊牛归纳:1.共分成两大阶段：核移植和胚胎移植2.取卵细胞作受体细胞的原因是:它是最大的细胞,易操作3.严格来说新个体有卵巢母细胞的细胞质所以有两个亲本的性状核移植过程细胞培养第三十一页，共四十二页。精选ppt１、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须(bìxū)先去掉受体卵母细胞的核？为使核移植动物的遗传物质全部来自(láizì)有利用价值的动物提供的细胞。２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内(yǐnèi)的细胞，为什么？10代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型，未发生突变思考题第三十二页，共四十二页。精选ppt3、体细胞核移植方法生产(shēngchǎn)的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？不是，克隆动物(dòngwù)绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞思考题第三十三页，共四十二页。精选ppt4、对比(duìbǐ)多莉羊和课本高产奶牛的克隆过程，找出操作过程的不同点？多莉克隆(kèlónɡ)过程的受体细胞是去核卵细胞，而高产奶牛的克隆过程的受体细胞是去核卵母细胞；多莉克隆过程是将供体细胞核注入受体细胞，而高产奶牛的克隆过程是将供体细胞注入受体细胞。5、讨论(tǎolùn)分析上述哪一种措施更科学？并说明理由？卵母细胞当中的细胞周期蛋白含量、活性比卵细胞高，用它作受体更容易成功，将供体细胞注入受体细胞，使克隆动物更像供体动物，操作也方便。思考题第三十四页，共四十二页。精选ppt胚胎(pēitāi)移植技术试管动物（婴儿(yīngér)）培养过程卵细胞精子体外受精受精卵胚胎新个体母体子宫内孕育、产出第三十五页，共四十二页。精选ppt2.体细胞核移植技术的应用(yìngyòng)前景1、加速(jiāsù)家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育2、保护濒危物种，增加(zēngjiā)存活数量3、克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白4、可以作为异种移植的供体，可以用于组织器官的移植第三十六页，共四十二页。精选ppt3.体细胞核移植技术存在(cúnzài)的问题：（1）成功率仍然(réngrán)非常低。（2）绝大多数克隆动物还存在健康问题。许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常(yìcháng)肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。（3）对克隆动物食品的安全性问题存有争议。第三十七页，共四十二页。精选ppt1、在动物细胞培养过程(guòchéng)中遗传物质发生改变的细胞是--------------------（）

A．细胞系B．细胞株

C．原代细胞D．传代细胞2、动物细胞工程技术的基础是----（）

A.动物细胞融合B.单克隆抗体

C.胚胎(pēitāi)移植D.动物细胞培养

AD课堂(kètáng)反馈：第三十八页，共四十二页。精选ppt3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞（