对分子诊断设备的要求及应用中的问题

ISO15189认可对分子诊断设备

的要求及应用中的问题沈佐君15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)主要内容一、开展分子诊断检测的国家及行业相关规定二、开展分子诊断检测涉及的主要设备三、ISO15189在分子诊断领域的应用说明简介四、ISO15189对分子诊断设备的性能要求五、ISO15189对分子诊断检测的系统完整性要求六、分子诊断设备制造商在帮组用户通过

ISO15189认可过程中应注意的问题15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)第一部分开展分子诊断检测的国家及行业相关规定15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)分子诊断的基本概念基因体外扩增检验，通常称为PCR检验2002-2009年:该检验项目是目前我国临床检验项目中唯一一项需要通过卫生部或省级临床检验中心现场技术验收合格方可开展临床检验的技术准入项目。2009年5月1日后：卫生部关于印发《医疗技术临床应用管理办法》的通知（卫医政发〔2009〕18号）和《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》（卫办医政发〔2010〕194号）。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)医疗技术分为三类：第一类：医疗技术是指安全性、有效性确切，医疗机构通过常规管理在临床应用中能确保其安全性、有效性的技术。第二类：医疗技术是指安全性、有效性确切，涉及一定伦理问题或者风险较高，卫生行政部门应当加以控制管理的医疗技术。（如PCR）第三类：医疗技术是指具有下列情形之一，需要卫生行政部门加以严格控制管理的医疗技术：（1）涉及重大伦理问题；（2）高风险；（3）安全性、有效性尚需经规范的临床试验研究进一步验证；（4）需要使用稀缺资源；（5）卫生部规定的其他需要特殊管理的医疗技术。（共19项，第8项基因芯片诊断技术，现划为第二类）15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)卫生部负责第三类医疗技术的临床应用管理工作。第三类医疗技术目录由卫生部制定公布，并根据临床应用实际情况，予以调整。省级卫生行政部门负责第二类医疗技术临床应用管理工作。第二类医疗技术目录由省级卫生行政部门根据本辖区情况制定并公布，报卫生部备案。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)医疗技术临床应用

能力审核属于第三类的医疗技术首次应用于临床前，必须经过卫生部组织的安全性、有效性临床试验研究、论证及伦理审查。

第二类医疗技术和第三类医疗技术临床应用前实行第三方技术审核制度。

对医务人员开展第一类医疗技术临床应用的能力技术审核，由医疗机构自行组织实施，也可以由省级卫生行政部门规定。

卫生部指定或者组建的机构、组织（以下简称技术审核机构）负责第三类医疗技术临床应用能力技术审核工作（1.中国医学科学院、2.中华医学会、3.中国医院协会、4.中华医师协会、5.中华口腔医学会）。

省级卫生行政部门指定或者组建的技术审核机构负责第二类医疗技术临床应用能力技术审核工作。

卫生部可以委托省级卫生行政部门组织对指定的第三类医疗技术进行临床应用能力技术审核工作。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)对开展分子诊断检测实验室的要求：实验室流程布局人员上岗证书实验室的管理（参照ISO17025，10章38款）规范的应该是：实验室验收合格证书（技术审核报告）+卫生行政部门的登记（诊疗科目）15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)第二部分开展分子诊断检测涉及的主要设备15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)主要设备（5.5检验过程）1、核酸提取仪2、PCR

（1）普通PCR仪（2）实时荧光PCR仪

（3）液体芯片3、杂交仪4、基因芯片5、一体化/工作站6、测序仪15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)辅助设备（5.2设施和环境条件）1、加样器2、金属浴3、离心机4、冰箱5、生物安全柜6、UPS7、纯水器（能除RNA酶）15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)第三部分ISO15189在分子诊断领域的应用说明简介：5.2、5.3、5.5及附录15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)医学实验室质量和能力认可准则在分子诊断领域的应用说明

CNAS-CL36

2014年4月21日第一次修订，2014年11月1日实施15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)1范围本文件规定了CNAS对分子诊断领域的认可要求，包括：病原体核酸和人体基因等领域涉及的核酸扩增试验、杂交试验（包括解剖病理中的原位杂交试验）、核酸电泳分析等。

