细胞工程研究常用设备和技术详解演示文稿

细胞工程研究常用设备和技术详解演示文稿1本文档共51页；当前第1页；编辑于星期日\22点25分（优选）细胞工程研究常用设备和技术2本文档共51页；当前第2页；编辑于星期日\22点25分3本文档共51页；当前第3页；编辑于星期日\22点25分4本文档共51页；当前第4页；编辑于星期日\22点25分一、基本实验室准备室：准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。要求宽敞明亮，通风条件好。接种室：接种室的功能是进行无菌操作。要求封闭性好，干燥清洁，能较长时间保持无菌。房间一般不宜过大，其规模根据实验需要而定。接种室除了出入口和通气口外，其余应密闭。培养室：培养室的功能是对离体材料进行控制培养。其首要要求是要能控制光照和温度，其次为防止微生物感染，培养室应保持干燥和清洁。5本文档共51页；当前第5页；编辑于星期日\22点25分6本文档共51页；当前第6页；编辑于星期日\22点25分7本文档共51页；当前第7页；编辑于星期日\22点25分基本实验室-培养室8本文档共51页；当前第8页；编辑于星期日\22点25分二、辅助实验室细胞学实验室：其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。摄影室及暗室：其功能是进行培养材料的摄影记录和胶片冲印。在有条件的情况下可建立此实验室。生化分析室：在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。细胞工程实验室布局的其基本要求是：便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察。9本文档共51页；当前第9页；编辑于星期日\22点25分第二节实验室常用仪器设备一、水纯化装置用于细胞工程的培养基和其他溶液一般都要用双蒸水或三次蒸馏水来配置。实验室常用的纯水装置：不锈钢蒸馏水器、石英自动纯水蒸馏器、超纯水装置。10本文档共51页；当前第10页；编辑于星期日\22点25分不锈钢蒸馏水器11本文档共51页；当前第11页；编辑于星期日\22点25分12本文档共51页；当前第12页；编辑于星期日\22点25分主要由多个过滤部件组成。水先经过预过滤层除去粗杂质，然后经过有机层、去离子层、去热原层，再经过0.22微米滤膜过滤除菌，得到超纯水。超纯水装置13本文档共51页；当前第13页；编辑于星期日\22点25分二、超声波清洗器超声波清洗功能主要是利用超声波在液体中的“空化”作用，使黏附在物体表面的各类污物剥落，同时超声波在液体中又能加速溶解作用和乳化作用，再加上合适的清洗剂配合，就可以达到清洗目的。超声波清洗效果好、速度快，尤其对于采用一般常规清洗方法难于达到清洁度要求，以及手工清洗解决不了的缝隙、小孔、内腔等。14本文档共51页；当前第14页；编辑于星期日\22点25分15本文档共51页；当前第15页；编辑于星期日\22点25分三、蒸汽压力消毒器实验室中最常用的灭菌设备就是高压蒸汽灭菌器。常见的有立式、卧式和手提式几种。基本操作步骤：向锅内注水到规定刻度，注意保持导气管通畅；将待灭菌物放入锅内，盖紧锅盖；通电加热，排放冷气；加热至压力额定值，开始计时；计时结束，切断电源，自然降压至接近零；灭菌器盖微开5min，取出灭菌物；16本文档共51页；当前第16页；编辑于星期日\22点25分17本文档共51页；当前第17页；编辑于星期日\22点25分18本文档共51页；当前第18页；编辑于星期日\22点25分19本文档共51页；当前第19页；编辑于星期日\22点25分20本文档共51页；当前第20页；编辑于星期日\22点25分四、干热灭菌干燥箱用于器械和玻璃器皿的干热灭菌或烘干。使用方法如下：将待灭菌物放入箱内，注意不要放得太挤，以利空气流通；关箱门，接通电源，打开开关，旋动恒温调节器至指定温度。