基因工程的原理及技术终稿

（优选）基因工程的原理及技术终稿本文档共158页；当前第1页；编辑于星期六\2点21分【新】汉水丑生（侯伟新疆乌鲁木齐新世纪外国语学校）组织者：【川】飞鸿翼（洪翼四川省泸州市纳溪中学）【鲁】暖风（王文芳山东省阳谷第三中学）

【鲁】掌上的沙（袁庆军山东郓城高级中学）【渝】足教（王永洪重庆市大足中学）

【粤】handsome（贺海生广东汕尾陆丰龙山中学）【陕】一哲（杨明辉陕西宝鸡市天王高中）本文档共158页；当前第2页；编辑于星期六\2点21分基因工程的原理及技术鲁【梦】（孟祥伟山东昌乐及第中学）本文档共158页；当前第3页；编辑于星期六\2点21分（2012山东）35、（8分）【生物—现代生物科技专题】毛角蛋白II型中间丝（KIFII）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIFII基因的高绒质绒山羊的简单流程如图（1）过程①中最常用的运载工具是________，所需要的酶是限制酶和_____________。（2）在过程②中，用________________________

处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中，将成纤维细胞置于5%CO2的气体环境中，CO2的作用是________________。质粒DNA连接酶胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）维持培养基（液）的PH“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第4页；编辑于星期六\2点21分（3）在过程③中，用______________________处理以获得更多的卵（母）细胞。成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行_______处理。（4）从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是______________。在胚胎移植前，通过____________技术可获得较多胚胎。促性腺激素（或促滤泡素，孕马血清）；

去核(早期)胚胎培养胚胎分割“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第5页；编辑于星期六\2点21分【解析】熟练掌握基因工程和胚胎工程的基本知识就能解答本题.（1）运载工具（体）包括质粒、噬菌体衍生物及动植物病毒,其中质粒是主要运载体;所需工具酶是限制酶和DNA连接酶。（2）分散皮肤组织块成单个细胞使用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）。在动物细胞培养过程中，CO2的作用是维持培养液pH的相对稳定。（3）要得到更多的卵（母）细胞需用促性腺激素进行超数排卵处理；成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行去核处理，以保证克隆后代的遗传性状主要了来自供体核。（4）把重组细胞培养到早期胚胎叫早期胚胎培养技术；在胚胎移植前，通过胚胎分割技术可获得较多胚胎。本文档共158页；当前第6页；编辑于星期六\2点21分（2012天津）7.（13分）生物分子间的特异性结合的性质广泛用于生命科学研究。以下实例为体外处理“蛋白质-DNA复合体”获得DNA片段信息的过程图。据图回答：（1）过程①酶作用的部位是_____________键，此过程只发生在非结合区DNA，过程②酶作用的部位是___________键。（2）①、②两过程利用了酶的__________特性。【解析】（1）DNA酶作用的部位是DNA的磷酸二酯键，蛋白酶作用的部位是肽键。（2）①②过程利用了各种酶催化一种或一类化学反应的特性，即专一性。肽键磷酸二酯键专一“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第7页；编辑于星期六\2点21分（3）若将得到的DNA片段用于构建重组质粒，需要过程③的测序结果与__________________酶的识别序列进行对比，以确定选用何种酶。（4）如果复合体中的蛋白质为RNA酶聚合，则其识别、结合DNA序列位基因的_________________________。【解析】（3）DNA要构建重组质粒，需要用限制性核酸内切酶切割，再与质粒重组。（4）RNA聚合酶识别和结合在基因的启动子上，驱动基因转录。启动子（或转录起始区）限制性核酸内切酶“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第8页；编辑于星期六\2点21分【解析】（5）蛋白酶能特异性的酶解蛋白质，分子杂交手段也是利用各物质分子结合的特异性，抑制成熟基因转录出的mRNA与催化成熟酶基因的mRNA碱基互补结合，也具有特异性，光和色素易溶于有机溶剂，与酒精并不是特异性的溶解，所以选ACD。（5）以下研究利用了生物分子间的特异性结合的有（多选）A.分离得到核糖体，用蛋白酶酶解后提取rRNAB.用无水乙醇处理菠菜叶片，提取叶绿体基粒膜上的光合色素C．通过分子杂交手段，用荧光物质标记的目的基因进行染色体定位D．将抑制成熟基因导入番茄，其mRNA与催化成熟酶基因的mRNA互补结合，终止后者翻译，延迟果实成熟。ACD本文档共158页；当前第9页；编辑于星期六\2点21分（2012天津）8.（20分）黄曲霉毒素B1（AFB1）存在于被黄曲霉菌污染的饲料中，它可以通过食物链进入动物体内并蓄积，引起瘤变。某些微生物能表达AFB1解毒酶．将该酶添加在饲料中可以降解AFB1，清除其毒性。(1)AFB1属于________类致癌因子。(2)AFB1能结合在DNA的G上．使该位点受损伤变为G'，在DNA复制中，G'会与A配对。现有受损伤部位的序列为，经两次复制后，该序列突变为______________。化学

本文档共158页；当前第10页；编辑于星期六\2点21分【解析】黄曲霉毒素B1（AFB1）存在于被黄曲霉菌污染的饲料中，它可以通过食物链进入动物体内并蓄积，引起瘤变。某些微生物能表达AFB1解毒酶．将该酶添加在饲料中可以降解AFB1，清除其毒性。(1)黄曲霉毒素B1（AFB1）是化学物质，AFB1属于化学类致癌因子。

