抗肺癌合剂对Lewis肺癌的抑制作用及VEGF表达的影响

抗肺癌合剂对Lewis肺癌的抑制作用及VEGF表达的影响抗肺癌合剂对Lewis肺癌的抑制作用及VEGF表达的影响

：吴敏华，周维顺，谢长生

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抗肺癌合剂对Lewis肺癌的抑制作用及VEGF表达的影响

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抗肺癌合剂（白花蛇舌草、半枝莲、猫人参、猫爪草、野荞麦根、生黄芪、北沙参等16味中药组成）水提取至高剂量组浓度为每毫升含生药3g，4℃冰箱保存备用。中剂量、低剂量组临用时由高剂量组用蒸馏水稀释至浓度为每毫升分别含生药1.5g和0.75g。注射用环磷酰胺（江苏恒瑞医药股份有限公司，200mg/支，批号：05081821）用时以生理盐水临时配制成浓度为2mg/ml。小鼠抗鼠VEGF单克隆抗体、PV6001/6002PowerVisionTMTwoStep免疫组化染色试剂盒、ZLI9032浓缩型DAB试剂盒（购自北京中杉金桥

生物技术有限公司）。

1.3试验造模

参照文献［1］造模，将接种Lewis肺癌的瘤源小鼠脱颈椎处死，消毒后置于超净台上，剪开小鼠腋下皮肤，取新奇肿瘤组织并剪成约1mm3碎块，置于匀浆器中研磨，并以200目滤膜过滤到无菌烧杯内，加生理盐水稀释成1:3的瘤细胞悬液。用移液枪吸取细胞悬液约20μl置于无菌试管内，用生理盐水稀释100倍，加0.2%台盼兰染色后，吸取少许置于细胞计数板上，放于低倍显微镜下观看，计算活细胞数。以生理盐水稀释，调整细胞悬液浓度为1×107个瘤细胞/ml。50只C57BL/6小鼠右腋皮下各接种瘤细胞悬液0.2ml。接种24h后，随机分成5组：模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、环磷酰胺组，每组各10只。

1.4给药方法

造模后第2天开头给药，给药剂量参照陈奇推举的药量换算法［2］，中药高、中、低剂量组每天分别予相当于生药120g/kg、60g/kg和30g/kg的抗肺癌合剂灌胃；模型组每天以生理盐水灌胃；灌胃容积为0.4ml/10g，均连续灌胃14d。CTX组隔天腹腔注射1次CTX，剂量为20mg/kg/天［3］，共6次。

1.5观看抑瘤率及瘤组织VEGF表达

各组小鼠分别于试验第15d处死，取瘤组织称重，依据公式：抑瘤率%=（C-T）/C×100%（T为试验组的平均瘤重，C为模型对比组的平均瘤重），计算抑瘤率。SP二步法制备肿瘤组织免疫组化病理切片。参考Kraan［4］等方法对免疫组化染色切片细胞浆表达的VEGF进行定量分析。采纳LeicaQWinStandardV2.8自动图象分析系统，以VEGF阳性表达的平均积分光密度作为统计指标［5］。积分光密度＝平均光密度×阳性面积。

1.6统计学方法

用SPSS13.0统计软件分析处理。计量资料数据用均数±标准差(x±s)表示。多组间均数的比较用方差分析，每两组间均数比较采纳q检验。以P0.05为显著性差异，P0.01为特别显著性差异。

2结果

2.1平均瘤重和抑瘤率

试验中，1只试验小鼠死于CTX毒性反应，1只死于灌胃操作。各组小鼠平均瘤重和抑瘤率如表1。由表1可见，中药高剂量组抑瘤率达29.8%，平均瘤重与模型对比组相比有显著性差异(P0.05)；中药低、中剂量组平均瘤重与模型组无显著性差异（P0.05）。表1各组小鼠平均瘤重(x±s)和抑瘤率（略）

2.2肿瘤组织VEGF表达

各组小鼠接种部位瘤组织VEGF阳性表达的平均积分光密度如表2。从表2可见在肿瘤组织VEGF表达的平均积分光密度上，中药高剂量组与模型对比组比较有显著性差异（P0.05）；中药低、中剂量组与模型组比较无显著性差异(P0.05)。表2各组小鼠肿瘤组织VEGF表达的平均积分光密度(略)

3争论

肺癌属于中医“肺积”、“息贲”等范畴。气（气滞）、痰（痰凝）、瘀（血瘀）、毒（毒聚）、虚（正气亏虚）是其基本病因。肺癌患者多表现为气阴两虚、邪毒内聚，临床多以清热解毒、益气养阴为主要大法辨证论治。抗肺癌合剂由猫人参、猫爪草、半枝莲、蛇舌草、野荞麦根、生黄芪、女贞子、南沙参、北沙参、灵芝、茯苓、薏苡仁等

抗肺癌合剂对Lewis肺癌的抑制作用及VEGF表达的影响

16味中药组成。全方配伍精良，以清热解毒治其实，益气养阴治其虚，辅以健脾和胃、顾护胃气，祛邪而不伤正，标本兼顾，体现中医辨证论治的原则，在临床应用中收效良好。

VEGF是1989年Ferrara等［6］从牛垂体滤泡星状细胞的体外培育液中纯化出来并命名的，它是肿瘤血管生成过程中最关键的调控因素［7］。当VEGF信号被抑制时，肿瘤生长将被破坏［8］。因此，VEGF的测定在推断预后、筛选转移高危病例、指导治疗及疗效推断方面具有重要价值。

本试验表明，抗肺癌合剂能抑制肿瘤的发生和生长，其抗癌力量与药物剂量呈肯定的相关性，其机制可能与下调肿瘤组织VEGF的表达有关。本试验结果与临床疗效有较好的全都性，为抗肺癌合剂的临床应用供应了试验依据，也为进一步开发该复方供应了试验基础。但本试验中，抗肺癌合剂各剂量组只有