第七章生物可降解塑料

第一节塑料废物污染和可降解塑料二十世纪七十年代以来塑料工业得到迅猛的发展，无论是工业、农业、建筑业，还是人们的日常生活无不与塑料密切相关。化学合成塑料在自然环境中很难分解，亦不会被腐蚀，燃烧处理又会产生有害气体，塑料垃圾对环境造成了巨大的危害。1本文档共94页；当前第1页；编辑于星期三\9点40分普通塑料对环境污染的特点成分为合成树脂(1)污染范围广(2)污染物增长量快。全世界每年对塑料的需求量为1亿吨。美国专家估计每10年产量将增加1倍。1995年我国的塑料需求量为600万吨，其中对环境有威胁的地膜为88万吨，包装用品为150-200万吨。美国、日本的塑料垃圾占垃圾总量的7%。2本文档共94页；当前第2页；编辑于星期三\9点40分普通塑料对环境污染的特点-续(3)处理难。塑料具有耐酸碱、抗氧化、难腐蚀、难降解的特性，埋地处理百年不烂；燃烧时产生大量有毒气体，如HCl、SOx、CO等。3本文档共94页；当前第3页；编辑于星期三\9点40分普通塑料对环境污染的特点(4)回收利用难。塑料制品种类多，填料、颜料多样，难以分拣回收再利用。(5)生态环境危害大。地膜降低耕地质量，农作物植株矮小，抗病力差。4本文档共94页；当前第4页；编辑于星期三\9点40分研究和开发生物可降解塑料已迫在眉捷用可生物降解塑料代替部分石油化工合成塑料，禁用某些塑料制品如意大利已立法规定自1991年起所有包装用塑料都必须生物可降解，我国也已开始考虑禁用塑料方便餐盒等不可降解的塑料制品。生物可降解塑料5本文档共94页；当前第5页；编辑于星期三\9点40分国内外出现的生物可降解塑料PCL-聚已内酰胺;PVA-聚乙烯醇;PE-聚乙烯6本文档共94页；当前第6页；编辑于星期三\9点40分生物可降解塑料的特点工艺简单生产过程污染轻生物可降解性和生物可相容性可进行高分子材料的结构调整：控制营养、环境条件7本文档共94页；当前第7页；编辑于星期三\9点40分第二节、PHAs的生物合成与应用采用微生物发酵法生产的聚-β-羟基烷酸(简称PHAs)，成为应用环境生物学方面的一个研究的热点聚-β-羟基丁酸——PHB3-羟基丁酸与3-羟基戊酸的共聚物——P(3HB-co-3HV)或PHBV8本文档共94页；当前第8页；编辑于星期三\9点40分PHAs除具有高分子化合物的基本特性，如质轻、弹性、可塑性、耐磨性、抗射线等外，还具有生物可降解性和生物可相容性。PHAs香波瓶100年９个月合成塑料PHAs原料降解9本文档共94页；当前第9页；编辑于星期三\9点40分一、PHAs的结构、物理化学性质和应用多种微生物在一定条件下能在胞内积累PHAs作为碳源和能源的贮存物。由于PHAs具有低溶解性和高分子量，它在胞内的积累不会引起渗透压的增加，是理想的胞内贮藏物，比糖原、多聚磷酸或脂肪更加普遍地存在于微生物中。PHAs的通式可写成：单体数目10本文档共94页；当前第10页；编辑于星期三\9点40分R为甲基时，单体为β--羟基丁酸(HB)；R为乙基时，单体为β--羟基戊酸(HV)；R为丙基时，单体为β--羟基已酸(HC)；R为丁基时，单体为β--羟基庚酸(HH)；R为戊基时，单体为β--羟基辛酸(HO)；R为已基时，单体为β--羟基壬酸(HN)；R为庚基时，单体为β--羟基癸酸(HD)；R为辛基时，单体为β--羟基十一酸(HUD)；R为壬基时，单体为β--羟基十二酸(HDD)；R多为不同链长正烷基，也可以是支链的、不饱和的或带取代基的烷基11本文档共94页；当前第11页；编辑于星期三\9点40分聚合物命名R为甲基时，其聚合物为聚β--羟基丁酸(PHB)R为乙基时，其聚合物为聚β--羟基戊酸(PHV)在一定条件下两种或两种以上的单体还能形成共聚物，其典型代表是3HB和3HV组成的共聚物P(3HB-co-3HV)。12本文档共94页；当前第12页；编辑于星期三\9点40分每个PHAs颗粒含有数千条多聚体链。这些多聚物的物理化学性质和机械性能如韧度、脆性、溶点、玻璃态温度和抗溶剂性等与单体的组成有极大的关系。例如PHBV共聚物中β－羟基戊酸组分的增加可使熔点从180℃(PHB均聚物)降至75℃(PHBV共聚物中HV组分的摩尔分数为30~40%)。PHAs的结构、物理化学性质HV-β--羟基戊酸13本文档共94页；当前第13页；编辑于星期三\9点40分大多数有关细菌PHAs的物化性质的研究是针对PHB和PHBV两种聚合物进行的。PHB是高度结晶的晶体，结晶度的范围在55－80%，其在物理性质甚至分子结构上与聚丙烯(PP)很相似，例如熔点、玻璃态温度、结晶度、抗张强度等，而比重大、透氧率低和抗紫外线照射以及具有光学活性、阻湿性等则是PHB的优点，见表7-2-1。PHAs的结构、物理化学性质-续14本文档共94页；当前第14页；编辑于星期三\9点40分15本文档共94页；当前第15页；编辑于星期三\9点40分PHB较脆和发硬，但可通过与适量HV共聚而补偿。随着PHBV中HV组分的增加，聚合物的劲度降低而韧性增加，且共聚物的熔点随着HV组分的增加而降低，使得较易对其进行热加工处理。单体4HB的聚合物或3HB与4HB的共聚物P(3HB-co-4HB)则是高弹体，且其生物降解的速度比均聚PHB或PHBV更快。PHAs的结构、物理化学性质-续HV-β--羟基戊酸HB-β--羟基丁酸16本文档共94页；当前第16页；编辑于星期三\9点40分PHB的工业化应用主要存在两个缺点PHB较差的熔化稳定性，其分解温度约为200℃，该温度与其熔点相近(约175℃)；可通过在发酵过程中加入3HV的前体合成PHBV共聚体或将PHB与其它多聚物相混合使用来解决；在环境条件下贮存数日后，PHB易发脆。PHB的老化问题可通过简单的淬火处理来较大程度地解决。17本文档共94页；当前第17页；编辑于星期三\9点40分思考题含有PHAs的微生物能通过什么染料鉴别？能利用糖蜜生产PHB的最有效菌株是什么？工业生产PHAs的微生物菌种需要考虑哪些因素？目前报道利用葡萄糖基质生产PHB的最高记录是多少？一般发酵过程分为哪两个阶段？18本文档共94页；当前第18页；编辑于星期三\9点40分PHAs的应用shampoobottlesbicyclehelmet