(2)AFB1能结合在DNA的G上．使该位点受损伤变为G‘，在DNA复制中，G’会与A配对。现有受损伤部位的序列为经两次复制后，该序列突变为

本文档共158页；当前第11页；编辑于星期六\2点21分(3）下图为采用基因工程技术生产AFB1解毒酶的流程图据图回答问题：①在甲、乙条件下培养含AFB1解毒酶基因的菌株．经测定．甲菌液细胞密度小、细胞含解毒酶：乙菌液细胞密度大、细胞不含解毒酶．过程l应选择____________菌液的细胞提取总RNA，理由是___________________________________________________________________________________________________________________

②过程Ⅱ中，根据图示，可以看出与引物结合的模版是________________________________________

③检测酵母菌工程菌是否合成了AFB1解毒酶，应采用_____________________方法。甲甲菌液细胞的AFB1基因的表达已转录形成mRNA，而在已菌夜细胞中该基因未转录AFB1解毒酶基因的cDNA抗原-抗体杂交“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第12页；编辑于星期六\2点21分【解析】（3）①在甲、乙条件下培养含AFB1解毒酶基因的菌株．经测定．甲菌液细胞密度小、细胞含解毒酶：乙菌液细胞密度大、细胞不含解毒酶．过程l应选择甲菌液的细胞提取总RNA，理由是因为甲菌液细胞含解毒酶，意味着完成了基因的表达，所以应选择甲菌液的细胞提取总RNA②过程Ⅱ中，根据图示，可以看出与引物结合的模版是cDNA.③检测酵母菌工程菌是否合成了AFB1解毒酶，检测对象为蛋白质，应采用抗原-抗体杂交方法。本文档共158页；当前第13页；编辑于星期六\2点21分(4）选取不含AFB1的饲料和某种实验动物为材料，探究该AFB1解毒酶在饲料中的解毒效果。实验设计及测定结果见下表：[来源:中国教育出版网]据表回答问题： ①本实验的两个自变量，分别为________________________。②本实验中．反映AFB1解毒酶的解毒效果的对照组是_________________。③经测定，某污染饲料中AFB1含量为100μg/kg，则每千克饲料应添加______克AFB1解毒酶．解毒效果最好．同时节的了成本。AFB1的添加量和AFB1解毒酶的添加量B组（或B组+A组）5“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第14页；编辑于星期六\2点21分【解析】（4）①本实验的两个自变量，分别为AFB1的有无和AFB1解毒酶的含量。②本实验中．反映AFB1解毒酶的解毒效果的对照组是B组。③经测定，某污染饲料中AFB1含量为100μg/kg，则每千克饲料应添加5克AFB1解毒酶．AFB1的残留量最少，解毒效果最好．继续添加AFB1解毒酶解解毒效果不变，因此节约了成本。本文档共158页；当前第15页；编辑于星期六\2点21分（5）采用蛋白质工程进一步改造该酶的基本途径是：从提高每的活性出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的___________________。【解析】（5）采用蛋白质工程进一步改造该酶的基本途径是：从提高酶的活性出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列。脱氧核苷酸序列本文档共158页；当前第16页；编辑于星期六\2点21分（2012浙江）6.天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因B，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因B。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是()A.提取矮牵牛蓝色花的mRNA，经逆转录获得互补的DNA，再扩增基因BB.利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取基因BC.利用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞D.将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞A本文档共158页；当前第17页；编辑于星期六\2点21分【解析】提取矮牵牛蓝色花的mRNA，逆转录得到DNA，然后扩增，可获得大量的基因B，A正确；从基因文库中获取目的基因，只要根据目的基因的相关信息和基因文库中的信息进行筛选对比即可，不需要用限制酶进行切割，B错误；目的基因与质粒的连接需要用DNA连接酶，而不是DNA聚合酶，C错误；目的基因需要和运载体连接后形成重组质粒再导入，而且应该用农杆菌进行感染，而不是大肠杆菌，D错误。本文档共158页；当前第18页；编辑于星期六\2点21分（2012新课标卷）40、[生物—选修3现代生物科技专题]（15分）根据基因工程的有关知识，回答下列问题：（1）限制性内切酶切割ＤＮＡ分子后产生的片段，其末端类型有

和

。黏性末端平末端（2）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是

。切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同（3）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即

DNA连接酶和

DNA连接酶。大肠杆菌

T4本文档共158页；当前第19页；编辑于星期六\2点21分（5）基因工程中除质粒外，

和

也可作为运载体。（4）反转录作用的模板是

，产物是

。若要在体外获得大量反转录产物，常采用

技术。（6）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是

mRNA（或RNA）

cDNA（或DNA）噬菌体未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱

PCR动植物病毒等本文档共158页；当前第20页；编辑于星期六\2点21分(六)回答下列有关遗传信息传递和表达的问题。(10分)

（2012上海）55．如图18所示，若用两种识别切割序列完全不同的限制酶E和F从基因组DNA上切下目的基因，并将之取代质粒pZHZ1(3.7kb，1kb=1000对碱基)上相应的E-F区域(0.2kb)，那么所形成的重组质粒pZHZ2_______。

