甾体激素类药物的分析

基本结构：环戊烷骈多氢菲ABCD12345678910111213141516171819本文档共122页；当前第1页；编辑于星期三\6点22分所以甾体激素类药物的母核叫环戊烷骈多氢菲。环上双键的表示方法：如果在母核上有双键的话，用“”表示，并且，双键的位置写在的右上角。双键位置如：4位和5位间有双键时，用“4”表示。双键在5位和6位之间时，用“5”表示。如果5位和10位间有双键时，仅用“5”表示是不行的，为了和上面的情况相区别，用“5(10)”表示。当在环上有多个双键时，分别把各个双键的位置写上，中间用“，”隔开。如1,4环上取代基构型的表示方法：本文档共122页；当前第2页；编辑于星期三\6点22分在母核上连接的取代基或原子，构型和构型之分。构型：与母核连接的取代基或原子，指向环平面的前方时，这样的取代基为构型。用实线表示“———”构型：与母核连接的取代基或原子，指向环平面的前方时，这样的取代基为构型。用虚线表示“”本文档共122页；当前第3页；编辑于星期三\6点22分一、结构特点天然和人工合成品的甾体激素，均具有环戊烷骈多氢菲母核。结构特点：A环，多为脂环，且C4/C5间有双键，并与C3酮基共轭，称为α，β-不饱和酮，标记为Δ4-3-酮；少数为苯环；C3，可能有酮基或羟基；C10、C13，多数为角甲基，少数C10无角甲基；C11，可能有酮基或羟基；C17，可能有羟基、酮基、甲酮基、α-醇酮基、甲基、乙炔基等；人工合成的甾体激素，有些在C6或C9上引入卤素，C16上引入甲基、羟基，以及具有C1/C2双键等；有些取代基是α型（用虚线表示），有些是β型（用实线表示）。本文档共122页；当前第4页；编辑于星期三\6点22分分类：甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素本文档共122页；当前第5页；编辑于星期三\6点22分肾上腺皮质激素皮质酮本文档共122页；当前第6页；编辑于星期三\6点22分肾上腺皮质激素氢化可的松本文档共122页；当前第7页；编辑于星期三\6点22分肾上腺皮质激素醋酸地塞米松本文档共122页；当前第8页；编辑于星期三\6点22分泼尼松

在可的松结构的基础上1，2位间引入一个双键

本文档共122页；当前第9页；编辑于星期三\6点22分雄性激素丙酸睾酮本文档共122页；当前第10页；编辑于星期三\6点22分蛋白同化激素苯丙酸诺龙本文档共122页；当前第11页；编辑于星期三\6点22分孕激素黄体酮本文档共122页；当前第12页；编辑于星期三\6点22分雌激素炔雌醇本文档共122页；当前第13页；编辑于星期三\6点22分一、结构与性质1.肾上腺皮质激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应

C17

–

α–醇酮基还原性本文档共122页；当前第14页；编辑于星期三\6点22分2.雄性激素及蛋白同化激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应

C17–

β–羟基可成酯本文档共122页；当前第15页；编辑于星期三\6点22分3.孕激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应C17–甲酮基与亚硝基铁氰化纳反应C17–乙炔基与AgNO3反应本文档共122页；当前第16页；编辑于星期三\6点22分4.雌激素主要活性基团性质A环为3–OH苯环UV、与重氮苯磺酸盐反应C17–乙炔基与AgNO3反应C17–羟基可成酯本文档共122页；当前第17页；编辑于星期三\6点22分二、鉴别试验（一）与强酸的呈色反应甾体激素类药物呈色H2SO4H3PO4HClO4HCl（母核）本文档共122页；当前第18页；编辑于星期三\6点22分与硫酸显色反应