19本文档共94页；当前第19页；编辑于星期三\9点40分二、PHAs的生物合成合成PHAs的主要微生物合成PHAs的主要基质PHAs的代谢途径与调控20本文档共94页；当前第20页；编辑于星期三\9点40分PHAs的生物合成一合成PHAs的主要微生物1PHAs的发现及形成机制

PHB最初由Lemoigne于1925年首先发现。从巨大芽孢杆菌（Bacillusmegaterium)分离鉴定。阐明该菌形成芽孢时产生PHB。20世纪50年代，发现PHB的生成量随培养基中碳氮比的增加而增加21本文档共94页；当前第21页；编辑于星期三\9点40分能产生PHAs的微生物分布极广，包括光能和化能自养及异养菌计65个属中的近300种微生物。目前研究的较多的微生物：产碱杆菌属(Alcaligeneseurophus,现在更名为Ralstoniaeutropha)假单胞菌属(Pseudonomas)甲基营养菌(Methylotrophs)固氮菌属(Azotobacter)红螺菌属(Rhodospirilum)（一）合成PHAs的主要微生物22本文档共94页；当前第22页；编辑于星期三\9点40分活性污泥中微生物产生的PHB23本文档共94页；当前第23页；编辑于星期三\9点40分表7-4各种微生物利用不同碳源合成PHVs的情况及水平比较