A．既能被E也能被F切开B．能被E但不能被F切开

C．既不能被E也不能被F切开D．能被F但不能被E切开A“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第21页；编辑于星期六\2点21分【解析】用限制酶从基因组DNA上切下目的基因，并取代质粒pZHZ1(3.7kb，1kb=1000对碱基)上相应的E-F区域(0.2kb)，用DNA连接酶连接后形成重组质粒，则在重组质粒中仍然含有限制酶E和限制酶F的切割位点，形成的重组质粒pZHZ2既能被E也能被F切开，故本题选A。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第22页；编辑于星期六\2点21分（2012上海）56．已知在质粒pZHZl中，限制酶G切割位点距限制酶E切割位点0．8kb，限制酶H切割位点距限制酶F切割位点O．5kb。若分别用限制酶G和H酶切两份重组质粒pZHZ2样品，据表4所列酶切结果判断目的基因的大小为

kb；并将目的基因内部的限制酶G和H切割位点标注在图19中。1.2本文档共158页；当前第23页；编辑于星期六\2点21分【解析】根据题中信息，原来质粒长度为3.7kb切去EF之间的还有3.5kb，插入目的基因后构成重组质粒，重组质粒长度为1.6+3.1=1.2+3.5=4.7kb，可推导出目的基因长度为1.2kb。重组质粒中G的切割位点距E的切割位点0.8kb，单独用限制酶G切割后产生1.6kb和3.1kb的两种片段，说明在重组质粒中除了图中标示出来的G酶识别位点外，还有一个G酶识别位点；H的酶切位点距F0.5kb，用H单独酶切产生1.2kb和3.5kb两种片段，说明在重组质粒中含有另外一个H的酶切位点，根据题中信息提示“将目的基因内部的限制酶G和H的识别位点标注在图19中”，可确定在EF之间分别含有G和H的一个识别位点。可断定G的识别位点，在举例E点右侧0.8kb处，H的识别位点在距F左侧0.7kb处。本文档共158页；当前第24页；编辑于星期六\2点21分（2012上海）57．若想在山羊的乳汁中收获上述目的基因的表达产物，则需将重组质粒pZHZ2导入至山羊的______细胞中。若pZHZ2进入细胞后插入在一条染色体DNA上，那么获得转基因纯合子山羊的方式是。受精卵【解析】将目的基因导入动物细胞中，通常以受精卵作为受体细胞，当受精卵发育成山羊后，在雌性山羊的乳汁中可以提取到目的基因的表达产物。重组质粒插入在一条染色体DNA上，可通过雌雄转基因山羊杂交的方法来获取转基因纯合子山羊。转基因山羊间交配“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第25页；编辑于星期六\2点21分（2012广东）28．（16分）子叶黄色（Y，野生型）和绿色（y，突变型）是孟德尔研究的豌豆相对性状之一。野生型豌豆成熟后，子叶由绿色变为黄色。(1)在黑暗条件下，野生型和突变型豌豆的叶片总叶绿素含量的变化见图10。其中，反映突变型豌豆叶片总叶绿素含量变化的曲线是______。A本文档共158页；当前第26页；编辑于星期六\2点21分（2）Y基因和y基因的翻译产物分别是SGRY蛋白和SGRy蛋白，其部分氨基酸序列见图11。据图11推测，Y基因突变为y基因的原因是发生了碱基对的_____和_______。进一步研究发现，SGRY蛋白和SGRy蛋白都能进入叶绿体。可推测，位点_______的突变导致了该蛋白的功能异常，从而使该蛋白调控叶绿素降解的能力减弱，最终使突变型豌豆子叶和叶片维持“常绿”。（2012广东）28．（16分）子叶黄色（Y，野生型）和绿色（y，突变型）是孟德尔研究的豌豆相对性状之一。野生型豌豆成熟后，子叶由绿色变为黄色。替换增加③“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第27页；编辑于星期六\2点21分（3）水稻Y基因发生突变，也出现了类似的“常绿”突变植株y2，其叶片衰老后仍为绿色。为验证水稻Y基因的功能，设计了以下实验，请完善。（一）培育转基因植株：Ⅰ．植株甲：用含有空载体的农杆菌感染__________的细胞，培育并获得纯合植株。Ⅱ．植株乙：______________________________，培育并获得含有目的基因的纯合植株。（2012广东）

28．（16分）子叶黄色（Y，野生型）和绿色（y，突变型）是孟德尔研究的豌豆相对性状之一。野生型豌豆成熟后，子叶由绿色变为黄色。突变植株y2用含有Y基因的农杆菌感染纯合突变植株y2

本文档共158页；当前第28页；编辑于星期六\2点21分（3）水稻Y基因发生突变，也出现了类似的“常绿”突变植株y2，其叶片衰老后仍为绿色。为验证水稻Y基因的功能，设计了以下实验，请完善。（二）预测转基因植株的表现型：植株甲：________维持“常绿”；植株乙：________________。（三）推测结论：__________________________。（2012广东）28．（16分）子叶黄色（Y，野生型）和绿色（y，突变型）是孟德尔研究的豌豆相对性状之一。野生型豌豆成熟后，子叶由绿色变为黄色。能不能维持“常绿”Y基因能使子叶由绿色变为黄色本文档共158页；当前第29页；编辑于星期六\2点21分【解析】（1）根据题干所给信息“野生型豌豆成熟后，子叶由绿色变为黄色”，可推测出野生型豌豆成熟后，子叶发育成的叶片中叶绿素含量降低。分析图10，B从第六天开始总叶绿素含量明显下降，因此B代表野生型豌豆，A为突变型豌豆。（2）根据图11可以看出，突变型的SGRy蛋白和野生型的SGRY有3处变异，①处氨基酸由T变成S，②处氨基酸由N变成K，可以确定是基因相应的碱基对发生了替换，③处多了一个氨基酸，所以可以确定是发生了碱基对的增添；从图11中可以看出SGRY蛋白的第12和38个氨基酸所在的区域的功能是引导该蛋白进入叶绿体，根据题意，SGRy和SGRY都能进入叶绿体，说明①、②处的变异没有改变其功能；所以突变型的SGRy蛋白功能的改变就是由③处变异引起的。本文档共158页；当前第30页；编辑于星期六\2点21分【解析】

