植物源农药的提取分离及结构鉴定修改详解演示文稿

植物源农药的提取分离及结构鉴定修改版详解演示文稿本文档共84页；当前第1页；编辑于星期日\16点43分（优选）植物源农药的提取分离及结构鉴定修改版本文档共84页；当前第2页；编辑于星期日\16点43分

水亲水性有机溶剂亲脂性有机溶剂二、提取方法超临界流体萃取法（SFE）水蒸气蒸馏法溶剂提取法升华法压榨法溶剂本文档共84页；当前第3页；编辑于星期日\16点43分（一）溶剂提取法根据天然成分的溶解性不同，选用对所需成分溶解度大而对其他成分溶解度小的溶剂，将所需成分从生物材料中溶解出来的一种提取方法。

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溶剂提取是指溶剂进入生物体细胞，溶解或分散其有用物质而变成浸出物的全过程。包括浸润、解吸和扩散三个阶段。1、溶剂提取法的原理选择溶剂依据相似相溶原理。本文档共84页；当前第5页；编辑于星期日\16点43分

浸润：渗透阶段溶剂通过细胞壁渗透到细胞中。解吸：溶解阶段细胞内容物与细胞组织之间有亲和力，溶剂破除这种亲和力。扩散：置换阶段利用细胞内的渗透力产生的压差而抽提出来，用溶剂占领内容物的位置而将内容物置换出来。本文档共84页；当前第6页；编辑于星期日\16点43分

扩散过程表达式：dt:扩散时间F：扩散面积，以粉碎度表示浓度差D：扩散系数ds:在dt时间内的扩散量本文档共84页；当前第7页；编辑于星期日\16点43分2、选择溶剂的要点*对所要成分溶解度大*沸点适中容易回收*低毒安全*廉价天然产物成分中，萜、甾等大环、稠环化合物极性小，易溶于氯仿、乙醚等；糖、苷等易溶于水、乙醇等极性溶剂中；酸碱性成分因存在状态不同溶解性不同。最常用的溶剂为乙醇。本文档共84页；当前第8页；编辑于星期日\16点43分3、溶剂的分类*强极性溶剂：水*亲水性有机溶剂：能与水任意混溶（甲醇、乙醇、丙酮）*亲脂性有机溶剂：不与水任意混溶，可分层（正丁醇、乙醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、环己烷、石油醚）常用溶剂的极性大小顺序：石油醚<四氯化碳<苯<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇（甲醇）<水本文档共84页；当前第9页；编辑于星期日\16点43分4、化合物的结构与亲水性、亲脂性的关系（1）分子结构中亲水性基团（羧基、羟基、氨基）越多，极性越大，亲水性越强，反之则亲脂性越强。（2）分子中非极性部分越大，碳链越长或结构越大，则亲脂性越强。（3）结构母核相同的成分，分子中功能基的极性越大，或极性功能基数量越多，则整个分子的极性越大，亲水性越强，亲脂性越弱。本文档共84页；当前第10页；编辑于星期日\16点43分5、溶剂的选择

(1)水：为价廉、易得、使用安全的强极性溶剂。适于提取无机盐、糖、氨基酸、蛋白质、有机酸盐、生物碱盐、苷类等。(2)亲水性有机溶剂：以乙醇最常用。高浓度提取亲脂性成分，低浓度提取亲水性成分。(3)

亲脂性有机溶剂：具有较强的选择性，对挥发油、油脂、叶绿素、树脂、内酯、某些生物碱及一些苷元均可提取出来。优缺点：沸点低，浓缩回收方便，但易燃、有毒、价贵，穿透力差。本文档共84页；当前第11页；编辑于星期日\16点43分6、溶剂提取的方法溶剂提取的方法连续回流提取法煎煮法（煎中药）渗漉法浸渍法（泡药酒）本文档共84页；当前第12页；编辑于星期日\16点43分

以水或稀醇反复提取，适于遇热易破坏或挥发性成分及含淀粉、粘液质较多的材料。（1）浸渍法

民间的药酒浸制。本文档共84页；当前第13页；编辑于星期日\16点43分

（2）渗漉法

以稀乙醇或酸、水作溶剂，先浸后渗，提取效率高于浸渍法。但溶剂用量大，对原料粒度要求高。实验室简单渗漉装置本文档共84页；当前第14页；编辑于星期日\16点43分

（3）煎煮法

以水为溶剂，对遇热易破坏和挥发性成分有影响，对含多量淀粉、黏液质的原料也不适用。

传统的中药煎制。本文档共84页；当前第15页；编辑于星期日\16点43分

（5）连续回流提取法

循环使用挥发性的有机溶剂，在脂肪提取器中连续提取的方法。提取效率高，节省溶剂。但不适于热不稳定成分的提取。

也可采用混合溶剂，常用的有水和乙醇。不同比例的溶剂可提出不同成分，如CHCl3-C2H5OH(95:5) 可提取出强心甙、有机酸、叶绿素等。本文档共84页；当前第16页；编辑于星期日\16点43分