24本文档共94页；当前第24页；编辑于星期三\9点40分选择工业生产PHAs的菌种考虑的因素：能利用廉价碳源的能力生长速率问题多聚物合成速率在细胞内最大量积累多聚物的能力25本文档共94页；当前第25页；编辑于星期三\9点40分英国ICI公司进行考察，发现：固氮菌：产生多糖，PHB的比产率降低，技术问题。甲基营养菌：PHB产率中等。真养产碱杆菌：生长快，易培养、胞内PHB含量高、聚合物分子量大并能利用各种较经济的能源。最终选择了——

真养产碱杆菌（A.eutrophus）ICI——ImperialChemicalIndustries帝国化学工业公司26本文档共94页；当前第26页；编辑于星期三\9点40分真养产碱杆菌(Ralstoniaeutropha)为革兰氏阴性的兼性化能自养型细菌积累PHB可达细胞干重的90%以上能利用糖加丙酸或戊酸产生P(3HB-co-3HV)改变基质该菌还能将4HB和5HV结合到3HB的结构中去，形成4HB或5HV单体与3HB的共聚物。采用带有真养产碱杆菌PHB合成基因的重组大肠杆菌(E.coli)。工业化生产PHAs的微生物27本文档共94页；当前第27页；编辑于星期三\9点40分带有A.eutrophusPHB合成基因的重组E.coli成为新的选择！！A.eutrophus重组E.coli1生长快，容易培养（培养条件简单）2胞内聚合物含量高3聚合物分子量大4提取相对较困难5生产共聚物较容易，易调节共聚比6分子量分布控制较难7已有工业化产品1发酵周期短2胞内聚合物积累量大3胞内无聚合物降解酶，分子量大4易于提取5胞内聚合物颗粒大、结晶度高6能利用多种碳源7在复杂培养条件下，胞内聚合物才能高积累。8有较成熟的高密度细胞培养技术生产PHB(V)的A.eutrophus和重组E.coli特点28本文档共94页；当前第28页；编辑于星期三\9点40分二合成PHAs的主要基质1糖质碳源2甲醇3气体（H2、CO2、O2）4烷烃及其衍生物29本文档共94页；当前第29页；编辑于星期三\9点40分1糖质碳源

葡萄糖A.eutrophus的变异株利用葡萄糖已用于工业生产PHB。Kim等人采用细胞密度培养的方法，50h细胞浓度达164g/L，干细胞中PHB含76％，PHB生产强度为2.42g/(L.h)是目前世界上已报道的最高记录.30本文档共94页；当前第30页；编辑于星期三\9点40分重组E.coli

利用丰富酵母膏、蛋白胨的葡萄糖培养基培养，42h细胞浓度达117g/L，PHB占细胞干重76％，PHB生产强度2.11g/(L.h)降低成本，用合成培养基培养35h，细胞浓度为71.4g/L，PHB干重22.8％。即在合成培养基上不能大量积累PHB（乙酰CoA不足）。在合成培养基上加有机氮源，改进方法，细胞浓度达116g/L，PHB干重达62.2％。31本文档共94页；当前第31页；编辑于星期三\9点40分