显色荧光加水稀释泼尼松龙深红

絮状↓灰泼尼松橙

黄→蓝绿炔雌醚橙红

黄绿

↓红色

炔雌醇橙红

黄绿

絮状↓玫红醋酸可的松黄或微褪色并澄

带橙清本文档共122页；当前第19页；编辑于星期三\6点22分(二)官能团的反应肾上腺皮质激素药物呈色四氮唑盐OHˉ1C17

–

α–醇酮基还原性A.呈色反应本文档共122页；当前第20页；编辑于星期三\6点22分肾上腺皮质激素药物Cu2O↓橙红色碱性酒石酸铜B.沉淀反应Ag↓黑色氨制硝酸银本文档共122页；当前第21页；编辑于星期三\6点22分甾酮类激素药物呈色羰基试剂2.C3–酮基和C20–酮基＃常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼本文档共122页；当前第22页；编辑于星期三\6点22分异烟腙（黄色）睾酮本文档共122页；当前第23页；编辑于星期三\6点22分黄体酮异烟双腙（黄色）本文档共122页；当前第24页；编辑于星期三\6点22分具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物呈色亚硝基铁氰化纳间二硝基酚芳香醛3.甲酮基本文档共122页；当前第25页；编辑于星期三\6点22分黄体酮蓝紫色亚硝基铁氰化纳其他甾体淡橙色不显色本文档共122页；当前第26页；编辑于星期三\6点22分黄体酮本文档共122页；当前第27页；编辑于星期三\6点22分蓝紫色本文档共122页；当前第28页；编辑于星期三\6点22分有机氟Fˉ有机破坏有机氯Clˉ4.有机卤素茜素氟蓝硝酸亚铈硝酸—硝酸银AgCl↓呈色本文档共122页；当前第29页；编辑于星期三\6点22分茜素氟蓝蓝紫色F-本文档共122页；当前第30页；编辑于星期三\6点22分雌激素类药物红色偶氮染料重氮苯磺酸5.酚羟基本文档共122页；当前第31页；编辑于星期三\6点22分含炔基的甾体激素银盐沉淀硝酸银6.乙炔基↓本文档共122页；当前第32页；编辑于星期三\6点22分炔雌醇白本文档共122页；当前第33页；编辑于星期三\6点22分△KOH(三)制备衍生物测定m.p.本文档共122页；当前第34页；编辑于星期三\6点22分△△本文档共122页；当前第35页；编辑于星期三\6点22分香（四）水解产物的反应本文档共122页；当前第36页；编辑于星期三\6点22分特臭特臭本文档共122页；当前第37页；编辑于星期三\6点22分△４-3-酮240nm苯环280nm（五）UV法本文档共122页；当前第38页；编辑于星期三\6点22分本文档共122页；当前第39页；编辑于星期三\6点22分本文档共122页；当前第40页；编辑于星期三\6点22分3300～3000cm-13000～2700cm-11900～1650cm-11650～1450cm-11000～650cm-1（六）IR法3750～3300cm-1ν本文档共122页；当前第41页；编辑于星期三\6点22分醋酸可的松结构特征：△4–3–酮、C17–OHC20–酮基、C11–酮基、醋酸酯本文档共122页；当前第42页；编辑于星期三\6点22分1630cm-1ν3420cm-亚甲基、角甲基吸收带1750cm-11232cm-11052cm-1本文档共122页；当前第43页；编辑于星期三\6点22分结构特征：△4–3–酮、C17–OHC17–乙炔基炔诺酮本文档共122页；当前第44页；编辑于星期三\6点22分1650cm-1ν3300cm-3270cm-1ν1615cm-1本文档共122页；当前第45页；编辑于星期三\6点22分结构特征：酚羟基、C17–OHC17–乙炔基炔雌醇本文档共122页；当前第46页；编辑于星期三\6点22分1505cm-1ν3505cm-3300cm-1ν1590cm-13610cm-ν酚羟基醇羟基1615cm-1苯环的骨架振动本文档共122页；当前第47页；编辑于星期三\6点22分（七）TLC法主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别方法：对照品法要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。本文档共122页；当前第48页；编辑于星期三\6点22分炔诺酮TLC图本文档共122页；当前第49页；编辑于星期三\6点22分（八）HPLC法主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）方法：对照品法要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。本文档共122页；当前第50页；编辑于星期三\6点22分三、杂质检查（一）其他甾体定义与标示药物结构不同的甾体化合物都称为“其他甾体”本文档共122页；当前第51页；编辑于星期三\6点22分Li/NH3C2H5OH弱酸雌二醇－3－甲醚苯丙酸诺龙的合成路线III本文档共122页；当前第52页；编辑于星期三\6点22分强酸苯丙酰氯HClIII本文档共122页；当前第53页；编辑于星期三\6点22分特点（1）可能存在多个甾体杂质（2）结构类似2.来源原料、中间体、异构体、降解产物本文档共122页；当前第54页；编辑于星期三\6点22分4.方法（具有一定分离能力）TLC法（高低浓度对比法）HPLC法（类似高低浓度对比法）本文档共122页；当前第55页；编辑于星期三\6点22分（1）TLC法（高低浓度对比法）判定方法：规定杂质斑点数目规定杂质斑点颜色本文档共122页；当前第56页；编辑于星期三\6点22分醋酸氟轻松检查其他甾体取本品加氯仿-甲醇（9：1）制成3.0mg/ml作为供试液，精密量取适量，加氯仿-甲醇（9：1）稀释成0.06mg/ml作为对照液；照薄层色谱法，各取5μl，分别点于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇（97:3）为展开剂，展开后晾干，在105℃干燥10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试本文档共122页；当前第57页；编辑于星期三\6点22分液，立即检视，供试品溶液如显杂质斑点，不得多于2个，其颜色与对照液的主斑点比较，不得更深。12本文档共122页；当前第58页；编辑于星期三\6点22分特点：（1）简便易行，不需特殊的仪器；（2）不需对照品；（3）只能控制单个杂质的限量；（4）要求杂质与主成分的显色灵敏度接近。本文档共122页；当前第59页；编辑于星期三\6点22分（2）HPLC法（高低浓度对比法）判定方法：规定杂质峰数目规定杂质峰面积本文档共122页；当前第60页；编辑于星期三\6点22分取本品适量，精密称定，以无水乙醇为溶剂，配制成每1ml含2mg的溶液（1）与每1ml含0.04mg的溶液（2），用含量测定项下的方法和溶液(0.16mg/ml)，取10μl注入液相色谱仪，调整仪器灵敏度，使主成分峰高度达记录仪的满量程。再分别取溶液（1）醋酸甲地孕酮检查其他甾体本文档共122页；当前第61页；编辑于星期三\6点22分和溶液（2）各10μl，进样。记录至主成分峰保留时间的2倍。溶液（1）显示的杂质峰数不得超过4个，各杂质峰面积及其总和分别不得大于溶液（2）主峰面积的1/2和3/4。供试溶液：溶液（1）2mg/ml对照溶液：溶液（2）0.04mg/ml本文档共122页；当前第62页；编辑于星期三\6点22分特点：（1）需特殊的仪器；（2）不需对照品；（3）可以控制杂质的总量；