索式提取器的组成本文档共84页；当前第17页；编辑于星期日\16点43分索式提取器连续回流提取

萃取瓶（圆底烧瓶）冷凝管脂肪提取器滤纸筒虹吸管蒸汽管本文档共84页；当前第18页；编辑于星期日\16点43分

7、影响溶剂提取法的因素（1）生物材料的粉碎度

材料细，面积大，扩散快，效果好。但是太细，吸附作用大，易糊化，扩散慢，同时植物细胞也会遭受破坏，大量蛋白质、淀粉被提出，产生沉淀或胶束状，影响提取。花、叶可适当粗些，皮、茎、根宜细些。本文档共84页；当前第19页；编辑于星期日\16点43分

（2）提取温度

一般使用常温，在不破坏有效成分的条件下加热不要超过80˚C。

温度低提取时的杂质少，温度高时提取效率高；但含淀粉、粘液质较多的材料，水提时避免热提。本文档共84页；当前第20页；编辑于星期日\16点43分

（3）提取时间

以提完为准，是否完全可以提取也做定性实验，或薄层层析检测，或以液体颜色判断。

根据检测结果确定是否需要延长提取时间。本文档共84页；当前第21页；编辑于星期日\16点43分

（4）浓度差

根据扩散原理，造成提取液的浓度差可以提高提取的效率。

可采取的措施有：搅拌、更换溶剂。本文档共84页；当前第22页；编辑于星期日\16点43分

（5）新技术的使用

超声波、微波促提技术的应用，可以加快提取速度，提高提取效率。

目前实验室广泛使用的超声波萃取仪是将超声波换能器产生的超声波通过介质（通常是水）传递并作用于样品，这是一种间接的作用方式，声振强度较低，必须通过增加超声波发生器功率（3300W）来提高萃取效率。但较大的超声波功率，又会发出令人感觉不适的噪音。

超声波促提原理：本文档共84页；当前第23页；编辑于星期日\16点43分

为物理过程，无化学反应，不改变生物活性，高能量的超声波产生的强大压力，可造成植物细胞壁及生物体破裂，导致胞内物质释放、扩散、溶解。实验室用小型超声仪工业生产用超声仪本文档共84页；当前第24页；编辑于星期日\16点43分

微波辅助技术是利用样品中目标物分子在微波电磁场的作用下，从原来的热运动状态转为跟随微波交变电磁场而快速排列取向，将微波能量转化为样品内的能量，从而加速目标物从固相进入溶剂相的过程。微波促提原理：本文档共84页；当前第25页；编辑于星期日\16点43分

具有穿透力强，加热效率高，操作简便、快速、节能、高效等特点。缺点：化学成分的结构易发生变化，继而导致生物活性的改变。

微波提取尤其要注意能量的控制，被提取物质的稳定性。工业生产用微波提取罐本文档共84页；当前第26页；编辑于星期日\16点43分

（二）水蒸气蒸馏法

适于具有挥发性，能随水蒸气蒸馏而不被破坏的有效成分结构的提取。如挥发油、小分子生物碱、酚类、游离醌类等。

水蒸气蒸馏法是将水蒸气通入不溶或难溶于水但有一定挥发性的有机物质中，使该有机物在低于100℃

的温度下，随着水蒸气一起蒸馏出来。原理：道尔顿分压定律本文档共84页；当前第27页；编辑于星期日\16点43分

水蒸气蒸馏装置

常用的水蒸气蒸馏装置，包括水蒸气发生器、蒸馏、冷凝和接受器四个部分。本文档共84页；当前第28页；编辑于星期日\16点43分

最常用的是二氧化碳超临界萃取法，环保、成本低、提取分离一步完成。分子的极性、沸点和分子量的大小与其在二氧化碳超临界流体中的溶解性密切相关。（三）超临界流体萃取法

超临界二氧化碳流体(SFE-CO2)临界点(31.1℃)相当接近室温本文档共84页；当前第29页；编辑于星期日\16点43分

利用超临界条件下流体的特殊性能对样品进行提取，是20世纪80年代迅速发展起来的一种提取方法。

超临界流体不但具有与液体接近的密度，有很强的穿透性，接近或超过溶剂的提取效率；而且具有与气体相近的扩散的性能，提取效率越高。常用的超临界流体有CO2、乙烷、丙烷等。本文档共84页；当前第30页；编辑于星期日\16点43分