注：“分子诊断”包括检验医学领域的“分子检验”以及病理学检查领域的“分子病理”。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括修改单）适用于本文件。GB/T20468-2006临床实验室定量测定室内质量控制指南CNAS-RL02能力验证规则CNSA-CL31内部校准要求临床技术操作规范·病理学分册医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则病理科建设与管理指南（试行），卫办医政发〔2009〕31号3术语和定义15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)标本接收与处理：流程和标本是否合格的要点试剂耗材质检：为何要质检、如何做核酸提取：原理和操作技术要领防污染：措施和意识质量控制：程序和实际运行情况、失控的分析处理结果分析与判断：结果审核、报告发放评审中考核的主要内容15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)5.2设施和环境条件

5.2.1

应实施安全风险评估，如果设置了不同的控制区域，应制定针对性的防护措施及合适的警告。5.2.2涉及基因扩增检验的实验室原则上分四个独立的工作区域：试剂贮存和准备区；样品制备区；扩增区；扩增产物分析区。如使用自动分析仪（扩增产物闭管检测），扩增区和扩增产物分析区可合并。具体实验室分区应依据其所使用的技术平台及检验项目和工作量而定。

上述每个区域应有充足空间以保证：样品处置符合分析前、后样品分区放置；仪器放置符合维修和操作要求；样品制备区放置生物安全柜、离心机和冰箱等仪器设备；打印检验报告时交叉污染的控制。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)5.2设施和环境条件工作区域应符合如下要求：c）实验室各分区应配置固定和移动紫外线灯，波长为254nm，照射时离实验台的高度一般为60～90cm；e）样品制备区应配置二级生物安全柜和洗眼器，实验室附近应有喷淋装置。所有分子病理实验室均应设置独立的标本前处理区，包括切片区和脱蜡区，用于组织切片、脱蜡、水化、染色等。脱蜡、水化及染色应在通风设施中进行。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)5.2设施和环境条件5.2.3用以保存临床样品和试剂的设施应设置目标温度和允许范围，并记录。实验室应有温度失控时的处理措施并记录。5.2.6不同的实验区域应当有其各自的清洁用具以防止交叉污染。工作结束后应立即对工作区进行清洁，必要时进行消毒及去污染。

应依据所用分析设备和实验过程的要求，制定环境温湿度控制要求并记录。应有温湿度失控时的处理措施并记录。

扩增仪应配备不间断电源（UPS）；

应依据用途（如：RNA检测用水），制定适宜的水质标准（如：应除RNase），并定期检测。

分子检验各工作区域应有明确的标记。进入基因扩增实验室各工作区应按照单一方向进行，即试剂贮存和准备区→样品制备区→扩增区→扩增产物分析区。不同的工作区域宜使用不同的工作服（如不同的颜色）。工作人员离开各工作区域时，不应将工作服带出。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)5.3实验室设备、试剂和耗材5.3.1.1

如从事RNA检测，宜配备－70℃的冷冻设备。需要时，配备高速冷冻离心机。标本制备区使用的一次性加样器吸头应带有滤芯。PCR试验用容器应可密闭，不同工作区域内的设备、物品不能混用。组织标本前处理区的设备通常应包括切片机、裱片机、切片刀、电热恒温箱、脱蜡缸、水化缸及HE染色缸等。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)5.3实验室设备5.3.1.4

应按国家法规要求对强检设备进行检定。应进行外部校准的设备，如果符合检测目的和要求，可按制造商校准程序进行。应至少对分析设备的加样系统、检测系统和温控系统进行校准（适用时）。分析设备和辅助设备的内部校准应符合CNAS-CL31《内部校准要求》。ABI5700FAM™/SYBR®GreenI，VIC®/JOE™，NED™/TAMRA™/Cy3®，ROX™/Texas-Red®和Cy5®应定期对基因扩增仪、加样器、温度计、恒温设备、离心机和生物安全柜等进行校准。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)样本升降温速率：快速模式：－1.6-＋0.8℃/秒