蔗糖和糖蜜带有稳定高拷贝数的pSYL104质粒的重组E.coli

能利用蔗糖生产PHB。在含蔗糖的合成培养基中采用恒定pH的分批补料方式培养48h，细胞浓度达124.6g/L,PHB浓度34.3g/L。加有机氮可以改善。利用糖蜜原料有困难：杂质多，PHB难积累。需精制后使用。32本文档共94页；当前第32页；编辑于星期三\9点40分2、甲醇甲醇是最便宜的基质之一，ICI拥有生产甲醇单细胞蛋白的技术经验，曾考虑用甲醇作基质生产PHB。甲醇菌积累PHB含量不高，PHB回收成本大，获得的PHB的分子量较小，故放弃该路线。但可以作为寻求新的菌种和开发更有效的培养方法的途径。33本文档共94页；当前第33页；编辑于星期三\9点40分34本文档共94页；当前第34页；编辑于星期三\9点40分3、气体H2/CO2/O2真养产碱杆菌等一些爆鸣气细菌能利用H2/CO2/O2产生PHB，其中H2作为能源，CO2是碳源。以H2作为基质按其价格和产率而言(见表1)在经济上是划算的，且H2又是一种干净的可再生资源。可以同时解决两个严重的环境污染问题：温室效应及废弃的非降解塑料对生态环境的危害。安全性问题：解决混合气体爆鸣的安全问题和气体的循环利用问题。控制基质气相中氧的浓度低于气体爆炸的下限(6.9%)是安全的。35本文档共94页；当前第35页；编辑于星期三\9点40分4、烷烃及其衍生物假单胞菌能利用中等链长的烷烃或其衍生物醇、酸等产生中等链长羟基烷酸的共聚物(PHAMCL)，共聚物中单体的组成与基质碳架的长度有关。以辛烷作基质连续培养食油假单胞菌(P.oleovorans)，稳定态细胞浓度11.6g/l，PHA的生产强度为0.58g/L·h，36本文档共94页；当前第36页；编辑于星期三\9点40分（三）PHAs的代谢途径与调控PHAs的产生机理微生物在碳源过量而其他营养如氮、磷、镁或氧不足时，积累大量PHAs作为碳源和能源的贮存物，或作为胞内还原性物质还原能力的一种储备。当限制性营养物再次被提供时，PHAs能被胞内酶降解后作为碳源和能源利用。37本文档共94页；当前第37页；编辑于星期三\9点40分胞中积累的PHAs存在形式以单个粒子的形态存在，每个细胞含有的颗粒数量的大小随微生物种类而不同，在Ralstoniaeutropha中，每个细胞含有8-10个颗粒，每个颗粒直径大小为0.2-0.5μm；以非晶体形式存在。具有高度的折光性，颗粒外面包裹着一层膜，没有生物膜那样的典型双层结构，膜中含有PHAs合成酶的降解酶系统。38本文档共94页；当前第38页；编辑于星期三\9点40分ScanningelectronmicroscopeofPHBgranulesinRalstoniaeutropha39本文档共94页；当前第39页；编辑于星期三\9点40分补料分批培养45h收获的菌体

细胞的电镜照相40本文档共94页；当前第40页；编辑于星期三\9点40分PHAs的代谢途径不同微生物合成PHAs的途径不同，基质不同其合成途径也有差异(图7-2)。①真养产碱杆菌及多数细菌从糖合成PHB；②深红红螺菌从糖合成PHB；③食油假单孢菌等从链烃、醇及酸合成具有与基质链长有关的HA单位的PHAs；④一株产碱杆菌从长链偶碳脂肪酸合成PHB；⑤铜绿假单孢菌等从糖质碳源(如葡萄糖酸)合成具中链HA单位的PHAs；⑥真养产碱杆菌等利用糖加丙酸合成PHBV。HA-羟基烷酸41本文档共94页；当前第41页；编辑于星期三\9点40分A42本文档共94页；当前第42页；编辑于星期三\9点40分PHAs的生物合成和降解同时存在的丁酰CoA43本文档共94页；当前第43页；编辑于星期三\9点40分基因重组细菌20世纪80年代后期开始将重组DNA技术应用于生物合成PHB，来自于多种细菌的PHA生物合成酶——PHA生物合成途径的关键酶，已被在分子水平进行了详细的研究，PHA生物合成酶基因已被克隆成功。3个实验室独立地将真养产碱杆菌H16的PHB生物合成基因phbA、phbB和phbC克隆并在大肠杆菌中表达。44本文档共94页；当前第44页；编辑于星期三\9点40分基因重组细菌研究发现，在真养产碱杆菌中，PHA合成酶的结构基因排列在称为phbC-A-B的一个操纵子上，分别编码PHA合成酶、β-酮基硫酯酶和依赖于NADPH的乙酰乙酰CoA还原酶(见图7-4)。45本文档共94页；当前第45页；编辑于星期三\9点40分三、PHAs的发酵生产PHAs实现大规模工业化生产的主要障碍是生产成本。英国帝国化学公司(ICI)认为影响PHAs生产成本的主要因素有菌种原料操作方式提取方法46本文档共94页；当前第46页；编辑于星期三\9点40分因而降低PHAs的生产成本主要措施(1)采用廉价基质(如CO2、H2和O2，甲醇，乙醇，葡萄糖及来自农业废物的有机酸等)和提高产物对基质的产率系数，降低发酵原材料的成本；(2)提高生产强度(如选育高产菌株、采用合适的发酵生产方式等)，以降低操作成本；(3)改进提取、纯化技术(如不采用价格昂贵的有机溶剂、简化操作等)，以降低提取成本。47本文档共94页；当前第47页；编辑于星期三\9点40分PHAs的流加发酵选定了较适宜的菌种、基质和提取方法后，要进一步降低PHAs的生产成本，最主要的关键在于采取适当的发酵方式，以获得高的产物转化率、高的产物浓度。采取适宜的发酵生产方式是提高聚合物的生产率和改进其质量的关键。48本文档共94页；当前第48页；编辑于星期三\9点40分PHAs的流加发酵