与普通有机溶剂提取法相比，超临界CO2萃取技术具有无毒、常温、不易燃、无污染等特点，可确保原有的色、香、味不因受热破坏；更为可贵的是在萃取过程中可同时对萃取物进行分离纯化。该技术适宜于萃取高价值的油脂（包括天然功能性油脂）、精油、内酯等极性较低的天然产物有效成分。

超临界CO2提取的特点。本文档共84页；当前第31页；编辑于星期日\16点43分

CO2

钢瓶

冷温槽

高压泵恒温箱

控温面板

接受瓶

流量计

CO2

原料

玻璃珠

脱脂棉

萃取柱

超临界CO2

萃取实验装置示意图本文档共84页；当前第32页；编辑于星期日\16点43分

液体CO2由高压泵加压到萃取工艺要求的压力并传送到换热器，将CO2流体加温到萃取工艺所需温度后进入萃取器，在此完成萃取过程。负载溶质的CO2流体在分离器中改变温度压力，溶解度降低使萃取物得以分离。分离萃取物后的CO2流体再经换热器液化后回到储罐中循环使用。超临界CO2提取操作流程本文档共84页；当前第33页；编辑于星期日\16点43分

20世纪50年代初进入试验阶段，如从石油中脱沥青。

70、80年代SFE用于食品香料的提取。

90年代从植物药中提取目标成分，如从蛇床子、桑白皮、茵陈蒿中提取活性成分。本文档共84页；当前第34页；编辑于星期日\16点43分

（四）升华法

将固体物质受热气化，遇冷又凝结为固体的方法。樟木中的樟脑，茶叶中的咖啡因的提取。2-莰酮咖啡因本文档共84页；当前第35页；编辑于星期日\16点43分

1、将茶叶与95%乙醇回流2h；2、滤出茶叶，浓缩提取液至适当体积；3、浓缩液与生石灰粉混合，搅成浆状，用蒸发皿在蒸汽浴上蒸干，除去水份；4、在蒸发皿上盖一张刺孔向上的滤纸，再在滤纸上罩一个大小适合且颈部塞有棉花的漏斗；5、用酒精灯隔石棉网加热，适当控制温度，白色咖啡因在滤纸上结晶。实验室提取咖啡因步骤：本文档共84页；当前第36页；编辑于星期日\16点43分

本文档共84页；当前第37页；编辑于星期日\16点43分升华本文档共84页；当前第38页；编辑于星期日\16点43分

借助机械外力的作用，将油脂从榨料中挤压出来的过程。在压榨过程中，主要发生的是物理变化，如物料变形、油脂分离、摩擦发热、水分蒸发等。但由于温度、水分、微生物等的影响，同时也会产生某些生物化学方面的变化，如蛋白质变性、酶的钝化和破坏、某些物质的结合等。压榨时，榨料粒子在压力作用下内外表面相互挤紧，致使其液体部分和凝胶部分分别产生两个不同过程，即油脂从榨料空隙中被挤压出来及榨料粒子变形形成坚硬的油饼。（五）压榨法本文档共84页；当前第39页；编辑于星期日\16点43分

第二节天然产物的分离与精制一、一般分离方法1、萃取法2、沉淀分离法3、结晶和重结晶4、膜分离二、柱色谱法1、吸附柱色谱2、分配柱色谱3、离子交换柱色谱4、凝胶柱色谱5、大孔树脂柱色谱6、亲和柱色谱本文档共84页；当前第40页；编辑于星期日\16点43分