本文档共122页；当前第63页；编辑于星期三\6点22分（二）游离磷酸地塞米松磷酸钠氢化可的松磷酸钠倍他米松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠对照品法本文档共122页；当前第64页；编辑于星期三\6点22分原理：方法：本文档共122页；当前第65页；编辑于星期三\6点22分检查游离磷酸地塞米松磷酸钠精密称取本品20mg，置25ml量瓶中，加水15ml溶解，精密加钼酸铵硫酸试液2.5ml与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液1ml，加水至刻度，摇匀，在20℃放置30～50分钟，照分光光度法，在740nm处测定吸收度，与对照液4.0ml同法处理的吸收度比较，不得更大。本文档共122页；当前第66页；编辑于星期三\6点22分（对照液0.0035%KH2PO4）本文档共122页；当前第67页；编辑于星期三\6点22分（三）甲醇和丙酮（灵敏度法）甲醇不得出峰检测限=3.1ng丙酮≤5.0%内标法+校正因子GC法本文档共122页；当前第68页；编辑于星期三\6点22分地塞米松磷酸钠检查甲醇和丙酮精密称取本品0.16g，置10ml量瓶中，精密加内标溶液2ml，加水稀释至刻度，作为供试液；另精密量取甲醇10μl(≈7.9mg)与丙酮100μl(≈79mg)置100ml量瓶中，精密加内标溶液20ml，加水至刻度，作为对照液。照气相色谱法测定，含丙酮不得过5.0%，并不得出现甲醇峰。本文档共122页；当前第69页；编辑于星期三\6点22分炔雌醇本文档共122页；当前第70页；编辑于星期三\6点22分（四）雌酮原理Zimmermann反应碱性KOH乙醇高纯度本文档共122页；当前第71页；编辑于星期三\6点22分硒四、来源合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢剧毒原理方法本文档共122页；当前第72页；编辑于星期三\6点22分醋酸氟轻松检查硒取本品50mg，照氧瓶燃烧法进行破坏后，将吸收液转移至100ml容量瓶中，用水15ml冲洗燃烧瓶及铂丝，并入吸收液中，用水加至刻度。取硒对照液（0.05ug/ml）和上述供试品溶液分别用氨试液调节pH值至2.00.2后，转移至分液漏斗中，用水本文档共122页；当前第73页；编辑于星期三\6点22分少量分次洗涤烧杯，洗液并入分液漏斗中，使成60ml，各加盐酸羟胺溶液（1→2）1ml，摇匀后，立即精密加二氨基奈试液5ml，摇匀，在室温下放置100分钟，精密加环己烷5ml，强烈振摇2′，静置分层，取环己烷脱水后，测A378nm。