标准模式：±1.6℃/秒加热块最高升降温速率：2.5℃/秒温度范围：4℃-100℃温度精度：设置值/显示温度的±0.25℃(35℃至95℃)(时钟启动后3分钟开始测量)温度均一性：±0.5℃(35℃至95℃)(时钟启动后30秒开始测量)光学系统：五色激发光滤光片，五色发射光滤光片和CCD成像系统安装时已校准染料：SYBR®GreenI，FAM™，VIC™，JOE™，NED™，TAMRA™，ROX™，Texas

Red®，Cy3™，Cy5™。被动参照染料：ROX™15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)5.3实验室设备5.3.1.5设备故障后，应首先分析故障原因，如果设备故障可能影响了方法学性能，故障修复后，可通过以下合适的方式进行相关的检测、验证：(a)可校准的项目实施校准验证，必要时，实施校准；(b)质控物检验；(c)与其他仪器或方法比对，偏差符合附录A.3的要求；(d)以前检验过的样品再检验，偏差符合附录A.5的要求。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)5.3实验室设备5.3.2.1实验室应建立试剂和关键耗材（如离心管、带滤芯的吸头）的验收程序，相应程序中应有明确的判断符合性的方法和质量标准（宜参考附录A）。5.3.2.3

实验室应对新批号或同一批号不同货运号的试剂和关键耗材进行验收，验收试验至少应包括：外观检查：肉眼可看出的，如包装完整性、有效期等；性能验证：通过实验才能判断的，如试剂的核酸提取效率和核酸扩增效率、试剂的批间差异、关键耗材的抑制物等。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)5.3实验室设备

试剂性能验证记录应能反映该批试剂的核酸提取效率和核酸扩增效率。一般情况下，临床实验室在新批号试剂或关键耗材使用前，应验证试剂批间差异和耗材的抑制物，符合附录A.6要求即可视为满足要求。特殊情况下，如实验室怀疑提取试剂有质量问题，可采用凝胶电泳试验比较核酸提取物与核酸标准物确认核酸片段提取的完整性、260nm紫外波长测定确认核酸提取的产率、260nm/280nm比值确认核酸提取的纯度。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)靶核酸提取的质量纯化的靶核酸的完整性：可使用凝胶电泳将样本的核酸提取物与一核酸标准比较测定。核酸提取的产率：可在A260读数测定。核酸纯度：可通过提取物A260/A280比率判定血清或血浆中病原体核酸纯化纯度：采用一种间接的方法，即使用已知病原体含量的溶血和/或脂血标本用待评价试剂提取，然后进行扩增检测，比较所得到的结果。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)用于定性检验的试剂，选择阴性和弱阳性的样品进行试剂批号验证。用于定量检验的试剂，应进行新旧试剂批间的差异验证，方法和要求参照附录A.6要求。耗材的抑制物验收：对关键耗材应检测是否存在核酸扩增的抑制物，方法和要求参照附录A.6要求。5.3实验室设备15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)试剂质检

强调采用患者标本进行试剂质检的意义：PCR实验时两个关键步骤：（1）从标本中提取核酸；（2）提取核酸的扩增。商品化的质控品和标准曲线的结果良好，并非能反映提取试剂的质量。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)推荐的试剂质检方案标本选择：一般选择已用老试剂测定过的患者标本5份，其中一份阴性，其余4份一般要尽可能涵盖高、中、低、临界等浓度差。结果判断：用新试剂重复测定上述5份标本，计算偏差(%)；判断标准(根据实验室室内质控RCV和能力验证允许总误差TEa)；关注临界值和高值！15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)5.5检验过程5.5.1.2

定量检测方法和程序的分析性能验证内容至少应包括精密度、正确度、线性、测量和/或可报告范围、抗干扰能力等。定性检测项目验证内容至少应包括测定下限、特异性、准确度（方法学比较或与金标准比较）、抗干扰能力等。验证结果应经过授权人审核。应使用验证过的核酸抽提和纯化方法，必要时进行核酸定量。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)