若需鼓风，则应与升温同时开始，不能先升温后鼓风，以免导致起火或玻璃器皿破裂；温度上升至指定温度后，维持所需的时间；灭菌或烘干完毕后切断电源，待温度降至70℃以下时，可开箱取物；21本文档共51页；当前第21页；编辑于星期日\22点25分五、过滤除菌装置1.蔡氏滤器使用混合纤维素酯微孔滤膜，孔径有0.22微米、0.45微米等不同规格。蔡氏滤器可分为抽滤式（负压，抽真空）和加压式（正压，氮气加压）两种。2.针头式滤器针头式加压塑料小滤器的上下部件为螺旋式连接，中间夹一层微孔滤膜（常用孔径为0.22微米），滤器上部的进液口可直接接在注射器上，液体经注射器加压进入滤器，经过膜过滤除菌后，由滤器下部的出液口流出。22本文档共51页；当前第22页；编辑于星期日\22点25分23本文档共51页；当前第23页；编辑于星期日\22点25分六、超净工作台超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气通过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。24本文档共51页；当前第24页；编辑于星期日\22点25分超净工作台是以空气过滤去除杂菌孢子和灰尘颗粒来达到空气净化目的的装置，主要由鼓风机、滤板、操作台和照明灯组成。单人和双人，垂直和平流；75%酒精擦拭超净台，放入器械，开紫外灯30min，关闭紫外灯，点燃酒精灯在下火焰方进行操作。25本文档共51页；当前第25页；编辑于星期日\22点25分26本文档共51页；当前第26页；编辑于星期日\22点25分生物安全柜是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。

七、生物安全柜27本文档共51页；当前第27页；编辑于星期日\22点25分根据生物安全防护水平的差异，生物安全柜可分为一级、二级和三级三种类型。一级生物安全柜可保护工作人员和环境而不保护样品。二级生物安全柜是目前应用最为广泛的柜型。二级生物安全柜依照入口气流风速、排气方式和循环方式可分为4个级别：A1型，A2型，B1型和B2型。所有的二级生物安全柜都可提供工作人员、环境和产品的保护。三级生物安全柜是为生物安全防护等级为4级实验室而设计的，柜体完全气密，工作人员通过连接在柜体的手套进行操作，俗称手套箱(Golvebox)，试验品通过双门的传递箱进出安全柜以确保不受污染，适用于高风险的生物试验，如进行SARS、埃博拉病毒实验等。28本文档共51页；当前第28页；编辑于星期日\22点25分传染病的传染性和危害性并不相同，传染病原分为四个危害等级。第一级危害群微生物：与人类成人健康和疾病无关；第二级危害群微生物：引发人类患病，但很少出现严重情况，通常有预防及治疗方法；第三级危害群微生物：引发人类患病，并出现严重或致死情况，但可能有预防和治疗方法；第四级危害群微生物：引发人类患病，并出现严重或致死情况，但通常无预防与治疗方法，诸如炭疽杆菌、霍乱弧菌、埃博拉病毒、天花病毒等。29本文档共51页；当前第29页；编辑于星期日\22点25分30本文档共51页；当前第30页；编辑于星期日\22点25分31本文档共51页；当前第31页；编辑于星期日\22点25分32本文档共51页；当前第32页；编辑于星期日\22点25分八、培养箱细胞在离体培养时，都需要一定的温度，尤其是哺乳动物细胞的要求较高，在多数情况下温度变化不能超过±0.5℃。动物细胞培养恒温培养箱包括能控制和调节温度的一般培养箱为增加了湿度和CO2调节的二氧化碳培养箱。植物细胞培养增加了照明条件的光照培养箱、人工气候箱。33本文档共51页；当前第33页；编辑于星期日\22点25分34本文档共51页；当前第34页；编辑于星期日\22点25分35本文档共51页；当前第35页；编辑于星期日\22点25分36本文档共51页；当前第36页；编辑于星期日\22点25分九、显微镜体视显微镜（解剖镜）：用于观察和剥离较小器官和组织，也可用来观察愈伤组织的生长和发育。37本文档共51页；当前第37页；编辑于星期日\22点25分透射显微镜：物镜在载物台上方，用于观察切片、压片、涂片等。