规定A供＜A对。本文档共122页；当前第74页；编辑于星期三\6点22分本文档共122页；当前第75页；编辑于星期三\6点22分四、含量测定（一）UV法△４-3-酮240nm（±）肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素苯环280nm（±）雌激素本文档共122页；当前第76页；编辑于星期三\6点22分（二）反应分光光度法1.适用于非分光光度活性药物2.使待测组分光谱位移，避免干扰3.增加测定灵敏度4.增加选择性弱、非分光光度活性药物强分光光度活性药物化学反应本文档共122页；当前第77页；编辑于星期三\6点22分

肾上腺皮质激素类C17-α－醇酮基强还原性1.原理OH-[还原]四氮唑比色法本文档共122页；当前第78页；编辑于星期三\6点22分[O]OH-分子重排本文档共122页；当前第79页；编辑于星期三\6点22分三苯甲瓒↓深红氯化三苯四氮唑（TTC）红四氮唑（RT）本文档共122页；当前第80页；编辑于星期三\6点22分蓝四氮唑（BT）本文档共122页；当前第81页；编辑于星期三\6点22分双甲瓒（暗蓝）本文档共122页；当前第82页；编辑于星期三\6点22分2.方法ChPTTC（RT）BPTTC（RT）USPBT对照品法40～45′暗本文档共122页；当前第83页；编辑于星期三\6点22分醋酸泼尼松龙软膏含量测定对照液：精密称取醋酸泼尼松龙对照品20mg，置100ml量瓶中，加无水乙醇振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。供试液：精密称取本品4g（约相当于醋酸泼尼松龙20mg），置烧杯中，加无水乙醇约30ml，置水浴上加热，充分搅拌，使醋酸泼尼松龙溶解，再置冰浴中冷却，滤过，滤液置100ml量瓶中，同法提取本文档共122页；当前第84页；编辑于星期三\6点22分三次，滤液并入量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。测定法：精密量取上述溶液各1ml，分别置干燥具塞试管中，各精密加无水乙醇9ml与氯化三苯四氮唑试液2ml，摇匀，再各精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在25℃暗处放置40～50分钟，照分光光度法，在485nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得。操作应避光。本文档共122页；当前第85页；编辑于星期三\6点22分3.讨论（1）基团对反应速度的影响C11=O＞C11－OHC21－OH＞C21-酯C16无论何种取代基ν↓本文档共122页；当前第86页；编辑于星期三\6点22分（2）溶剂、水分的影响含水量＞5%→ν↓含水10%→A↓10%含水30%→几无反应—无醛无水乙醇醛→A↑—无水乙醇本文档共122页；当前第87页；编辑于星期三\6点22分（3）O2与光线的影响反应过程反应产物怕光→避光、快速O2影响颜色强度和稳定性→隔绝空气、快速、充N2本文档共122页；当前第88页；编辑于星期三\6点22分（4）碱的种类及加入顺序反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行以氢氧化四甲基铵的结果最佳加入顺序：本文档共122页；当前第89页；编辑于星期三\6点22分（5）温度与时间t℃↑→ν↑→甲瓒分解↑→%↓ChP25℃40～45′BP30℃1h本文档共122页；当前第90页；编辑于星期三\6点22分4.特点：缺点影响因素太多优点测定结果能指示药品的稳定性（氧化及降解产物无此反应）本文档共122页；当前第91页；编辑于星期三\6点22分肾上腺皮质激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素C3－酮基1.原理HCl（缩合）异烟肼比色法本文档共122页；当前第92页；编辑于星期三\6点22分异烟腙（黄色）本文档共122页；当前第93页；编辑于星期三\6点22分2.方法暗45′对照品法本文档共122页；当前第94页；编辑于星期三\6点22分醋酸地塞米松软膏含量测定对照液：精密称取醋酸地塞米松对照品25mg，置100ml量瓶中，加无水乙醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取5ml，用无水乙醇稀释至50ml，摇匀。供试液：精密称取本品适量（约相当于醋酸地塞米松25mg），置烧杯中，加无水乙醇约25ml，置水浴中加热，搅拌，使醋酸地塞米松溶解，再置冰浴中冷却，本文档共122页；当前第95页；编辑于星期三\6点22分滤过，滤液置100ml量瓶中，同法提取三次，滤液并入量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。测定法：精密量取上述溶液各10ml，分别置具塞容器中，置水浴中蒸去乙醇，残渣中加氯仿10ml，振摇，使残渣溶解，各精密加0.1%异烟肼甲醇溶液10ml，摇匀，置55℃暗处保温45分钟，取出，放冷，用氯仿稀释至25ml。摇匀，在415nm的波长处分别测定吸收度，计算即得。本文档共122页；当前第96页；编辑于星期三\6点22分3.讨论反应速度（1）C3=O＞C17=O、C20=OC11=O不反应反应专属性C3－酮基本文档共122页；当前第97页；编辑于星期三\6点22分（2）溶剂的选择异烟肼盐酸盐→甲醇、乙醇无水甲醇无水乙醇本文档共122页；当前第98页；编辑于星期三\6点22分（3）水分、O2与光线的影响含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓不挥发溶剂、不吸收水分时→O2与光线无影响本文档共122页；当前第99页；编辑于星期三\6点22分酸、异烟肼的量(3)盐酸:异烟肼=2:1样品:异烟肼=1:8→ν↑酸度↑→异烟肼盐↓酸度↓→A↓温度(4)t℃↑→ν↑本文档共122页；当前第100页；编辑于星期三\6点22分1.原理λmax=465λmax=515雌激素Kober反应比色法△△本文档共122页；当前第101页；编辑于星期三\6点22分本文档共122页；当前第102页；编辑于星期三\6点22分雌二醇-3-甲醚λmax=465λmax=515本文档共122页；当前第103页；编辑于星期三\6点22分铁－酚试剂[(NH4)2Fe(SO4)2