1)影响分离的因素①分离因子β，分配系数Kβ=Ka/Kb，Ka>Kb

K=CU/CL

CU、CL为被分离物质在上相和下相中浓度

1、萃取法

利用混和物中各成分在两种互不相溶的溶剂中分配系数不同而达到分离的方法。本文档共84页；当前第41页；编辑于星期日\16点43分

根据β值的大小可决定分离采用的方法

β>100,简单的一次萃取，可基本分离。β≈10，数次乃至10余次萃取，CCD法β≦2，100次以上萃取，DCCC法，HSCCC法β≈1，不能分离可以根据PC法计算β值，选择理想的分离条件。本文档共84页；当前第42页；编辑于星期日\16点43分2.沉淀分离法根据溶解度的不同，控制溶液条件使溶液中的化合物或离子分离的方法统称为沉淀分离法。方法的主要依据是溶度积原理。本文档共84页；当前第43页；编辑于星期日\16点43分根据沉淀剂的不同，沉淀分离也可以分成用无机沉淀剂的分离法、用有机沉淀剂的分离法和共沉淀分离富集法。沉淀分离法和共沉淀分离法的区别主要是：沉淀分离法主要使用于常量组分的分离（毫克量级以上）；而共沉淀分离法主要使用于痕量组分的分离（小于1mg/mL）。常用的沉淀分离方法及试剂1、无机沉淀剂氢氧化物、硫化物、其它沉淀剂。2、有机沉淀剂草酸、铜试剂、铜铁试。本文档共84页；当前第44页；编辑于星期日\16点43分3.结晶和重结晶在化学里面，热的饱和溶液冷却后，溶质以晶体的形式析出，这一过程叫结晶。重结晶是将晶体溶于溶剂或熔融以后，又重新从溶液或熔体中结晶的过程。重结晶可以使不纯净的物质获得纯化，或使混合在一起的盐类彼此分离。本文档共84页；当前第45页；编辑于星期日\16点43分重结晶提纯法的一般过程1、溶剂选择2、固体物质的溶解3、杂质的除去4、晶体的析出5、晶体的收集和洗涤6、晶体的干燥本文档共84页；当前第46页；编辑于星期日\16点43分4.膜分离利用膜的选择性分离实现料液的不同组分的分离、纯化、浓缩的过程称作膜分离①液膜分离过程分为乳化液膜和固定液膜的分离过程；②合成膜的分离过程包括微过滤、超过滤、反渗透、气体渗透分离、渗透蒸发、渗析及电渗析等过程。本文档共84页；当前第47页；编辑于星期日\16点43分

二：柱色谱1.吸附柱色谱

吸附分类物理吸附：无选择性吸附，吸附-解吸附发生迅速，吸附剂如硅胶、氧化铝、活性炭等；化学吸附：不可逆吸附，如碱性氧化铝对酚酸性成分的吸附；酸性硅胶对生物碱的吸附等；半化学吸附：聚酰胺对酚酸类、醌类的氢键吸附。本文档共84页；当前第48页；编辑于星期日\16点43分

吸附原理：相似相吸

影响吸附过程的三要素：吸附剂（固定相）溶质（被分离物质）溶剂（洗脱剂、展开剂、流动相）

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2、硅胶、氧化铝

极性吸附剂：载样量大，吸附力强硅胶：有中性、酸性之分，适用于各类成分分离。氧化铝：有中性、酸性、碱性之分，不适合于分离酸性成分，多用于分离生物碱。本文档共84页；当前第50页；编辑于星期日\16点43分

①被分离物质吸附力与结构的关系

被分离物质极性大，吸附力强，难洗脱，Rf值小。官能团极性大小排列顺序：-COOH>Ar-OH>R-OH>R-NH2、RNHR’、RNR’R’’>RCONRR’>RCHO>RCOR’>RCOOR’>ROR’>RH②溶剂（洗脱剂）的极性与洗脱力的关系洗脱剂极性越大，洗脱力越强；本文档共84页；当前第51页；编辑于星期日\16点43分

大黄酸大黄素大黄酚酸性最强酸性其次酸性最弱溶于NaHCO3溶于Na2CO3溶于NaOH本文档共84页；当前第52页；编辑于星期日\16点43分

例：从黄花夹竹桃果仁中分离到七种强心苷成分，根据极性大小推测从硅胶柱上的洗脱顺序。

名称RR’黄夹苷ACHO(D-glc)2黄夹苷BCH3(D-glc)2黄夹次苷ACHOH黄夹次苷BCH3H黄夹次苷CCH2OHH黄夹次苷DCOOHH单乙酰黄夹次苷BCH3H

单乙酰黄夹次苷BR’’=COCH3, 其它R’’=H本文档共84页；当前第53页；编辑于星期日\16点43分

3、活性炭----非极性吸附剂

①吸附力与结构的关系分子量大者>分子量小者芳香族>脂肪族，活性炭和芳香族均有平面型分子的缘故。含OH、COOH、NH2多者>少者本文档共84页；当前第54页；编辑于星期日\16点43分

