瘦肉精残留及其检测技术(重庆)

研究平台国家重点学科基础兽医学，排名第一国家兽药残留基准实验室，国内仅四家国家兽药安全评价中心国家兽药安全评价（环境评估）实验室农业部兽药安全监督检验测试中心（北京）中国农业大学“211工程”农产品安全研究中心“985工程”农产品加工与食品安全创新平台农业部兽药残留和违禁添加物检测重点实验室动物源性食品安全检测技术北京市重点实验室北京维德维康生物技术有限公司当前第1页\共有61页\编于星期二\12点研究方向细菌耐药性产生与扩散及风险评估兽药残留检测技术（包括快速检测产品研发）兽医毒理学（包括环境生态毒理学）药物动力学及新兽药创制当前第2页\共有61页\编于星期二\12点研究队伍现有工作人员32名，其中具有高级技术职称的15人，具有博士学位的11人。国家973项目首席科学家1名，教育部长江学者1名，新世纪人才2名。在读硕士、博士近70名。专业涉及兽医学、兽医药理学与毒理学、兽医微生物学、药物学、分析化学、免疫化学、标准化等多个领域，组成了一支多学科的科研教学队伍。当前第3页\共有61页\编于星期二\12点主要研究成果近五年先后承担国家科技支撑计划项目、973项目、行业公益项目、国家杰出青年基金项目、国家自然科学基金重点项目等40余项，总经费超过1亿元。在国内外重要学术刊物上发表论文300余篇，其中SCI收录172篇；制定国家和行业兽药残留检测方法标准70项：研发出具有自主知识产权药物残留检测试剂盒和试纸条产品60余种，其中20种获得农业部批准备案文号；获得国家发明专利33项。研究成果获得国家科学技术进步二等奖1项，北京市科学技术一等奖1项和北京市科学技术二等奖2项。已培养博士研究生65名，硕士研究生近200名。当前第4页\共有61页\编于星期二\12点主要内容一、畜牧水产养殖业及动物性产品简况二、动物源食品安全现状三、瘦肉精主要种类四、国内外瘦肉精残留限量标准五、残留检测技术六、瘦肉精检测方法标准当前第5页\共有61页\编于星期二\12点中国是养殖业大国，其中：猪，66686.4万头奶牛，1420.1万头禽，110亿羽羊，28087.9万只一、畜牧水产养殖业及动物源性产品简况数据来源：中国统计年鉴（2011）当前第6页\共有61页\编于星期二\12点中国又是动物源性产品生产和消费大国，其中：肉类，7925.8万吨，人均达59kg；蛋类，2762.7万吨，人均达21kg；奶类，3748万吨，人均达28kg；水产品，5373万吨，人均达40kg。数据来源：中国统计年鉴（2011）当前第7页\共有61页\编于星期二\12点二、动物源食品安全现状全球经济一体化和食品贸易国际化使食品安全成为一个世界性的挑战和全球重要的公共卫生问题。其中外源化合物（兽药、药物添加剂、违禁药物等）残留超过最高残留限量标准以及临床使用不遵守休药期是影响动物源食品安全的最主要因素之一。尽管世界各国采取了一系列政策和监控措施，但世界范围内涉及食品安全的恶性、突发事件时有发生，食品安全现状仍然令人担扰。我国目前动物性食品抽检比例低，且大多数为出口食品。当前第8页\共有61页\编于星期二\12点部分“瘦肉精”事件2012年2月-9月，辽宁曝光8起瘦肉精事件，肉牛、猪检测出瘦肉精2012年2月，国家体育总局发文，称猪牛羊肉可能含兴奋剂，规定国家队成员不能在外用餐；2012年7月女排比赛失利归咎于瘦肉精。