在PHAs的生产中，通常采用分批发酵法和流加发酵法，有时用连续培养法来获得高的生产强度。由于真养产碱杆菌只有在某种营养成份氮、磷或氧等缺乏而碳源过量的不平衡生长条件下才能大量积累PHAs，一般可将发酵过程分成两个阶段来进行控制：第一阶段为菌体细胞的形成阶段，在此阶段微生物利用基质形成大量菌体，而多聚体PHAs的积累量很少；第二阶段为多聚体形成阶段，当培养基中某种营养耗尽时，细胞进入PHAs形成阶段，在此阶段PHAs大量形成而菌体细胞基本上不繁殖。49本文档共94页；当前第49页；编辑于星期三\9点40分采用流加发酵法进行PHAs的生产时，可以在某些必须的营养成分成为生长限制性因素之前，对其进行定量流加，延长细胞的对数生长期，从而可以获得较高的菌体浓度。50本文档共94页；当前第50页；编辑于星期三\9点40分减少菌体细胞在生长阶段积累多聚体，也需通过流加法来控制，培养液中氨离子浓度不小于200mg/L，否则会降低共聚体的最终产率。在多聚体形成阶段，限制氮源能刺激细胞积累PHAs，但氮源的完全缺乏会极大地损害微生物细胞的合成活性，所以将在PHAs合成阶段以较低的速率限量流加氮源。与分批发酵中氮源完全缺乏相比，流加发酵细胞中的PHAs含量增加更快。PHAs的流加发酵51本文档共94页；当前第51页；编辑于星期三\9点40分此外，与传统的分批发酵相比，流加发酵通常具有染菌和退化的几率小，可以获得较高的转化率，对发酵易实现优化控制等优点。52本文档共94页；当前第52页；编辑于星期三\9点40分1、采用流加培养法生产PHB（1）选择限制培养基中的氮源作为流加控制的手段，可以提高PHB产率；（2）控制碳氮比相当重要。53本文档共94页；当前第53页；编辑于星期三\9点40分2、采用流加培养法生产共聚物P(HB-CO-HV)聚羟基烷酸（PHAs）是一类具有广泛工业应用价值的耐热塑料，某些共聚物PHA比均聚物PHB具有更有用的热机械性能，如PHB较脆和发硬，而HB和HV形成的共聚物PHA比PHB的硬度降低而韧度增加。54本文档共94页；当前第54页；编辑于星期三\9点40分在共聚物P(HB-CO-HV)的生产过程当中，流加发酵比分批发酵具有明显优势。丙酸和戊酸是生产共聚物P(HB-CO-HV)所必需的基质，由于这些有机酸对菌体细胞具有一定的毒性，故采用简单的分批发酵不可能获得高产，采用流加培养法，可以避免由于培养基中有机酸的积累而使细胞活力受到损害，从而达到提高P(HB-CO-HV)产率的目的。55本文档共94页；当前第55页；编辑于星期三\9点40分另外为了减少菌体细胞在生长阶段积累多聚体，也需通过流加的方法来控制培养液中铵离子浓度不小于200mg/L，否则会降低共聚体的产率。56本文档共94页；当前第56页；编辑于星期三\9点40分（三）流加培养条件对多聚体相对分子量的影响多聚体的相对分子量常常影响其质量和生物降解的速度。不同用途对生物可降解多聚体的平均相对分子质量大小要求不同，一般来说平均相对分子质量大且相对分子质量分布范围窄的多聚体具有更广泛的工业应用前景，并且提取也较为方便。57本文档共94页；当前第57页；编辑于星期三\9点40分多聚体的平均相对分子量大小受流加培养条件的影响。当培养条件恒定时，其平均相对分子量也保持相对恒定，因而只要控制适宜的流加培养条件，就可以将相对分子量控制在所需的范围之内。58本文档共94页；当前第58页；编辑于星期三\9点40分