（3）本实验通过具体情境考查对照实验设计能力。欲通过转基因实验验证Y基因“能使子叶由绿色变为黄色”的功能，首先应培育纯合的常绿突变植株y2，然后用含有Y基因的农杆菌感染纯合的常绿突变植株y2，培育出含有目的基因的纯合植株观察其叶片颜色变化。为了排除农杆菌感染对植株的影响，应用含有空载体的农杆菌感染常绿突变植株y2作为对照。本文档共158页；当前第31页；编辑于星期六\2点21分（2012江苏）32.（9分）图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspI、BamHI、MboI、SmaI4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题(1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由

连接。(2)若用限制酶SmaI完全切割图1中DNA片段，产生的末端是

末端，其产物长度为

。脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖

平

537bp、790bp、661bp

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种不同长度的DNA片段。4

“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第33页；编辑于星期六\2点21分(4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是

。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加

的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是

。BamHI

抗生素B

同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向链接本文档共158页；当前第34页；编辑于星期六\2点21分【解析】（1）DNA单链中相邻两个碱基之间通过“脱氧核糖—磷酸—脱氧核糖”连接。（2）SmaI识别的序列为GGGCCC，切割后会产生平末端；图1所示的DNA分子中含有两个SmaI的识别位点，第一个识别位点在左端534bp序列向右三个碱基对的位置；第二个识别位点在右端658bp序列向左三个碱基对的位置，从这两个位点切割后产生的DNA片段长度分别为534+3，796-3-3，658+3，即得到的DNA片段长度分别为537bp、790bp和661bp。（3）在杂合子体内含有基因D和基因d，基因D的序列中含有两个识别位点，经过SmaI完全切割会产生537bp、790bp和661bp三种不同长度的片段，基因d的序列中含有一个识别位点，经过切割后会产生1327bp和661bp两种长度的片段，综上，杂合子中分离到该基因的DNA片段经过切割后会产生4种不同长度的片段。本文档共158页；当前第35页；编辑于星期六\2点21分（4）能够获取目的基因并切开质粒的限制酶有识别序列为GGATCC的BamHI和识别序列为GATC的MboI，若使用MboI会同时破坏质粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamHI来切割目的基因和质粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于筛选出含有重组质粒的大肠杆菌。因为目的基因和运载体是用同种限制酶切割的，目的基因两端的末端和质粒切割后的两个末端都能进行互补，可能出现目的基因反向连接在运载体上的情况，导致基因D不能正确表达。本文档共158页；当前第36页；编辑于星期六\2点21分（2012福建）32．现代生物科技专题肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图１。（１）进行过程①时，需用

__________酶切开载体以插入let-7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为

。限制性核酸内切酶（或限制）_启动子“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第37页；编辑于星期六\2点21分（2012福建）

32．现代生物科技专题肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实验表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图１。（２）进行过程②时，需用

酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。胰蛋白“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第38页；编辑于星期六\2点21分（３）研究发现，let-7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图２。据图分析，可从细胞中提取

进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞

（RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起的。RNARAS蛋白“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第39页；编辑于星期六\2点21分【解析】（1）过程①表示基因表达载体的构建，在该过程中需要用限制酶对载体进行切割以便于目的基因的插入（限制性核酸内切酶，简称限制酶，写其他的不得分）；启动子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶结合和识别的位点，RNA聚合酶结合到该位点，可驱动转录过程。（2）过程②表示动物细胞培养，培养过程中出现接触抑制后可以用胰蛋白酶处理，使之分散成单个的细胞，之后分装到其他培养瓶里面进行传代培养。（3）判断目的基因是否在受体细胞中转录，可用分子杂交技术来进行，从细胞中提取mRNA和用放射性同位素或者荧光标记的目的基因单链DNA片段进行杂交。根据题中信息“肺组织细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达就增强，引发肺癌”导入let7基因后，肺癌细胞受到抑制，说明RAS基因表达减弱，导致细胞中的RAS蛋白质含量减少进而导致癌细胞受抑制。本文档共158页；当前第40页；编辑于星期六\2点21分（2012安徽）31．（24分）甲型血友病是由X染色体上的隐性基因导致的遗传病（H对h为显性）。图1中两个家系都有血友病发病史，Ⅲ2和Ⅲ3婚后生下一个性染色体组成是XXY的非血友病儿子（IV2），家系中的其他成员性染色体组成均正常。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。（1）根据图1，

（填“能”或“不能”）确定IV2两条X染色体的来源；III4与正常女子结婚，推断其女儿患血友病的概率是

。0不能“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第41页；编辑于星期六\2点21分（2）两个家系的甲型血友病均由凝血因子Ⅷ（简称F8，即抗血友病球蛋白）基因碱基对缺失所致。为探明IV2的病因，对家系的第Ⅲ、IV代成员F8基因的特异片段进行了PCR扩增，其产物电泳结果如图2所示，结合图1，推断Ⅲ3的基因型是

。请用图解和必要的文字说明IV2非血友病XXY的形成原因。XHXh

“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第42页；编辑于星期六\2点21分“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。图解如下：在Ⅲ3形成卵细胞过程中的减数第二次分裂后期，带有基因H的姐妹染色单体移向细胞同一极，形成XHXH的细胞，XHXH卵细胞与正常精子结合形成XHXHY受精卵本文档共158页；当前第43页；编辑于星期六\2点21分（3）现III3再次怀孕，产前诊断显示胎儿（IV3）细胞的染色体为46，XY；F8基因的PCR检测结果如图2所示。由此建议III3