对产前检验，在完成分子诊断前应保留备份培养物并跟踪监测实验的准确性；在检验胎儿标本前，应检验父母一方或双方的突变状态，宜由同一实验室检验；如有足够的标本，应从两份不同标本中提取DNA进行双份检验。实验室应了解检验方法受母体细胞污染的影响，应有程序评估并减少这种影响。

应有明确和统一的原位杂交（ISH）阳性信号的标准，并建立本实验室的阳性阈值。组织病理ISH，应结合组织形态进行结果判读，并采用国际通用的评分标准。5.5检验过程15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)5.6检验结果质量的保证5.6.2.1总则应制定室内质量控制程序，定量测定可参照GB/T20468-2006《临床实验室定量测定室内质量控制指南》。质量控制程序中应有针对核酸检测防污染的具体措施。应保留DNA质量评价记录。需要时，应对RNA的质量进行评价，并选择合适的“管家”mRNA作为内对照以评价所提取RNA的完整性，并保留RNA质量评价记录及假阴性率监测记录。对用于基因突变检测的石蜡包埋样品，应有病理医师从组织形态学对肿瘤细胞的存在与否及其数量进行评价，并决定是否需要对肿瘤细胞进行富集。当分子诊断结果与临床和其他实验结果不符时，应记录并分析原因，适当时采取纠正措施。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)5.6检验结果质量的保证5.6.2.2质控物定性检测项目，每次实验应设置阴性、弱阳性和/或阳性质控物。如为基因突变、基因多态性或基因型检测，则应包括最能反映检测情况的突变或基因型样品，每批检测的质控至少应有一种基因突变或基因型。定量检测项目，每次实验应设置阴性、弱阳性和阳性质控物。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)5.6检验结果质量的保证5.6.2.3质控数据质控规则应确保试验的稳定性和检验结果的可靠性。定量检测项目：控图应包括质控结果、质控物名称、浓度、批号和有效期、质控图的中心线和控制界线、分析仪器名称和唯一标识、方法学名称、检验项目名称、试剂和校准物批号、每个数据点的日期和时间、干扰行为的记录、质控人员及审核人员的签字、失控时的分析处理程序和纠正措施等。定性检测项目：阴阳性符合预期。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)5.6检验结果质量的保证5.6.3.2通过与其他实验室（如已获认可的实验室、使用相同检测方法的实验室、使用配套系统的实验室）比对的方式确定检验结果的可接受性时，应满足如下要求：（a）规定比对实验室的选择原则；（b）样品数量：至少5份，包括正常和异常水平或不同常见基因突变或基因型；（c）频率：至少每年2次；（d）判定标准：应有≥80%的结果符合要求。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)5.6检验结果质量的保证5.6.4实验室使用两套及以上检测系统检测同一项目时，应有比对数据表明其检测结果的一致性，比对频次每年至少1次，样品数量不少于20，浓度水平应覆盖测量区间；应定期（至少每年1次，每次至少5份临床样品）进行检验人员的结果比对、考核并记录。比对结果应符合附录A的要求。使用不同生物参考区间的检测系统间不宜进行比对。比对记录应由实验室负责人审核并签字，并应保留至少2年。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)一般核酸提取试剂促使靶核酸从细胞内释出的原理核酸的分离纯化靶核酸提取的质量临床标本及核酸提取中可能存在的抑制和干扰物质核酸样本制备及扩增检测的质控产物检测的质控核酸样本的制备、扩增检测及其质量控制15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)一般核酸提取试剂促使靶核酸从细胞内释出的原理靶核酸可以与宿主细胞整合，核内游离及胞浆内各种构形存在于细胞内，如测定的是病原微生物,则靶核酸存在于细菌、病毒、原虫或真菌细胞内，如果上述细胞破裂,则靶核酸亦可存在于细胞外。一般均使用去垢剂(如Triton-100)裂解细胞，用一种蛋白裂解酶(如蛋白酶K)消化结合于核酸的蛋白质，从而将靶核酸从细胞内释放出来。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)核酸的分离纯化核酸的分离纯化就是要将蛋白、脂类等干扰核酸扩增的物质去除。经典方法硅吸附法磁珠吸附法对于商品核酸提取试剂盒，临床实验室在使用前，必须对其核酸提取纯度和效率进行评价。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)临床标本及核酸提取中可能存在的抑制和干扰物质临床标本中：血清或血浆中的血红素及其代谢产物、痰中酸性多糖和糖蛋白成份、降解靶核酸的核酸酶等。核酸提取中：许多试剂如乙二胺四乙酸(EDTA)、去垢剂如十二烷基硫酸盐(SDS)和chaotrope试剂如异硫氰酸胍和盐酸胍等、酚、氯仿、乙醇等有机溶剂。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)实验室质量控制方案实验室应有室内质控方案和室间质评计划1.室内质量控制标准操作程序；