对于共聚物P(HB-CO-HV)而言，由于大多数微生物即使在氮源和磷等因素不受限制的细胞生长阶段也能在胞内积累少量的PHB，因而在加入任何能激发其形成共聚体的基质时，菌体胞内已含有一些均聚物PHB，因而得到的是各种HV单体含量的共聚体的混合物。59本文档共94页；当前第59页；编辑于星期三\9点40分

为了得到更均质的共聚体，在共聚物P(HB-CO-HV)的积累阶段开始时，应先使培养物处于碳源饥饿状态，这样使细胞内源PHB的量大大降低，得到的共聚物也就较为均一。60本文档共94页；当前第60页；编辑于星期三\9点40分另外，共聚体中HB/HV单体比例依赖于流加过程中糖/丙酸或者丁酸/戊酸的比例，且基质流加速率应小于其最大可能的利用速率，以避免对细胞有毒性的基质的积累，确保产生的共聚物具有恒定的HB/HV比例。61本文档共94页；当前第61页；编辑于星期三\9点40分第四节PHAs的提取PHB的提取涉及到两个方面的问题：一是方法的合理性，主要表现在提取率、产物的纯度，提取过程是否对PHB的结构产生影响，以及是否方便操作，预后处理是否复杂、环境是否污染等方面。二是过程的经济性，表现在提取的材料的费用、能量的消耗和设备的投资等。62本文档共94页；当前第62页；编辑于星期三\9点40分四、PHAs的提取技术有机溶剂法次氯酸钠提取法酶法表面活性剂-次氯酸钠法其他方法63本文档共94页；当前第63页；编辑于星期三\9点40分1.有机溶剂法对于由真养产碱杆菌(Ralstoniaeutropha)生产PHB，研究初期通常采用的提取方法是有机溶剂法。包括:氯仿、二氯乙烷、1,1,2—三氯乙烷、乙酸酐、碳酸乙烯酯及碳酸丙烯酯等。原理：有机溶剂一方面能改变细胞壁和膜的通透性，另一方面能使PHB溶解到溶剂中，而非PHB的细胞物质(NPCM)不能溶解，从而将PHB与其它物质分离开来。具体操作步骤如图7-5所示。64本文档共94页；当前第64页；编辑于星期三\9点40分图7-5有机溶剂提取PHB的过程示意图65本文档共94页；当前第65页；编辑于星期三\9点40分(1)当溶剂中含有超过5%(w/v)的PHB时，溶液变得很粘，要去掉细胞的残余物就变得很困难；(2)提取率难以达到很高；(3)使用大量的有机溶剂；(4)造成严重环境污染，操作不便。优点：引起PHB的降解非常小，得到PHB的纯度非常高。因此，用有机溶剂提取PHB通常作为一种实验室方法。有机溶剂的方法的缺点66本文档共94页；当前第66页；编辑于星期三\9点40分2次氯酸钠提取法次氯酸钠能够破胞且对细胞中的非PHB的细胞物质的消化很有效，因而用该方法破胞所得产品的纯度较高、提取速度快，避免了有机溶剂提取过程中繁琐的前、后处理工作。但是PHB分子量只有原来的一半。具体操作过程见图2。67本文档共94页；当前第67页；编辑于星期三\9点40分图2次氯酸钠提取PHB过程示意图68本文档共94页；当前第68页；编辑于星期三\9点40分次氯酸钠提取法优点：不使用大量的有机溶剂。缺点：次氯酸钠对PHB分子有严重的降解作用，因而所获得的PHB的分子量较小。69本文档共94页；当前第69页；编辑于星期三\9点40分次氯酸钠/氯仿提取法