。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。（4）补给F8可治疗甲型血友病。采用凝胶色谱法从血液中分离纯化F8时，在凝胶装填色谱柱后，需要用缓冲液处理较长时间，其目的是

；若F8比某些杂蛋白先收集到，说明F8的相对分子质量较这些杂蛋白

。洗涤平衡凝胶，并使凝胶装填紧密终止妊娠大“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第44页；编辑于星期六\2点21分（6）为获得更多的转基因母猪，可以采用体细胞克隆技术，将纯合转基因母猪的体细胞核注入

，构成重组胚胎进行繁殖。（5）利用转基因猪乳腺生物反应器可生产F8。要使乳腺细胞合成F8，构建表达载体时，必须将F8基因cDNA与猪乳腺蛋白基因的

等调控组件重组在一起。F8基因cDNA可通过克隆筛选获得，该cDNA比染色体上的F8基因短，原因是该cDNA没有

。内含子启动子去核的卵母细胞“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第45页；编辑于星期六\2点21分【解析】（1）因为Ⅳ2的染色体组成可能是XHXH，也可能是XHXhY，所以不能确定，Ⅲ4的基因型为XHY，所以后代女性中没有患病个体。（2）由图可知第一条带是显性，第二条带是隐性，所以Ⅲ3基因型为XHXh，图解如下：在III3形成卵细胞过程中的减数第二次分裂后期，带有基因H的姐妹染色单体移向细胞的同一极，形成XHXH卵细胞，XHXH卵细胞与正常精子结合形成XHXHY受精卵。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第46页；编辑于星期六\2点21分说明：Ⅲ2产生正常的Y精子和Ⅲ3产生异常的卵细胞XHXh结合而成XHXhY“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第47页；编辑于星期六\2点21分说明：Ⅲ2产生异常的XhY精子和Ⅲ3产生正常的卵细胞XH结合而成XHXhY或或说明：Ⅲ2产生异常的XhY精子和Ⅲ3产生正常的卵细胞XH结合而成XHXhY或或说明：Ⅲ2产生异常的XhY精子和Ⅲ3产生正常的卵细胞XH结合而成XHXhY或或说明：Ⅲ2产生异常的XhY精子和Ⅲ3产生正常的卵细胞XH结合而成XHXhY或说明：Ⅲ2产生正常的Y精子和Ⅲ3产生异常的卵细胞XHXh结合而成XHXhY说明：Ⅲ2产生正常的Y精子和Ⅲ3产生异常的卵细胞XHXh结合而成XHXhY“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第48页；编辑于星期六\2点21分【解析】（3）由题可知，IV3是血友病患者，所以建议III3终止妊娠。（4）采用凝胶色谱法从血液中分离纯化F8时，在凝胶装填色谱柱后，需要用缓冲液处理较长时间，其目的是洗涤平衡凝胶，并使凝胶装填紧密；若F8比某些杂蛋白先收集到，说明F8的相对分子质量较这些杂蛋白较大。（5）要使乳腺细胞合成F8，构建表达载体时，必须将F8基因cDNA与猪乳腺蛋白基因的启动子和终止子等调控组件重组在一起。F8基因cDNA可通过克隆筛选获得，该cDNA比染色体上的F8基因短，原因是该cDNA没有内含子。（6）为获得更多的转基因母猪，可以采用体细胞克隆技术，将纯合转基因母猪的体细胞核注入去核卵细胞，构成重组胚胎进行繁殖。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第49页；编辑于星期六\2点21分（2012北京）5．高中生物学实验中，在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大的一项是（）A．将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中B．将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上C．将转基因植物叶片接种到无菌培养基上D．将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上【解析】植物组织培养中的外植体必须在严格的无菌环境中进行培养，而且操作的各环节都要注意严格灭菌，必须无菌操作，C对；葡萄酒的制作原理是利用酵母菌无氧发酵时产生酒精，在无氧条件下，大部分微生物都不能生存，随着发酵的进行，酒精度增大，也有杀菌的作用；而制作腐乳时，主要是将毛霉等微生物接种在豆腐上，此过程的加盐、加卤汤等操作均有一定的杀菌作用；选择培养基只能允许目的菌生长，会抑制其他杂菌生长，因此不是严格无菌操作时A、B、D选项的情况下比C选项的受影响要小。C本文档共158页；当前第50页；编辑于星期六\2点21分（2012海南）31.【生物—选修3：现代生物科技专题】（15分）已知甲种农作物因受到乙种昆虫危害而减产，乙种昆虫食用某种原核生物分泌的丙种蛋白质后死亡。因此，可将丙种蛋白质基因转入到甲种农作物体内，使甲种农作物获得抗乙种昆虫危害的能力。回答下列问题：（1）为了获得丙种蛋白质的基因，在已知丙种蛋白质氨基酸序列的基础上，推测出丙种蛋白质的_______序列，据此可利用________方法合成目的基因。获得丙种蛋白质的基因还可用_______、____________方法。（2）在利用上述丙中蛋白质基因和质粒载体构建重组质粒的过程中，常需使用__________酶和__________。PCR化学基因基因文库DNA连接酶限制本文档共158页；当前第51页；编辑于星期六\2点21分（2012海南）31.【生物—选修3：现代生物科技专题】（15分）已知甲种农作物因受到乙种昆虫危害而减产，乙种昆虫食用某种原核生物分泌的丙种蛋白质后死亡。因此，可将丙种蛋白质基因转入到甲种农作物体内，使甲种农作物获得抗乙种昆虫危害的能力。回答下列问题：（3）将含有重组质粒的农杆菌与甲种农作物的愈伤组织共培养，筛选出含有丙种蛋白质的愈伤组织，由该愈伤组织培养成的再生植株可抵抗_____________的危害。（4）若用含有重组质粒的农杆菌直接感染甲种农作物植株叶片伤口，则该植株的种子_________（填“含有”或“不含”）丙种蛋白质基因。乙种昆虫不含本文档共158页；当前第52页；编辑于星期六\2点21分【解析】（1）在已知蛋白质的氨基酸序列的情况下，可根据氨基酸和碱基的对应关系，推出合成该蛋白质的基因序列，然后用DNA合成仪通过化学方法来合成目的基因。此外也可以从基因文库中获取目的基因，也可通过PCR方法获取目的基因。（2）构建重组质粒时，需要用限制酶将运载体切开，并用DNA连接酶将目的基因连接到运载体上，从而构建基因表达载体。（3）愈伤组织中含有丙蛋白，说明丙蛋白的基因得到了表达，在培养成的植株体内也含有丙蛋白，乙昆虫食用丙蛋白后会死亡，则该植株可抵抗乙昆虫的危害。（4）直接用含有重组质粒的农杆菌直接感染甲种农作物植株叶片伤口，仅仅在该叶片内部分细胞中能合成丙蛋白，该植株的种子和其他的营养器官均不含有重组质粒，也就不含有丙中蛋白质的基因。本文档共158页；当前第53页；编辑于星期六\2点21分（2011重庆）31.（16分）拟南芥是遗传学研究的模式植物，某突变体可用于验证相关的基因的功能。野生型拟南芥的种皮为深褐色（TT），某突变体的种皮为黄色（tt）,下图是利用该突变体验证油菜种皮颜色基因(Tn)功能的流程示意图。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，未经允许不得擅自修改或用于任何形式的商业用途。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第54页；编辑于星期六\2点21分（1）与拟南芥t基因的mRNA相比，若油菜Tn基因的mRNA中UGA变为ＡＧＡ，其末端序列成为“－ＡＧＣＧＣＧＡＣＣＡＧＡＣＵＣＵＡＡ”，则Tn比ｔ多编码