+H2SO4+H2O2+苯酚]*铁盐的作用加快黄色产物的形成、转化加强红色产物的稳定性*酚的作用加快红色产物的形成消除反应产生的荧光Iron-phenolReagent本文档共122页；当前第104页；编辑于星期三\6点22分2.特点：优点较高的灵敏度具有一定的选择性缺点非化学计量反应反应应控制条件、注意平行原则本文档共122页；当前第105页；编辑于星期三\6点22分（三）HPLC法USP、BP、JP均采用RP－HPLC（大多内标法）特点用样量少，灵敏度高，分离效果好，测定速度快（甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰）本文档共122页；当前第106页；编辑于星期三\6点22分1、熟悉本类药物的分类，掌握其结构特征与分析方法的关系2、掌握红外光谱鉴别法及某些官能团的呈色反应，了解其他鉴别方法3、掌握本类药物中其他甾体的检查方法，了解其他特殊杂质的检查第十二章复习内容本文档共122页；当前第107页；编辑于星期三\6点22分4、掌握四氮唑比色法、异烟肼比色法的原理、方法及测定条件。了解UV法、Kober反应比色法及HPLC法在其含量测定中的应用本文档共122页；当前第108页；编辑于星期三\6点22分112．甾体激素类药物的结构中能和四氮唑盐发生显色反应的基团A.酚羟基B.活泼次甲基C.甲酮基D.C17-α-醇酮基E.酮基本文档共122页；当前第109页；编辑于星期三\6点22分用异烟肼比色法测定甾体激素药物含量时，其溶液的环境是A．强酸性B．中性C．强碱性D．弱碱性E．以上都不对本文档共122页；当前第110页；编辑于星期三\6点22分问题31～35A．维生素B1B．醋酸地塞米松C．两者皆是D．两者皆不是31.异烟肼比色法32.硫色素反应33.紫外分光光度法34.羟肟酸铁反应35.绿奎宁（Thaciaquin）反应BACDD本文档共122页；当前第111页；编辑于星期三\6点22分可用于氢化可的松鉴别的试剂有A．氨制硝酸银B．异烟肼C．红四氮唑D．硫酸E．重氮苯磺酸本文档共122页；当前第112页；编辑于星期三\6点22分75．可用于甾体激体类药物的测定方法有A．高效液相色谱法B．四氮唑盐法C．紫外分光光度法D．异烟肼比色法E．Kober反应比色法本文档共122页；当前第113页；编辑于星期三\6点22分能与亚硝基铁氰化钠反应生成兰紫色的药物是A．雌二醇B．黄体酮C．醋酸可的松D．苯丙酸诺龙E．以上都不对本文档共122页；当前第114页；编辑于星期三\6点22分98：74.各国药典对甾体激素类药物常用HPLC或GC法测定其含量，主要原因是A.它们没有特征紫外吸收，不能用紫外分光光度法B.不能用滴定分析法进行测定C.由于“其它甾体”的存在，色谱法可消除它们的干扰D.色谱法比较简单，精密度好E.色谱法准确度优于滴定分析法本文档共122页；当前第115页；编辑于星期三\6点22分113．异烟肼比色法测定甾体激素类药物时，药物的呈色基团是A.酮基