38本文档共51页；当前第38页；编辑于星期日\22点25分倒置显微镜：物镜在载物台下方，可以从培养皿、培养瓶或摇瓶的下方观察培养物，用来实时观察活细胞的生长情况。39本文档共51页；当前第39页；编辑于星期日\22点25分显微操作系统：用于对细胞进行显微操作，如细胞核移植、染色体操作、显微注射、胚胎切割等工作。40本文档共51页；当前第40页；编辑于星期日\22点25分第三节基本技术1．洗涤液铬酸洗涤液是用重铬酸钾(K2Cr2O7)与硫酸(H2SO4)配制而成，可根据需要配制成弱、中、强三种。一、洗涤技术41本文档共51页；当前第41页；编辑于星期日\22点25分弱用重铬酸钾50g加入蒸馏水1L，加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸90ml。中

用重铬酸钾50g加入蒸馏水100ml，加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸875ml。强

浓硫酸加热的同时缓慢加入磨碎的重铬酸钾，直到重铬酸钾达到饱和为止。一般浓硫酸1L加入重铬酸钾50g。42本文档共51页；当前第42页；编辑于星期日\22点25分玻璃器皿洗涤塑料用品洗涤金属用品洗涤2．洗涤方法不同材料的器械，洗涤方法不同。43本文档共51页；当前第43页；编辑于星期日\22点25分玻璃器皿洗涤新的玻璃器皿上附有游离的碱性物质，其洗涤方法是用1%的HCl溶液浸泡24h，再用洗涤剂洗刷，然后用清水反复冲洗，最后用蒸馏水冲洗1～2次，干燥后即可使用。已使用过的试管、烧杯、三角瓶等，先将器皿中的残渣除去，用清水洗净，再用洗涤剂洗刷，用清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1～2次。用过的吸管、滴管等内径狭小的玻璃制品，需先放入铬酸洗涤液中浸泡两小时以上，取出后经流水冲洗半小时左右，再用蒸馏水冲洗1～2次，然后烘干或晾干。44本文档共51页；当前第44页；编辑于星期日\22点25分载玻片和盖玻片容易破碎，洗涤时不宜用力擦洗，其洗涤方法是先用清水冲洗，然后放入铬酸洗涤液中浸泡几小时或用稀铬酸洗涤液煮沸半小时，取出后用清水冲洗干净，将其储藏在95%的酒精中。塑料用品洗涤：塑料用品一般用合成洗涤剂洗涤，因其附着力较强，因此冲洗时必须反复多次，最后用蒸馏水冲洗。金属用品洗涤：金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤，需要清洗时，一般用酒精擦洗，并保持干燥。45本文档共51页；当前第45页；编辑于星期日\22点25分二、灭菌和消毒技术物理方法：干热、湿热、射线处理、物理除菌过滤、离心沉淀等；化学方法：消毒剂、抗菌素灭菌；培养基灭菌、玻璃器皿灭菌、金属用具灭菌、接种室灭菌、外植体灭菌。46本文档共51页；当前第46页；编辑于星期日\22点25分几种常用消毒剂效果比较47本文档共51页；当前第47页；编辑于星期日\22点25分第四节培养基及其配置用于植物离体培养的培养基至少包括无机盐；有机化合物；生长调节剂三大基本组成以及根据不同需要的其它附加成分。48本文档共51页；当前第48页；编辑于星期日\22点25分一、无机盐类必需元素在体内的生理作用主要包括四个方面：组成各种化合物，参与机体的建造，成为结构物质；构成一些特殊的生理活性物质，如植物激素、酶以及酶的活化剂，参与植物的代谢活动；元素之间相互协调，以维持离子浓度平衡、胶体稳定、电荷平衡等生物电化学方面的作用；发育过程中，影响组织器官的建成；49本文档共51页；当前第49页；编辑于星期日\22点25分二、有机化合物糖类既可作为C源，又可维持培养基的渗透压。植物组织培养中常使用蔗糖，在某些特殊培养类型中，亦使用麦芽糖、葡萄糖、果糖、纤维二糖、甘露糖等。维生素为了使培养物生长得更好，根据培养目的不同常在培养基中添加一种或多种维生素。常用的维生素包括VB1（盐酸硫胺素）、VB6（盐酸吡哆醇）、Vpp(烟酸)、VH(生物素)、VBc（叶酸）、VB5（泛酸钙）等。50本文档共51页；