阳性对照、阴性对照、试剂空白对照、

阳性（临界值）对照

2.实验室应参加EQA。失控结果的分析，纠正措施及其效果评价等。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)质控物的质量保证无商品化质控物时，可采用自制的质控物。质控物的评价：均一性、瓶间差、稳定性等。理想质控物：基质与待测样本一致；所含待测物浓度接近试验的决定性水平；稳定；靶值或预期结果已定；无已知的生物传染危险性；单批可大量获得；价廉。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)定量PCR试验HCV-RNA使用GBW09151标准物质验证准确性，定值1.09±0.27×105IU/ml，实测0.79×105IU/ml，偏差27.5%，超出定值范围，未进行处理（5.6.3）。不符合项案例直接计算：偏差=[（1.09-0.79）105/1.09×105]×100%=27.5%（同不符合项）；但是，取对数计算：log1.09×105=5.0374；log0.79×105=4.8976；偏差=[（5.0374-4.8976）/5.0374]×100%=2.78%。即：直接用IU/ml计算为27.5%（数值较大），取对数后为2.78%（数值较小）。假定一个样品靶值为1×104，如果检测结果为1×103，则（1×103-1×104）/1×104=0.9=90%;如果检测结果为1×105，则（1×105-1×104）/1×104=9=900%。取对数计算：log1×103=3，og1×104=4，log1×105=5，则（4-3）/4=0.25=25%（非90%）,（4-5）/4=-0.25=-25%（非900%）。以上数据说明，如果直接按IU/ml或copies/ml绘制质控图或计算CV%会导致失真，原因是我们通过体外扩增来推算样本中核酸的模板量，但扩增的产物是2的N次方，放大了。这是强调为什么要取对数计算的原因。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)附录A（规范性附录）分子诊断项目分析性能标准A.1应不低于国家标准、行业标准、地方法规要求。A.2自建检测系统不精密度要求：以能力验证/室间质评评价界限（靶值0.4对数值）作为允许总误差（TEa），重复性精密度<3/5TEa；中间精密度<4/5TEa。A.3设备故障修复后，分析系统比对：5份样品，覆盖测量区间，至少4份样品测量结果偏倚<7.5%。A.4实验室内分析系统定期比对：样品数n≥20，浓度应覆盖测量区间，计算回归方程，系统误差应<7.5%。A.5留样再测判断标准：按照项目稳定性要求选取最长期限样品，5个样品，覆盖测量区间，至少4个样品测量结果偏倚<7.5%。A.6试剂批间差异、耗材的抑制物的验收判断标准：选取5个旧批号检测过的样品，覆盖测量区间（包括阴性、临界值、低值、中值和高值），至少4个样品测量结果偏倚<7.5%，其中阴性和临界值样品必须符合预期。A.7没有标准和室间质评要求时，实验室间结果比对合格标准可依据制造商声明的性能标准而制定。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)附录B（规范性附录）分子诊断领域申请认可项目要求B.1以下分子检验项目，每一组项目为完整能力项目，如果实验室开展以下项目组合，则申请该组中任一项目时，应同时申请其它项目（第3系列除外，但须至少申请其中的3项）。同一项目使用不同仪器

/方法报告结果时，全部仪器

/方法均应申请认可。1.肝炎系列：HBV、HCV（实验室仅开展1项者除外）；2.优生优育（TORCH）系列：TXO、RV、CMV、HSV；3.泌尿生殖道性传播疾病病原体系列：CT、NG、UU、HPV、HSV、TP。B.2分子病理检测项目，至少应申请以下任意两个系列，每个系列至少申请一项。同一项目使用不同仪器

