第九章核酸类药物的分析演示文稿

第九章核酸类药物的分析演示文稿本文档共56页；当前第1页；编辑于星期六\10点25分优选第九章核酸类药物的分析本文档共56页；当前第2页；编辑于星期六\10点25分第一节概述结构和分类理化性质本文档共56页；当前第3页；编辑于星期六\10点25分什么是核酸？1869年核酸最早分离自外科绷带脓细胞的细胞核，当时发现这种物质含磷量之高超过当时发现的任何一种有机物，并且含有很强的酸性，故得名核酸。1909年其组成被研究清楚，1944年生物功能初步澄清，在X射线衍射技术支持下1953年结构澄清。核酸是脱氧核糖核酸（DNA）与核糖核酸（RNA）的通称。本文档共56页；当前第4页；编辑于星期六\10点25分核酸核苷酸磷酸核苷戊糖碱基水解一、结构和分类本文档共56页；当前第5页；编辑于星期六\10点25分核酸代表戊糖，对DNA而言为脱氧核糖，对RNA而言为核糖；

代表碱基

代表磷酸基核苷酸本文档共56页；当前第6页；编辑于星期六\10点25分核苷酸磷酸碱基戊糖本文档共56页；当前第7页；编辑于星期六\10点25分H2OH2O碱基磷酸戊糖糖苷键酯键本文档共56页；当前第8页；编辑于星期六\10点25分核苷酸碱基连接（糖苷键）酯键（对DNA为H）1`2`3`4`5`本文档共56页；当前第9页；编辑于星期六\10点25分戊糖核糖(inRNA)2｀－脱氧核糖(inDNA)本文档共56页；当前第10页；编辑于星期六\10点25分核苷本文档共56页；当前第11页；编辑于星期六\10点25分DNA&RNA本文档共56页；当前第12页；编辑于星期六\10点25分碱基RNADNA

嘧啶环

嘌呤环尿嘧啶U胸腺嘧啶T胞嘧啶C鸟嘌呤G腺嘌呤A本文档共56页；当前第13页；编辑于星期六\10点25分类别DNARNA基本单位脱氧核糖核苷酸核糖核苷酸核苷酸腺嘌呤脱氧核苷酸

鸟嘌呤脱氧核苷酸

胞嘧啶脱氧核苷酸

胸腺嘧啶脱氧核苷酸腺嘌呤核苷酸

鸟嘌呤核苷酸

胞嘧啶核苷酸

尿嘧啶核苷酸碱基腺嘌呤（A)

鸟嘌呤（G)

胞嘧啶（C)

胸腺嘧啶（T)腺嘌呤（A)

鸟嘌呤（G)

胞嘧啶（C)

尿嘧啶（U）五碳糖脱氧核糖核糖酸磷酸磷酸本文档共56页；当前第14页；编辑于星期六\10点25分稀有碱基嘌呤——次黄嘌呤、1-甲基次黄嘌呤、N2、N2-二甲基鸟嘌呤。嘧啶——5-甲基胞嘧啶、5-羟甲基胞嘧啶、二氢尿嘧啶、4-巯尿嘧啶都是基本碱基的化学修饰型。本文档共56页；当前第15页；编辑于星期六\10点25分鸟嘌呤次黄嘌呤1-甲基次黄嘌呤本文档共56页；当前第16页；编辑于星期六\10点25分二、理化性质（一）两性性质：磷酸基；碱基（通常：酸性）

pH影响碱基间氢键稳定：DNApH4.0~11.0（二）水解性：微溶于水，不溶于一般的有机溶剂（三）UV：λmax=260nm蛋白质280nmA260/A280纯DNA＞1.8