个氨基酸（起始密码子位置相同，ＵＧＡ、ＵＡＡ为终止密码子）。（2）图中①应为

。若②不能在含抗生素Kan的培养基上生长，则原因是

。若③的种皮颜色为

，则说明油菜Tn基因与拟南芥T基因的功能相同。2重组质粒

重组质粒未导入

深褐色

本文档共158页；当前第55页；编辑于星期六\2点21分（3）假设该油菜Tn基因连接到拟南芥染色体并替换其中一个t基因，则③中进行减数分裂的细胞在联会时的基因型为_____；同时，③的叶片卷曲（叶片正常对叶片卷曲为显性，且与种皮性状独立遗传），用它与种皮深褐色、叶片正常的双杂合体拟南芥杂交，其后代中所占比列最小的个体表现______________取③的茎尖培养成16颗植珠，其性状通常________（填“不变”或“改变”）。（4）所得的转基因拟南芥与野生型拟南芥______（填“是”或者“不是”）同一个物种。TnTntt

黄色正常、黄色卷曲

不变

是本文档共158页；当前第56页；编辑于星期六\2点21分“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。【解析】通过对基因工程和遗传知识的相结合来考察学生对该部分知识的掌握，属中档题，较难。油菜Tn基因的mRNA中UGA变为AGA，而末端序列为“—AGCGCGACCAGACUCUAA—”，在拟南芥中的UGA本是终止密码子不编码氨基酸，而在油菜中变为AGA可编码一个氨基酸，而CUC还可编码一个氨基酸，直到UAA终止密码子不编码氨基酸。假设油菜Tn基因连接到拟南芥染色体并替换其是一个t基因，注意拟南芥是指实验有的突变体tt，所以③转基因拟南芥基因型为Tnt，减数分裂联会时形成四分体是由于染色体进行了复制，基因也进行了复制，因而基因型为TnTntt。设③转基因拟南芥的叶片卷曲与正常叶是由B、b基因控制，正常叶为显性，而对该性状与种皮性状为独立遗传，则这两对性状遵循基因的分离与自由组合定律。则：本文档共158页；当前第57页；编辑于星期六\2点21分③转基因拟南芥（Tntbb）双杂合拟南芥（TtBb）进行逐对分析：TntTt→1/4TnT、1/4Tnt、1/4Tt、1/4tt由于Tn和T的功能相同，所以表示为：3/4T_（深褐色）、1/4tt（黄色）BbBb→1/2Bb（正常叶）、1/2bb（卷曲叶）所以后代中有四种表现型：3/8种皮深褐色正常叶；3/8种皮深褐色卷曲叶；1/8种皮黄色正常叶；1/8种皮黄色卷曲叶。取③转基因拟南芥的茎尖培养为植物组织为无性繁殖，所以后代性状一般不变。（排除基因突变）由上可知所得③转基因拟南芥Tnt和野生型拟南芥TT两个品种相当于发生基因突变，没有隔离，能杂交产生可育后代，因此是同一个种。本文档共158页；当前第58页；编辑于星期六\2点21分（2011江苏）14．关于现代生物技术应用的叙述,错误的是（

