备课素材：微生物计数 高二下学期生物人教版选择性必修3

微生物计数2019版高中生物学选择性必修二介绍了酵母细胞血细胞计数板显微镜直接计数法：2019版高中生物学选择性必修三介绍了微生物的平板计数：那么，除此之外，还有其它的计数方法吗？微生物个体细胞的生长难以测定,而且生长与繁殖是交替进行的,因此，微生物的生长繁殖一般不是依据个体细胞的大小,而是以群体细胞数目的增加作为指标的。测定微生物细胞数量的方法很多,主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法、光电比浊法、最大可能数(MPN)法、膜过滤法等。测定酵母细胞数或霉菌孢子数常采用在显微镜下直接进行计数的方法,该计数方法被广泛应用于酒精、啤酒和白酒等的工业化生产中。平板菌落计数法被广泛应用于食品、饮品、水质和活菌制剂等的含菌指数或污染程度的检测。该计数方法又称平板活菌计数法,其最大优点是可以获得活菌数的信息。但是,该计数法操作过程较繁,需要培养一定时间才有结果,且测定结果易受多种因素的影响。光电比浊计数法是采用光电比色计或分光光度计,测定菌悬液的光密度或透光度,其优点是简便迅速,可以连续测定,适合于自动控制。但该法除了受菌体浓度影响外,还受细胞形态、大小、培养液成分及所采用光波长等因索的影响。(一)显微镜直接计数法该法是将酵母菌或霉菌孢子悬液,放在血球计数器载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下直接进行计数，是一种常用的微生物计数方法。Thoma血球计数板是一块特制的厚载玻片,玻片的中间部分刻有四条沟槽,形成三个平台。中间的平台较宽且比两边的平台略低,其中央刻有一小方格网的计数区,计数区的面积为l平方毫米。另一种计数器中间平台的中间又被一短的横沟槽分为两半,成为两个小平台,每个小平台上面各刻有一个计数区,共有两个计数区。当盖上特定盖玻片时,盖玻片与计数室的空间厚度正好是0.l毫米,这样计数室的体积为0.l立方毫米,即0.000l毫升。计数室有两种刻度形式,一种是全区分16大格,每大格再分25小格,一共400小格。另一种是全区分25大格,每大格再分16小格,也是400小格。计数时,可将酵母菌液(或孢子悬液)充满计数室,在显微镜下按规定数4个或5个大格的总细胞数,再求得每小格内平均的细胞数,即可计算出每ml培养液中的细胞总数。每ml菌液酵母菌细胞数=每小格平均酵母细胞数×400×10000×稀释倍数。(二)平板菌落计数法该法的基本原理是：将待测含菌样品经适当稀释,使其中的微生物充分分散成单个细胞,然后取一定量的稀释样品液,接种到平板上。经过一定时间培养后,由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的单菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个活菌。最后统计菌落数,根据其稀释倍数和取样量,换算出单位样品中所含的活菌数。实际上，由于待测样品不易完全分散成单个细胞,故所形成的菌落并非都是单菌落,有一部分是由2个以上的细胞长成的,因此平板菌落计数的结果会比实际偏低。现在已采用菌落形成单位(cfu)来表示样品的活菌含量。(三)光电比浊计数法光电比浊计数法的原理是：光线透过菌悬液时,其透光率与细胞浓度成反比,而光密度与细胞浓度成正比。透光率或光密度可以由光电池精确测出(光波通常选择在400～700nm之间),因此,可用一系列已知菌