2011年10月，山东利津“瘦肉精”羊事件2011年3月，双汇“瘦肉精”猪被央视曝光2010年9月，深圳市民吃蛇肉中毒2010年4月，广州70余人“瘦肉精”中毒2009年4月，阜阳产雨润牌午餐肉检出瘦肉精，食用可能中毒2009年2月19日，广州出现了“瘦肉精”中毒事件，累计有70人出现中毒情况。2008年11月，浙江嘉兴70余人吃红烧肉中毒2007年3月，广东江门市一家6口喝猪肺汤中毒当前第9页\共有61页\编于星期二\12点2006年9月，上海300余人中毒2006年3月，广东东莞6人中毒，1人死亡2005年9月，上海6人2004年8月，上海22人2003年10月，杭州22人2003年10月，辽宁辽阳发生39人2003年3月，广东佛山近百人中毒2002年4月，广东湛江35人中毒2001年11月，广东河源近500人中毒2001年11月，北京出现首例14人中毒2001年8月，广东信宜530人提示：目前发生的中毒事件都是由克伦特罗引起的。当前第10页\共有61页\编于星期二\12点瘦肉精相关案件2011年4月至今，全国公安机关共破获食品非法添加案件1200余起，抓获犯罪嫌疑人2000余名。其中，在“瘦肉精”破案会战中，各地共侦破案件120起，抓获涉案人员980多名。2011年8月，河北昌黎，瘦肉精喂羊，养羊户被判刑5年。2011年8月，河南获嘉，韩文斌等人非法经营瘦肉精，判处1到10年。2011年7月，河南沁阳，王二团等人违规出具检疫证明，判处5-6年有期徒刑。

2011年7月，河南焦作，刘襄等人非法生产瘦肉精，判处9年到死缓不等。2011年6月，吉林伊通，刘春成等人非法销售瘦肉精，判处4-6年。2010年3月，广州市刑拘15人。2009年5月，浙江嘉兴王云水投毒瘦肉精，判处8年。2006年，江西12人因制售使用瘦肉精被刑拘。2004年9月，浙江衢州姜土寿生产、销售瘦肉精判处1年半。当前第11页\共有61页\编于星期二\12点三、瘦肉精主要种类主要包括克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等，因其具有肾上腺素样作用，可缓解、消除或预防支气管哮喘。除莱克多巴胺外，克伦特罗、沙丁胺醇、特布他林等β-受体激动剂在人医临床上作为平喘的处方药广泛使用。当前第12页\共有61页\编于星期二\12点11种受体激动剂的结构式当前第13页\共有61页\编于星期二\12点在生猪和反刍动物饲养过程中如果给予一定量的β-受体激动剂，能够改变营养的代谢途径，促进动物肌肉、特别是骨胳肌蛋白质的合成，加速脂肪的分解与转化，可使饲料转化率，生长速率，胴体瘦肉率明显增加，所以在畜牧养殖业上该类化合物被统称为“瘦肉精”。当前第14页\共有61页\编于星期二\12点肉色鲜红，脂肪层极薄，往往是皮贴着瘦肉，瘦肉丰满，后臀肌肉饱满突出，但肥肉和瘦肉明显分离，组织疏松。健康正常猪肉肉色淡红，肉质弹性好，组织紧密，肥瘦交替，肉皮与瘦肉之间脂肪（膘）厚约1.5cm。当前第15页\共有61页\编于星期二\12点该类药物毒副作用较大，人使用后可能出现肌肉振颤、心慌、战栗、头疼、恶心、呕吐等不良反应症状，特别是对高血压、心脏病、甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更大，严重的可导致死亡。这类药物如果用于食品动物，易在动物组织，尤其是内脏中残留。