/方法报告结果时，全部仪器

/方法均应申请认可。1.突变检测：EGFR、KRAS、BRAF、C-KIT、PDGFRA等；2.扩增系列：Her-2等；3.易位：EWS、Bcl-2、C-MYC、Bcl-6、ALK等；4.基因重排：IGH、IGK、IGL、TCR等。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)第四部分ISO15189对分子诊断设备的性能要求15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)检验过程5.55.5.1检验程序的选择、验证和确认5.5.1.1总则实验室应选择预期用途经过确认的检验程序。每一检验程序的规定要求（性能特征）应与该检验的预期用途相关。首选程序可以是体外诊断医疗器械使用说明中规定的程序，或公认的/权威的教科书、经同行审议过的文章或杂志发表的，或国际公认标准或指南中的，或国家、地区法规中的程序。1.筛查：灵敏度2.确认：特异性3.治疗：定量15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)预期用途：

筛查、确认、定性、定量、诊断和治疗1.筛查：灵敏度高、快速和方便（如POCT）。确认：特异性好。诊断和治疗：定量准确、测量区间宽、检测限（如超敏方法，要关注最低检出限、线性、测量区间等性能参数）。实验室应有项目性能特征的清单！15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)预期用途15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)预期用途ProcleixUltrioAssay*是一种体外核酸定性检测系统，用于筛查来自人类血浆样本中的人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）RNA、丙型肝炎病毒（HCV）RNA和乙型肝炎病毒（HBV）DNA。本试剂盒可用于检测单份的血浆样本，也可用于检测由不超过16个单份的血浆样本等量混合后的人血浆混合物。此检测不能用于协助诊断HIV-1、HCV或HBV感染。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)预期用途15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)INTENDEDUSETheARCHITECTHBsAgassayisachemiluminescentmicroparticleimmunoassay(CMIA)forthequantitative

（定量）determinationofhepatitisBsurfaceantigen(HBsAg)inhumanserumandplasma.

HBsAgassaysareroutinelyusedtoaidinthediagnosis（辅助诊断）

ofsuspectedhepatitisBviral(HBV)infectionandtomonitorthestatusofinfectedindividuals,i.e.,whetherthepatient’sinfectionhasresolvedorthepatienthasbecomeachroniccarrierofthevirus.预期用途15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)预期用途15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)INTENDEDUSETheARCHITECTHBsAgQualitativeIIassayisachemiluminescentmicroparticleimmunoassay(CMIA)forthequalitativedetection

ofhepatitisBsurfaceantigen(HBsAg)inhumanserumandplasma.TheARCHITECTHBsAgQualitativeIIassayisintendedtobeusedasanaidinthediagnosisofHBVinfectionandasascreeningtestfordonatedbloodandplasma.HBsAgassaysareusedtoidentifypersonsinfectedwithHBVandtopreventtransmissionofthevirusbybloodandbloodproductsaswellastomonitorthestatusofinfectedindividualsincombinationwithotherhepatitisBserologicalmarkers.Inmostcountries,testingforHBsAgispartoftheantenatalscreeningprogramtoidentifyHBVinfectedmothersandtopreventperinatalHBVinfectionbysubsequentimmunization.预期用途15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)预期用途15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)预期用途INTENDEDUSEAxSYMAnti-HCV(hepatitisCvirus)isaMicroparticleEnzymeImmunoassay(MEIA)forthequalitativedetectionofanti-HCVIgGtoHCVrecombinantproteinsinhumanserumorplasma(potassiumEDTA,sodiumEDTA,sodiumheparin,lithiumheparin,sodiumcitrateandpotassiumoxalate).Assayresults,inconjunctionwithotherlaboratoryresultsandclinicalinformation,maybeusedtoprovidepresumptiveevidenceofinfectionwithHCVvirus(stateofinfectionorassociateddiseasenotdetermined)inpersonswithsignsorsymptomsofhepatitisandinpersonsatriskforhepatitisCinfection.WARNING:Notintendedforuseinscreening•blood,plasma,ortissuedonors.TheeffectivenessofAxSYMAnti-HCVforuseinscreeningblood,plasma,ortissuedonorshasnotbeenestablished.•Assayperformancecharacteristicshavenotbeenestablishedforprenatalscreeningortestingapediatricpopulationlessthan10yearsofage.15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)检验程序验证(Verification)

