分子生物学实验项目三

PAGEPAGE4实验三植物基因组DNA的提取实验目的通过本实验学习从植物组织中提取DNA的方法。实验原理利用液氮对植物组织进行研磨，从而破碎细胞。细胞提取液中含有SDS溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使蛋白质变性而沉淀下来。EDTA抑制DNA酶的活性。再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白，得到的DNA溶液经乙醇沉淀。仪器、材料与试剂（一）仪器1低温离心机2恒温水浴锅3台式离心机4琼脂糖凝胶电泳系统5微量加样器（二）材料与试剂1三羟甲基氨基甲烷（Tris）2乙二胺四乙酸（EDTA）3氯化钠（Nacl）4β-巯基乙醇5氯化钾（KCl）6异丙醇7乙醇8琼脂糖9十二烷基硫酸钠（SDS）1050mL离心管11陶瓷研钵12吸头、小指管13细胞提取液100mmol/LTris.HCl(PH8.0)5mmol/LEDTA(PH8.0)500mmol/LNacl1.25%SDS1mmol/Lβ-巯基乙醇145mol/LKCl15TE缓冲液10mmol/LTris.HCl(PH8.0)1mmol/LEDTA(PH8.0)16哥伦比亚野生型拟南芥（ArabidopsisColumbia）三周幼叶。17TIANGEN基因组DNA提取试剂盒（PlantGenomicDNAKit）（离心柱型）。实验步骤一、自配试剂提取步骤1取4g新鲜叶片，在液氮中充分研磨成粉末状（越细越好）。2将研磨好的粉末转移至50mL的离心管中，加入16mL细胞提取液，充分混匀，65℃3从水浴中取出离心管，加入5mL5mol/L的KCl溶液，混匀，冰浴20min。44000r/min离心20min。5降上清液转移到另一50mL的离心管中。6加等体积的酚/氯仿混匀，12000r/min离心5min，取上清。7加等体积氯仿，混匀，12000r/min离心5min，取上清。8加入0.6-1倍体积的异丙醇（沉淀DNA），混匀。9离心获得沉淀，加70%乙醇洗涤3次，风干沉淀。10加入500μLTE缓冲液，溶解DNA。11取3mL上清液，琼脂糖凝胶电泳检测DNA的浓度和质量。二植物基因组DNA提取试剂盒提取步骤1、拟南芥基因组DNA的提取4、拟南芥简介拟南芥（Arabidopsisthaliana）十字花科。二年生草本，高7～40厘米。基生叶有柄呈莲座状，叶片倒卵形或匙形；茎生叶无柄，披针形或线形。总状花序顶生，花瓣4片，白色，匙形。长角果线形，长1～1.5厘米。花期3～5月。我国内蒙、新疆、陕西、甘肃、西藏、山东、江苏、安徽、湖北、四川、云南等省区均有发现。拟南芥的优点是植株小（1个茶杯可种植好几棵）、每代时间短（从发芽到开花不超过6周）、结子多（每棵植物可产很多粒种子）、生活力强（用普通培养基就可作人工培养）。拟南芥的基因组是目前已知植物基因组中最小的。每个单倍染色体组（n=5）的总长只有7000万个碱基对，即只有小麦染色体组长的1/80，这就使克隆它的有关基因相对说来比较容易。拟南芥是自花受粉植物，基因高度纯合，用理化因素处理突变率很高，容易获得各种代谢功能的缺陷型。例如用含杀草剂