纯RNA应达到2.0

混有杂蛋白比值降低本文档共56页；当前第17页；编辑于星期六\10点25分本文档共56页；当前第18页；编辑于星期六\10点25分（四）变性和复性1.变性：在某些理化因素影响下，DNA双螺旋区的氢键断裂和碱基堆积力破坏，有规律的双螺旋结构变成单链无规律的“线团”，但不发生共价键的断裂，这过程称之。变性原因：高温（一般＞75℃）、强氧化剂、强酸、碱、尿素等；机理：双链间氢键断开，成为两条单链（DNA双螺旋二级结构的破坏，生物活性的丧失）特征性Tm---DNA的变性温度82~95℃本文档共56页；当前第19页；编辑于星期六\10点25分本文档共56页；当前第20页；编辑于星期六\10点25分2.复性一定条件下，去除变性因素后，核酸恢复二级结构及生物活性的现象；通常使用热复性。（退火）高温变性缓慢冷却热复性急速冷却复性失败热复性在基因测序中被广泛应用本文档共56页；当前第21页；编辑于星期六\10点25分本文档共56页；当前第22页；编辑于星期六\10点25分（五）颜色反应苔黑酚反应:RNA中核糖+浓HCl（浓H2SO4）→糠醛+苔黑酚→深绿色化合物（λmax=670nm）二苯胺反应:DNA中脱氧核糖+浓H2SO4→5-羟基-4-羰基戊醛+二苯胺→蓝色化合物（λmax=595nm）水解后磷酸：磷酸+钼酸→磷钼酸+还原剂（维生素C、氯化亚锡等）→钼蓝（λmax=660nm）Fe3+脱水本文档共56页；当前第23页；编辑于星期六\10点25分第二节嘌呤类核苷酸药物分析嘌呤碱（腺嘌呤、鸟嘌呤）戊糖磷酸本文档共56页；当前第24页；编辑于星期六\10点25分一、鉴别戊糖鉴别嘌呤鉴别磷酸鉴别特征吸收光谱熔点测定本文档共56页；当前第25页；编辑于星期六\10点25分（一）戊糖的鉴别苔黑酚反应（地衣酚反应）---凡核糖均有此反应试剂：浓盐酸，苔黑酚试剂，三氯化铁（催化剂）现象：鲜绿色二苯胺反应DNA试剂：浓硫酸，二苯胺现象：蓝色与间苯三酚反应（核苷酸中的戊糖）现象：玫瑰红色本文档共56页；当前第26页；编辑于星期六\10点25分（二）嘌呤的鉴别+氨制硝酸银→白色↓→红棕色（遇光）（嘌呤碱基的特殊鉴别反应）本文档共56页；当前第27页；编辑于星期六\10点25分（三）磷酸的鉴别有机磷→无机磷+钼酸→磷钼酸+还原剂→钼蓝本文档共56页；当前第28页；编辑于星期六\10点25分（四）特征吸收光谱UV：嘌呤环，嘧啶环IR本文档共56页；当前第29页；编辑于星期六\10点25分（五）熔点测定本文档共56页；当前第30页；编辑于星期六\10点25分二、检查一般检查酸度，水分，无机盐，有机物，溶液的颜色和澄清度蛋白质检查磺基水杨酸溶液有关物质纸色谱，薄层色谱，电泳，荧光检查本文档共56页；当前第31页；编辑于星期六\10点25分三、含量测定紫外-可见分光光度法现在国家已经批准的嘌呤类核苷酸药物一般都用此法测定含量HPLC本文档共56页；当前第32页；编辑于星期六\10点25分四、实例分析肌苷ATP本文档共56页；当前第33页；编辑于星期六\10点25分（一）肌苷的质量分析1.结构：C10H12N4O5268.23本品为9β-D-核糖次黄嘌呤。按干燥品计算，含C10H12N4O5应为98.0～102.0％。2.性状：本品为白色结晶性粉末；无臭，味微苦。本品在水中略溶，在氯仿或乙醇中不溶，在稀盐酸和氢氧化钠溶液中易溶。

本文档共56页；当前第34页；编辑于星期六\10点25分3.鉴别取0.01％供试品溶液适量,加等体积的3,5-二羟基甲苯溶液(取3，5-二羟基甲苯与三氯化铁各0.1g，加盐酸使成100ml)，混匀，在水浴中加热约10分钟，即显绿色。---苔黑酚反应取本品1％水溶液，加氨制硝酸银试液数滴，即产生白色胶状沉淀。---嘌呤碱基

取含量测定项下的溶液,照分光光度法测定，在248nm的波长处有最大吸收，在222nm的波长处有最小吸收。色谱图IR

本文档共56页；当前第35页；编辑于星期六\10点25分4.检查

溶液的澄清度与颜色（溶液的透光率）取本品0.5g，加水50ml使溶解，照分光光度法在430nm的波长处测定透光率，不得低于98.0％(供注射用)。干燥失重取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过1.0炽灼残渣不得过0.1％(供注射用),或不得过0.2％(供口服用重金属取本品1.0g，依法检查含重金属不得过百万分之十。次黄嘌呤

①精密称取本品0.5g，置50ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度，摇匀，照纸色谱法试验，吸取上述溶10μl，点于3×25cm色谱滤纸上，照上行法，以水为展开剂，展开约20cm处，取出晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，不得出现杂质斑点。