未经修改而使用的已确认的检验程序在常规使用前，应经过实验室的独立验证。应从制造商或方法开发者处获得相关信息，以确定检验程序的性能特征。进行的独立验证，应通过获取客观的证据（以性能特征形式）证实检验程序的性能与其声明相符。验证过程证实的检验程序的性能指标，应与检验结果的预期用途相关。应将验证程序制定成文件，并记录验证结果。验证结果应由适当的授权人员审核并记录审核过程。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)实验室应对以下来源的检验程序进行确认：（a）非标方法；（b）实验室设计或制定的方法；（c）超出预期范围使用的标准方法；（d）修改过的确认方法。方法确认应尽可能全面，并通过客观的证据（以性能特征形式）证实满足检验预期用途的特定要求。应将确认程序制定成文件，并记录确认结果。确认结果应由授权人员审核并记录审核过程。当对确认过的检验程序进行变更时，应将改变所引起的影响形成文件，适当时，应重新进行确认。检验程序的确认(Validation)

15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)测量正确度(measurementtrueness)：测量准确度(measurementaccuracy)：测量精密度（含测量重复性和测量中间精密度,measurementprecision，

includingmeasurementrepeatabilityandmeasurementintermediateprecision）：测量不确定度(measurementuncertainty)：分析特异度（含干扰物,analyticalspecificity,includinginterferingsubstances）；分析灵敏度(analyticalsensitivity)：检出限(detectionlimit)：定量限(quantitationlimit)：测量区间(measuringinterval)：诊断特异度(diagnosticspecificity)：诊断灵敏度(diagnosticsensitivity)：15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)测量正确度(measurementtrueness)：无穷多次重复测量所得量值的平均值与一个参考量值间的一致程度。注1：测量正确度不是一个量，不能用数值表示。注2：测量正确度与系统测量误差有关，与随机测量误差无关。注3：术语“测量正确度”不能用“测量准确度”表示。反之亦然。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)测量准确度(measurementaccuracy)：被测量的测得值与其真值间的一致程度。注1：概念“测量准确度”不是一个量，不给出有数字的量值。当测量提供较小的测量误差时就说该测量是较准确的。注2：术语“测量准确度”不应与“测量正确度”、“测量精密度”相混淆，尽管它与这两个概念有关。注3：测量准确度有时被理解为赋予被测量的测得值之间的一致程度。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)正确度验证方法--溯源性方法类：1、决定性方法：与决定性方法检测结果进行比较而建立；2、参考方法：与参考方法检测结果进行比较而建立；3、常规方法：与已建立可比性的方法进行结果比较而验证。物质类：1、标准物质：检测有证书说明其材料特性的适当参考物质；2、校准品：由供应商或制造商提供溯源性，应有关于试剂、程序或检验系统溯源性的声明文件；3、质控品：经PT，EQA，CAP等活动使用过质控品。15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)第五部分ISO15189对分子诊断检测的系统完整性要求15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)

ABIViiA™7ABI7500LC480CFX96Mx3000pSlan96P激发光源卤钨灯卤钨灯氙灯LED卤钨灯LED检测器CCD成像系统CCD成像系统CCD成像系统光敏二极管光电倍增管光电传感器检测通道6个5个6个5个4-5个4个激发波长450-670nm400-660nm430-630nm450-730nm350-750nm通道1：470nm通道2：530nm通道3：580nm通道4：630nm检测波长500-720nm500-660nm430-630nm450-730nm350-750nm通道1：510nm；通道2：565nm；通道3：620nm；通道4：665nm支持的荧光染料FAM™、SYBR®、SYTO®9(MeltDoctor™)、Fluorescein、