）A．蛋白质工程可合成自然界中不存在的蛋白质B．体细胞杂交技术可用于克隆动物和制备单克隆抗体C．植物组织培养技术可用于植物茎尖脱毒D．动物细胞培养技术可用于转基因动物的培养B本文档共158页；当前第59页；编辑于星期六\2点21分（2011福建）32.[现代生物科技专题]一对表现型正常的夫妇，生了一个镰刀型细胞贫血症（常染色体隐性遗传病）患儿。在他们欲生育第二胎时，发现妻子的双侧输卵管完全堵塞，不能完成体内受精。医生为该夫妇实施了体外受精和产前基因诊断，过程如右图。②受精卵早期胚胎子宫羊水中的胎儿细胞妻子卵子丈夫精子③扩增产物酶切产物抽取、分离PCRMstⅡ父、母、患儿酶切产物父母患儿胎儿④电泳条带加样孔基因分析电泳带谱“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，未经允许不得擅自修改或用于任何形式的商业用途。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第60页；编辑于星期六\2点21分请回答：（1）过程①是指在体外进行__________的处理，从而使精子与卵细胞结合形成受精卵；过程②称为_________。（2）在对胎儿进行镰刀型细胞贫血症的产前基因诊断时，要先从羊水中的胎儿细胞提取物质③_______进行PCR扩增。然后用MstⅡ对扩增产物进行切割，产生多个片段的酶切产物。据此判断，MstⅡ是一种________酶。（3）不同长度的酶切产物在电泳时移动的速率不同，形成不同的电泳条带。该家庭成员的镰刀型细胞贫血症基因分析的电泳带谱如④，据此判断胎儿为______（正常/患者/携带者）。限制酶DNA精子获能胚胎移植正常本文档共158页；当前第61页；编辑于星期六\2点21分（2011北京）31.T-DNA可随机插入植物基因组内，导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下：种植野生型拟南芥，待植株形成花蕾时，将地上部分浸入农杆菌（其中的T-DNA上带有抗除草剂基因）悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养，收获种子（称为T1代）。T-DNA被插入的基因片段环状DNA示意图A、B、C、D表示能与T-DNA链互补、长度相等的单链DNA片段；箭头指示DNA合成方向本文档共158页；当前第62页；编辑于星期六\2点21分（2011北京）

31.T-DNA可随机插入植物基因组内，导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下：种植野生型拟南芥，待植株形成花蕾时，将地上部分浸入农杆菌（其中的T-DNA上带有抗除草剂基因）悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养，收获种子（称为T1代）。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，未经允许不得擅自修改或用于任何形式的商业用途。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第63页；编辑于星期六\2点21分（1）为促进植株侧枝发育以形成更多的花蕾，需要去除_____，因为后者产生的_______会抑制侧芽的生长。（2）为筛选出已转化的个体，需将T1代播种在含_______的培养基上生长，成熟后自交，收获种子（称为T2代）。（3）为筛选出具有抗盐性状的突变体，需将T2代播种在含____的培养基上，获得所需个体。（4）经过多代种植获得能稳定遗传的抗盐突变体。为确定抗盐性状是否由单基因突变引起，需将该突变体与________植株进行杂交，再自交_____代后统计性状分离比。（5）若上述T-DNA的插入造成了基因功能丧失，从该突变体的表现型可以推测野生型基因的存在导致植物的抗盐性_______。生长素除草剂顶芽盐野生型1降低本文档共158页；当前第64页；编辑于星期六\2点21分（6）根据T-DNA的已知序列，利用PCR技术可以扩增出被插入的基因片段。其过程是：提取__植株的DNA，用限制酶处理后，再用_________

将获得的DNA片段连接成环（如右图）以此为模板，从图中A、B、C、D四种单链DNA片断中选取______作为引物进行扩增，得到的片断将用于获取该基因的全序列信息。DNA连接酶突变体B、C本文档共158页；当前第65页；编辑于星期六\2点21分（2011广东）27.登革热病毒感染蚊子后，可在蚊子唾液腺中大量繁殖，蚊子在叮咬人时将病毒传染给人，可引起病人发热、出血甚至休克。科学家拟用以下方法控制病毒的传播。

（1）将S基因转入蚊子体内，使蚊子的唾液腺细胞大量表达S蛋白，该蛋白可以抑制登革热病毒的复制。为了获得转基因蚊子，需要将携带S基因的载体导入蚊子的

细胞。如果转基因成功，在转基因蚊子体内可检测出

、

和

。受精卵

S基因S基因的mRNAS蛋白本文档共158页；当前第66页；编辑于星期六\2点21分（2）科学家获得一种显性突变蚊

子（AABB）。A、B基因位于非同源

染色体上，只有A基因或B基因的胚

胎致死。若纯合的雄蚊（AABB）与

野生型雌蚊（aabb）交配，F1群体

中A基因频率是

，F2群体中A基

因频率是

。

（3）将S基因分别插入到A、B基因的紧邻位置（如图11），将该纯合的转基因雄蚊释放到野生型群体中，群体中蚊子体内病毒的平均数目会逐代

，原因是

。减少60%50%群体中S基因频率逐代升高，而S基因表达的蛋白可以抑制蚊子体内病毒的繁殖ASBS图11“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，未经允许不得擅自修改或用于任何形式的商业用途。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第67页；编辑于星期六\2点21分（2011四川）5.北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强。下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是（）A.过程①获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序B.将多个抗冻基因编码区依次相连成能表达的新基因，不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白C.过程②构成的重组质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才能进行筛选D.应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达B“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，未经允许不得擅自修改或用于任何形式的商业用途。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第68页；编辑于星期六\2点21分（2011上海）（九）回答下列有关基因工程的问题。（10分）