②HPLC本文档共56页；当前第36页；编辑于星期六\10点25分5.含量测定

1）UV法：取本品，精密称定，加水制成每1ml中约含10μg的溶液，照分光光度法在248nm的波长处测定吸收度，按C10H12N4O5的吸收系数（E1％1cm）为460计算。2）HPLC本文档共56页；当前第37页；编辑于星期六\10点25分6.作用与用途辅酶类药。有改善机体代谢作用。用于各种类型肝脏疾患、心脏疾患、白细胞减少症、血小板减少症、中心视网膜炎、视神经萎缩等。7.用法与用量口服，一次0.2～0.6g一日0.6～1.8g8.贮藏遮光，密闭保存。9.制剂(1)肌苷口服溶液(2)肌苷片(3)肌苷注射液(4)肌苷胶囊(5)肌苷颗粒剂

本文档共56页；当前第38页；编辑于星期六\10点25分（二）三磷酸腺苷二钠（ATP）的质量分析

拼音名：Sanlinsuanxiangan‘erna

英文名：AdenosineDisodiumTriphosphate

C10H14N5Na2O13P3551.151.结构：本品为腺嘌呤核苷-5’-三磷酸酯二钠盐三水化合物。按干燥品计算，含C10H14N5Na2O13P3不得少于90.0％。

本文档共56页；当前第39页；编辑于星期六\10点25分2.性状：本品为白色或类白色粉末或结晶块状物；无臭，味咸；有引湿性。本品在水中易溶，在乙醇、氯仿或乙醚中几乎不溶。本文档共56页；当前第40页；编辑于星期六\10点25分3.鉴别（1）取本品20mg,加稀硝酸2ml溶解后，加钼酸铵试液1ml，加热，放冷，即析出黄色沉淀。---磷酸盐（2）取本品约10mg，加盐酸溶液(1→2)5ml溶解后，加间苯三酚10mg，混匀，置水浴中加热约1分钟，即显玫瑰红色。--戊糖（3）苔黑酚反应—戊糖（3）UV（4）IR（5）本品的水溶液显钠盐的鉴别反应本文档共56页；当前第41页；编辑于星期六\10点25分4.检查酸度溶液的澄清度与颜色蛋白质取本品20mg，加水2ml溶解后，滴加30％磺基水杨酸溶液0.5ml，不得发生浑浊。有关物质水分氯化物铁盐重金属热原

本文档共56页；当前第42页；编辑于星期六\10点25分5.含量测定

（1）总核苷酸：UV（2）三磷酸腺苷二钠的重量比：HPLC（3）色谱条件与系统适用性试验（4）测定法本文档共56页；当前第43页；编辑于星期六\10点25分6.作用与用途

辅酶类药。用于进行性肌萎缩、脑溢血后遗症、心功能不全、心肌疾患及肝炎等。7.注意

缓慢注射。心肌硬塞和脑溢血在发病期患者慎用。8.贮藏

有阴凉干燥处密封保存。有效期１年。9.制剂

(1)三磷酸腺苷二钠注射液(2)注射用三磷酸腺苷二钠

本文档共56页；当前第44页；编辑于星期六\10点25分第三节嘧啶类核苷酸药物的分析本文档共56页；当前第45页；编辑于星期六\10点25分一、鉴别

该类药物的化学组成和性质本与嘌呤类相似，唯一区别在于碱基的不同。一元碱本文档共56页；当前第46页；编辑于星期六\10点25分二、检查常规检查其他核苷酸：TLC本文档共56页；当前第47页；编辑于星期六\10点25分三、含量测定UV法电位滴定法本文档共56页；当前第48页；编辑于星期六\10点25分四、实例分析---氟尿嘧啶1.通用名:氟尿嘧啶

化学名:5-氟-2,4(1H,3H)-嘧啶二酮分子式:C4H3FN2O2

分子量:130.08熔点:278-286℃

水溶性:12.2g/L20℃含氟尿嘧啶（C4H3FN202）应为标示量的93.0-107.0%本文档共56页；当前第49页；编辑于星期六\10点25分2.性状：白色或类白色结晶或结晶性粉末。在水中略溶，乙醇中微溶，三氯甲烷中几乎不溶，在稀盐酸或氢氧化钠溶液中溶解。本文档共56页；当前第50页；编辑于星期六\10点25分3.鉴别（1）+溴，溴褪色；+氢氧化钡，紫色↓（2