改进：根据氯仿提取时PHB纯度高且被降解程度小，而次氯酸钠对非PHB细胞物质消化很有效的优点，结合PHB疏水亲油物质，而细胞膜具有亲水性的特点的原理，发明了用分散的次氯酸钠/氯仿提取PHB的方法。70本文档共94页；当前第70页；编辑于星期三\9点40分冷冻干燥的菌体+次氯酸钠+氯仿破壁离心分离氯仿相中加入非溶剂物质使PHB沉淀离心过滤分离烘干成品71本文档共94页；当前第71页；编辑于星期三\9点40分在该方法中次氯酸钠主要起破胞作用，而氯仿则对破胞产生的PHB起保护作用，因而不但可得到较高纯度的PHB，而且PHB被次氯酸钠降解的程度大大降低。同时由于破胞较完全，因而可以获得较好的提取收率。72本文档共94页；当前第72页；编辑于星期三\9点40分优点：提取率较高，得到的PHB的分子量较大。缺点：需要大量的有机溶剂，并且操作复杂，限制了工业化生产。73本文档共94页；当前第73页；编辑于星期三\9点40分三、酶法基本原理与次氯酸钠法相似，即让大量的NPCM溶解而PHB不溶解，从而达到分离提纯的目的。但是由于NPCM通常包括核酸、类脂物、磷脂、肽聚糖以及蛋白质等物质，因此实际上是通过多种酶的多步或协同作用来达到消化NPCM的目的。74本文档共94页；当前第74页；编辑于星期三\9点40分

单独的使用酶来消化细胞中的杂质物质，所得到的PHB的纯度不高，往往要结合其他的方法，例如再用表面活性剂处理，才能得到较高纯度的PHB。该法包括细胞的热处理、酶处理和阴离子表面活性剂处理等步骤，因此操作十分复杂。75本文档共94页；当前第75页；编辑于星期三\9点40分

由于细胞杂质成分比较复杂，特别是酶作用的条件比较苛刻，需要处理的步骤较多、操作较为复杂，因此酶法的应用在提取成本、过程放大方面受到了很大的限制。76本文档共94页；当前第76页；编辑于星期三\9点40分四、表面活性剂/次氯酸钠法

基本原理：当表面活性剂浓度较低时，其单个分子进入到细胞膜的磷脂双层中；随着表面活性剂浓度的增加，更多的表面活性剂分子结合到磷脂双层中，细胞膜的体积就会不断的增大；一旦磷脂双层中的表面活性剂饱和，再增加表面活性剂就会使细胞膜收到破坏，表面活性剂与磷脂形成大量的胶团，胞内PHB物质释放出来。77本文档共94页；当前第77页；编辑于星期三\9点40分

冷冻干燥菌体表面活性剂破胞离心过滤分离次氯酸钠洗涤离心过滤分离水洗离心过滤分离烘干产品78本文档共94页；当前第78页；编辑于星期三\9点40分

该方法能够比较方便的实现在水相中提取PHB，这是它的突出优点，但要使用大量的表面活性剂，而且次氯酸钠的使用不可避免的造成了PHB的降解。79本文档共94页；当前第79页；编辑于星期三\9点40分五、其他方法

基因工程技术重组大肠杆菌生产PHB的方法，用氨水从这类细胞中提取PHB就是其中的一种方法。80本文档共94页；当前第80页；编辑于星期三\9点40分各种提取PHB的方法比较81本文档共94页；当前第81页；编辑于星期三\9点40分（一）降解机制1胞内降解胞内PHB的代谢是个循环过程。图7-9中第四步到第七步是降解过程。首先(第四步)胞内无定形PHB颗粒在解聚酶作用下降解，形成单体和二聚体的混合物。二聚体随之在二聚体水解酶作用下形成单体。五、PHAs的生物降解

82本文档共94页；当前第82页；编辑于星期三\9点40分图7-9PHB的代谢过程83本文档共94页；当前第83页；编辑于星期三\9点40分2胞外降解聚—羟基丁酸(PHB)的胞外降解有两种机制，在无菌条件下通过水解进行。这种机制对于PHB在医疗方面的应用(如作为药物的缓适载体、手术缝线等)特别重要。在自然环境中，是酶降解机制。许多细菌和真菌可分泌外解聚酶，有些甚至可以利用PHB作为唯一碳源生长。84本文档共94页；当前第84页；编辑于星期三\9点40分（二）PHB在环境中的降解影响PHB降解速度的因素较多包括环境类型：微生物种群及活力，水份，温度塑料制品性质：厚度，表面组织形态，孔隙度，制品中的第二组分,如填充料、