3、活性炭----非极性吸附剂

②溶剂的洗脱力

吡啶>15%酚/醇>7%酚/H2O>醇>含水醇>H2O黄酮、生物碱的富集，糖的分离，脱色等。③应用本文档共84页；当前第55页；编辑于星期日\16点43分

4、聚酰胺（Polyamide）

由己酰胺聚合成的一类高分子化合物。分离原理：主要通过酰胺与酚、酸、醌等化合物形成氢键，吸附能力取决于氢键的强弱。本文档共84页；当前第56页；编辑于星期日\16点43分2.分配柱色谱液-液柱色谱法，其固定相和流动相均为液体，液态固定相又称固定液，被涂渍在惰性材料载体上构成固定相。分配柱色谱法的优点是：稳定性高，重现性好，适用样品的类型广等。

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固定相极性小于流动相，如HPLC反相色谱柱、反相薄层色谱板。固定相：硅胶的硅醇基与烷基结合，如RP-2、RP-8、RP-18，亲脂性：RP-18>RP-8>RP-2流动相（洗脱剂）：MeOH-H2O；CH3CN-H2O洗脱顺序：分离极性大的成分，极性大者先被洗脱出来。本文档共84页；当前第58页；编辑于星期日\16点43分

固定相的表面修饰

本文档共84页；当前第59页；编辑于星期日\16点43分3.离子交换色谱离子交换色谱中的固定相是一些带电荷的基团，这些带电基团通过静电相互作用与带相反电荷的离子结合。如果流动相中存在其他带相反电荷的离子，按照质量作用定律，这些离子将与结合在固定相上的反离子进行交换。固定相基团带正电荷的时候，其可交换离子为阴离子，这种离子交换剂为阴离子交换剂；固定相的带电基团带负电荷，可用来与流动相交换的离子就是阳离子，这种离子交换剂叫做阳离子交换剂。本文档共84页；当前第60页；编辑于星期日\16点43分阴离子交换柱的功能团主要是－NH2，及－NH3：阳离子交换剂的功能团主要是－SO3H及－COOH。其中-NH3离子交换柱及-SO3H离子交换剂属于强离子交换剂，它们在很广泛的pH范围内都有离子交换能力；-NH2及-COOH离子交换柱属于弱离子交换剂，只有在一定的pH值范围内，才能有离子交换能力。离子交换色谱主要用于可电离化合物的分离，例如，氨基酸自动分析仪中的色谱柱，多肽的分离、蛋白质的分离，核苷酸、核苷和各种碱基的分离等。

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4、凝胶层析（GelPenetrationChromatography,GPC）

①葡聚糖凝胶

交联葡聚糖是由一定平均分子量的葡聚糖和交联剂（一般为环氧氯丙烷）以醚桥的形式互相交联形成的三维空间网状结构高分子材料，是水不溶性的白色球状颗粒，酸性环境能水解，碱中稳定。

在样品通过一定孔径的凝胶固定相时，由于流经路径的不同，使不同相对分子量的组分得以分离的方法。本文档共84页；当前第62页；编辑于星期日\16点43分

表面有孔隙，其大小决定于聚糖与交联剂的配比及反应条件。

商品型号即按凝胶的交联度大小分类，并以吸水量来表示，英文字母G代表葡聚糖凝胶，后面的数字表示每克凝胶吸水量，再乘以10的值，G-25的吸水量为每克2.5ml。

交联度大→网状结构越紧密→孔隙越小→吸水膨胀越少。本文档共84页；当前第63页；编辑于星期日\16点43分

型号吸水量（ml/g）床体积（ml/g）分离范围最小溶胀时间肽与蛋白质多糖室温沸水G-101.02~3小于700小于70031G-151.52.5~3.5小于1500小于150031G-252.54~61000~5000100~500062G-505.09~111500~3万500~1万62G-757.512~153000~7万1000~5万243G-1001015~20400015万1000`10万485G-1501520~305000~40万1000~15万725G-2002030~405000~80万1000~20万725凝胶的型号与使用范围本文档共84页；当前第64页；编辑于星期日\16点43分

②层析原理

绝大部分在水溶液中进行，凝胶颗粒在适当溶剂中浸泡，待充分膨胀后装入层析柱，加样后用同一溶液洗脱。在洗脱过程中，较小的分子渗入凝胶，较大的分子随溶液流动，分子量小的物质（阻滞作用大）可通过凝胶网孔进入粒子内部，然后扩散出来，故流程长，移动速度慢，后流出色谱柱，分子量大的物质沉凝胶粒子间孔隙，随洗脱液移动，流程短，移动速度快，先流出色谱柱。本文档共84页；当前第65页；编辑于星期日\16点43分