57．基因工程中使用的限制酶，其特点是＿＿＿＿＿＿＿＿

＿＿＿＿。

下图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四环素的抗性基因。特异性地识别和切割DNA58．将两端用E1切开的Tcr基因与用E1切开的质粒X-1混合连接，连接后获得的质粒类型有＿＿＿。（可多选）

A．X-1B．X-2C．X-3D．X-4ABC“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，未经允许不得擅自修改或用于任何形式的商业用途。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第69页；编辑于星期六\2点21分60．如果X-1用E1酶切，产生850对碱基和3550对碱基两种片段：那么质粒X-2（Tcr基因的长度为1200对碱基）用E2

酶切后的片段长度为＿＿＿＿对碱基。

61．若将外源的Tcr基因两端用E2切开，再与用E2切开的

X-1混合连接，并导入大肠杆菌细胞，结果显示，含X-4的细胞数与含X-1的细胞数之比为1∶3，增大DNA连接酶用量能

否提高上述比值？＿＿＿。原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。4750不能

DNA连接酶对DNA片段没有选择性/两段DNA片段没有选择性/两段DNA末端相同本文档共158页；当前第70页；编辑于星期六\2点21分（2011天津）1．下列有关酶的叙述正确的是（）A．酶的基本组成单位是氨基酸和脱氧核糖核苷酸B．酶通过为反应物供能和降低活化能来提高化学反应速率C．在动物细胞培养中，胰蛋白酶可将组织分散成单个细胞D．DNA连接酶可连接DNA双链的氢键，使双键延伸C本文档共158页；当前第71页；编辑于星期六\2点21分（2011安徽）31Ⅱ.家蚕细胞具有高效表达外源基因能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。（1）进行转基因操作前，需用____________________酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞。（2）为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的________和_______之间。（3）采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。该PCR反应体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水、4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、______________和______________________________。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，未经允许不得擅自修改或用于任何形式的商业用途。2012年1月15日，汉水丑生标记。胰蛋白（或胶原蛋白）

启动子终止子对干扰素基因特异的DNA引物对

TaqDNA聚合酶

本文档共158页；当前第72页；编辑于星期六\2点21分扩大细胞贴壁生长的附着面积

（4）利用生物反应器培养家蚕细胞时，贴壁生长的细胞会产生接触抑制。通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以____________________________增加培养的细胞数量，也有利于空气交换。本文档共158页；当前第73页；编辑于星期六\2点21分【解析】（1）为了使组织分散开为单个细胞通常用胰蛋白酶或胶原蛋白酶。（2）将目的基因正确插入表达载体的启动子和

终止子之间，才能使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达。（3）PCR反应体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水、4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、对干扰素基因特异的DNA引物对和

TaqDNA聚合酶。（4）细胞离体培养时通常表现出：贴壁生长和接触抑制，因此将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以扩大细胞贴壁生长的附着面积，增加培养的细胞数量。本文档共158页；当前第74页；编辑于星期六\2点21分（2011山东）35．【生物—现代生物科技专题】人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，未经允许不得擅自修改或用于任何形式的商业用途。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第75页；编辑于星期六\2点21分（1）卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可以从已处死的雌鼠______中获取。（2）图中的高血压相关基因作为

，质粒作为______二者需用

切割后连接成重组载体，该过程与质粒上含有

有关。（3）子代大鼠如果

和__________

，即可分别在分子水平和个体水平上说明高血压相关基因已成功表达，然后可用其建立高血压转基因动物模型。目的基因载体同种限制酶限制酶切割位点检测到体内有相关蛋白出现高血压卵巢

本文档共158页；当前第76页；编辑于星期六\2点21分（2011浙江）6.将ada（腺苷酸脱氨酶基因）通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是（）A．每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒B．每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点C．每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个adaD．每个插入的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子【解析】将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处，首先碱基互补配对结合，两个黏性末端吻合在一起，碱基之间形成氢键，再加入适量DNA连接酶，催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键，从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来，形成一个重组DNA分子。目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过检测与鉴定才能知道。这是基因工程的第四步工作。已经表达了就说明导入成功。所以A、B和D正确，C错误。C本文档共158页；当前第77页；编辑于星期六\2点21分(1）从良种母牛采集的卵母细胞，都需要进行体外培养，其目的是____________________；从良种公牛采集的精子需________后才能进行受精作用。（2）在体外培养受精卵时，除了给予一定量的O2以维持细胞呼吸外，还需要提供____气体以维持________________。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。（2010山东）35.【生物-现代生物科技专题】胚胎工程是一项综合性的动物繁育技术，可在畜牧业和制药业等领域发挥重要作用。下图是通过胚胎工程培育试管牛的过程。

使卵母细胞成熟获能CO2培养液的pH“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第78页；编辑于星期六\2点21分胚胎移植提高优良母畜的繁殖率显微注射法牛奶中含有人类白细胞介素（3）图中过程A称为_______________，它在胚胎工程中的意义在于_________________________。（4）研制能够产生人类白细胞介素的牛乳腺生物反应器，需将目的的基因导入牛受精卵，最常用的导入方法是_____________；获得转基因母牛后，如果______________________________即说明目的基因已经表达。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。本文档共158页；当前第79页；编辑于星期六\2点21分[解析]采集到的卵细胞都要在人工培养到成熟后才能与获能的精子受精，采集到的精子也需获能处理才能与卵子结合；培养基制备时要调pH以保证细胞的正常生活环境；早期胚胎移入受体子宫的过程为胚胎移植，胚胎移植充分发挥了雌性优良个体的繁殖潜力，大大提高了优良母畜的繁