SYPRO®Orange、VIC®、JOE™、TET™、HEX™、TAMRA™、NED™、BODIPY®TMR-X、ROX™、TexasRed®、LIZ™、AlexaFluor®、Joda-4FAM/SYBRGreen、VIC/JOE、NED/TAMRA/Cy3、ROX/TexasRed、Cy5等，软件支持ROX校正去除误差LightCyclerCyan500、YBRGreenI、FAM、HEX,、VIC、LightCyclerRed610、LightCyclerRed640、Cy5FAM、SYBR,、HEX/JOE、ROX、Cy5、TAMRA等SYBRGreenI、FAM、TexasRed、ROX、TET、Cy3、Cy5、HEX、JOE、VIC、TAMRA、ALEXAFluor350等通道1：FAM/SYBRgreenI；

通道2：VIC/HEX/TET/JOE；通道3：TexasRed/ROX；通道4：Cy5国内外主流荧光定量PCR仪器情况简介15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)国内市场上主要使用的乙肝试剂情况

圣湘罗氏达安科华凯杰方法学一步法磁珠法磁珠法煮沸法柱提法煮沸法煮沸法目的基因检测荧光FAMFAMFAMFAMFAMFAMFAM内标检测荧光HEXHEXVIC无VIC无VIC灵敏度（IU/ml）1001019500100500500线性范围（IU/ml）500~5×10920~2×10920~1.7×1081×103~1×108250~5×108500~1×1081×103~5×107重复性好好好较差一般较差较差抗干扰能力较强强较强一般一般一般一般ROX荧光校正有有无无无无有操作简便性简便一般自动化，复杂一般复杂一般一般15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)

圣湘达安科华凯杰方法学磁珠法酚-氯仿抽提法柱提法柱提法目的基因检测荧光FAMFAMFAMFAM内标检测荧光HEX无无VIC灵敏度（IU/ml）25定性检测5001000线性范围（IU/ml）50~1×108定性检测1×103~1×1071×103~1×107重复性好较差一般一般抗干扰能力强弱一般一般ROX荧光校正有无无有操作简便性简便复杂复杂复杂国内市场上主要使用的丙肝试剂情况15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)医学实验室量值溯源的要求CNAS承认的检定证书/校准报告包括：（1）国家计量主管部门承认的；（2）卫生医药行业主管部门承认的；（3）CNAS认可或互认的校准机构出具的；（4）设备制造商提供的。CNAS承认的标准物质/标准样品包括：（国家标准物质网）（1）国家计量和标准化主管部门承认的；（2）卫生医药行业主管部门承认的；（3）CNAS认可或互认的标准物质/标准样品生产者（RMP）提供的；（4）设备制造商提供的。实验室应提供溯源到更高等级、国家或国际计量基准/参考方法的有效证据。当以上溯源方式不可行或不适用时，评审组应要求实验室提供确保检验结果可靠性的相关证据。来自2012年12月1日B版“医学实验室质量和能力认可评审工作指导书”15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)医学实验室量值溯源的要求医学实验室测量结果溯源性的要求：评审组应评价医学实验室测量结果的溯源性满足CNAS-CL06：2014《测量结果的溯源性要求》的情况，并参考CNAS-GL18《量值溯源要求在医学测量领域的实施指南》。应要求实验室提供溯源到更高等级、国家或国际计量基准/参考方法的有效证据。当溯源不可行或不适用时，评审组应要求实验室提供确保检验结果可靠性的相关证据。来自2014年5月1日B版第1次修订“医学实验室质量和能力认可评审工作指导书”15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题(发送版)根据计量可追溯至SI的可能性及测量程序和校准品的不同计量水平的可用性，有如下五种典型的计量溯源链的上端。（1)测量结果可以在计量上溯源至SI的量。有可用的一级参考测量程序和一个或多个（经承认的）一级参考物质（用作校准品）。达到这样水平的有约25～30个类型的量，具有良好确定的组分，如：一些电解质、代谢物、甾体激素和一些甲状腺激素。在医学实验室提供的常规结果中，这些量占较大部分。（2）有可用的国际约定的参考测量