不同的化合物由于其大小差异，在流经GPC柱时，不同分子量的化合物流经体积不同（大分子不能或难以进入凝胶网格结构的内部，直接从凝胶颗粒之间穿过，保留时间短；而小分子恰恰相反，保留时间较长）而得以分离。本文档共84页；当前第66页；编辑于星期日\16点43分

常用术语Vt——床体积，凝胶装柱以后，柱床所占的体积。Vo——外水体积，柱床内存在于凝胶外面的水相体积。Vi——内水体积，凝胶颗粒内部所含的水相体积。Vg——凝胶本身体积。相互关系：Vt=Vo+Vi+VgVe——洗脱体积，自样品加入时算起，至流出组分最大浓度出现时，所流出的体积。本文档共84页；当前第67页；编辑于星期日\16点43分

同一类型化合物，洗脱特征与组分分子量有关。

Ve=K1-K2logM

说明不同组分流经凝胶柱时，按分子量大小顺序流出，分子量大的，洗脱体积小，最先流出，当条件固定时，Ve重现性很好。

按此特性可测大分子物质的分子量。本文档共84页；当前第68页；编辑于星期日\16点43分

用已知分子量的物质分别相继上柱（5mg），流出液按每管2~4ml收集，通过硫酸蒽酮显色，再经紫外检测，分别求得洗脱体积Ve。再用蓝色葡聚糖测出柱床的外水体积Vo，按Ve/Vo与分子量对数关系作图，得标准曲线，最后将待测物质分子量用少水溶解上柱，在同样条件下测定Ve，根据Ve/Vo，查标准曲线，测得物质分子量。局限性：

1、要有标准样。

2、不同的待测物质要有不同的标准样。本文档共84页；当前第69页；编辑于星期日\16点43分

操作技术：溶胀：不同凝胶溶胀时间不一样，G-100室温下最小水化时间72h，除微颗粒。目的：充分吸水，各孔隙舒张，以利于物质分子通过。装柱：柱内加少量洗脱液，排除底部气泡，然后将凝胶浆倒入，让其自然沉降，打开出口，柱床表面不再下沉即紧密。装好的柱应不含气泡，柱床表面平坦。本文档共84页；当前第70页；编辑于星期日\16点43分

平衡：用3倍床体积洗脱液让柱平衡流动2-3天，至流速恒定。加样：平衡后，床表面应有1~2cm的洗脱液，用吸管沿柱壁加入，打开出口，当上面液体刚好全部渗入柱内时，滴加洗脱液，注意不能振动床表面。

上样品要体积小，浓度大，这样峰形好。本文档共84页；当前第71页；编辑于星期日\16点43分

洗脱：一般用水和电解质溶液，如酸、碱、盐的溶液及缓冲溶液。加入5cm以上洗脱液时，可接高位瓶中的洗脱液，洗脱分阶段洗脱和梯度洗脱收集：分部收集器收集。检出：蛋白质、核苷酸、多肽用紫外光谱仪在280nm、260nm、230nm测吸光度值，以样品体积（或管数）为横座标，吸光度为纵座标，画出洗脱曲线。本文档共84页；当前第72页；编辑于星期日\16点43分5、大孔树脂柱色谱大孔吸附树脂的吸附实质为一种物体高度分散或表面分子受作用力不均等而产生的表面吸附现象，这种吸附性能是由于范德华引力或生成氢键的结果。同时由于大孔吸附树脂的多孔结构使其对分子大小不同的物质具有筛选作用。通过上述这种吸附和筛选原理，有机化合物根据吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附树脂上经一定溶剂洗脱而达到分离、纯化、除杂、浓缩等不同目的。吸附树脂的表面发生吸附作用后，会使树脂表面上溶质的浓度高于溶剂内溶质的浓度，其结果引起体系内放热和自由能的下降。本文档共84页；当前第73页；编辑于星期日\16点43分大孔吸附树脂按其极性大小和所选用的单体分子结构不同，可分为非极性、中极性和极性三类。（1）非极性大孔吸附树脂非极性大孔吸附树脂是由偶极矩很小的单体聚合制得的不带任何功能基，孔表的疏水性较强，可通过与小分子内的疏水部分的作用吸附溶液中的有机物，最适于极性溶剂中吸附非极性物质，也称为芳香族吸附剂，例如苯乙烯、二乙烯苯聚合物。本文档共84页；当前第74