当前第16页\共有61页\编于星期二\12点该类药物主要在肝脏、肺脏等组织蓄积，据报道，犊牛肝脏中克伦特罗残留量可达到5000ppb。我国百姓自古以来就有喜爱食用内脏的习惯，所以我国禁止包括莱克多巴胺在内的所有β-受体激动剂用于食品动物。当前第17页\共有61页\编于星期二\12点猪以20ppm莱克多巴胺添加浓度饲喂后残留消除情况强志懿，中国农业大学硕士论文注：给药饲喂7天，数据来源于美国礼来公司当前第18页\共有61页\编于星期二\12点注：给药30天，数据来源于FoodChemistry,127(2011)327–332当前第19页\共有61页\编于星期二\12点1987年欧盟、美国就宣布禁止使用克伦特罗作为兽用饲料添加剂。莱克多巴胺在美国、加拿大、墨西哥等20余个美洲和亚太国家批准用于猪和反刍动物，组织残留限量要求在30-150ppb之间。欧盟则禁止使用莱克多巴胺。当前第20页\共有61页\编于星期二\12点四、国内外瘦肉精残留限量标准（一）国外残留限量标准国家药物靶动物残留限量（µg/kg）欧盟克伦特罗牛肌肉：0.1；肝脏：0.5；肾脏：0.5；牛奶：0.05马肌肉：0.1；肝脏：0.5；肾脏：0.5美国莱克多巴胺牛肝脏：90；肌肉：30猪肝脏：150；肌肉：50当前第21页\共有61页\编于星期二\12点（一）国外残留限量标准国家药物靶动物残留限量（µg/kg）日本克伦特罗牛肝脏：0.6；肌肉：0.2猪肝脏：不得检出；肌肉：不得检出日本莱克多巴胺牛肝脏：40；肌肉：10猪肝脏：40；肌肉：10注：其他受体激动剂未见限量标准当前第22页\共有61页\编于星期二\12点OnJuly5th,the35thannualmeetingoftheCodexAlimentariusCommission(CAC)approvedbyavoteof69to67,maximumquantitiesofractopamineresidueinmeatproducts.TheCACadoptedthemaximumallowablelevelofractopamineresidueinbeefandporkmuscleandfatat10ppb(partsperbillion),40ppbinbeefandporkliver,and90ppbinbeefandporkkidneys,whilenostandardwassetforturkey.2012年7月5日，CAC第35届年会上69票赞成，67票反对，通过了莱克多巴胺在组织中的最大残留限量。牛肉和猪肉，10ppb，牛肝和猪肝，40ppb，牛肾和猪肾，90ppb。当前第23页\共有61页\编于星期二\12点欧盟、中国、俄罗斯、印度等仍然坚持反对。当前第24页\共有61页\编于星期二\12点农业部176号公告颁布5类40种禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种。

农业部193号公告颁布了21种食品动物禁用的兽药及其它化合物清单。农业部1519号公告颁布了11种禁止在饲料和动物饮水中使用的物质。农业部235号公告中颁布了109种兽药的限量标准，涉及马、牛、羊、猪、禽、蜜蜂、鱼、虾等动物。样品有组织（肌肉、肝脏、肾脏、脂肪等）、牛奶、蜂蜜等。（二）我国残留限量标准当前第25页\共有61页\编于星期二\12点农业部、卫生部和国家药品监督管理局联合出台了《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药品目录》

（农业部公告176号）一、肾上腺素受体激动剂

盐酸克仑特罗、沙丁胺醇、硫酸沙丁胺醇、莱克多巴胺、盐酸多巴胺、西马特罗、硫酸特布他林当前第26页\共有61页\编于星期二\12点二、性激素

乙烯雌醇、雌二醇、戊酸雌二醇、苯甲酸雌二醇、氯烯雌醚快诺醇、炔诺醚、醋酸氯地孕酮、左快诺孕酮、快诺酮、绒毛膜促性腺激素（绒促性素）、促卵泡生长激素三、蛋白同化激素

碘化酪蛋白、苯丙酸诺龙及苯丙酸诺龙注射液四、精神药品盐酸氯丙嗪、盐酸异丙嗪、安定（地西泮）、苯巴比妥、苯巴比妥钠、巴比妥、异戊巴比妥、异戊巴比妥钠、利血平、艾司唑仑、甲丙氨脂、咪达唑仑、硝西洋、奥沙西洋、匹莫林、三唑仑、唑吡旦、其他国家管制的精神药品。五、各种抗生素滤渣

当前第27页\共有61页\编于星期二\12点农业部193号公告

食品动物禁用的兽药及其它化合物清单序号兽药及其它化合物名称禁止用途禁用动物1β-兴奋剂类：克仑特罗、沙丁胺醇、西马特罗及其盐、酯及制剂所有用途所有食品动物2性激素类：己烯雌酚及其盐、酯及制剂所有用途所有食品动物3具有雌激素样作用的物质：玉米赤霉醇、去甲雄三烯醇酮、醋酸甲孕酮及制剂所有用途所有食品动物4氯霉素、及其盐、酯（包括：琥珀氯霉素）及其制剂所有用途所有食品动物5氨苯砜及制剂所有用途所有食品动物6硝基呋喃类：呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃苯烯酸钠及制剂所有用途所有食品动物7硝基化合物：硝基酚钠、硝呋烯腙及制剂所有用途所有食品动物8催眠、镇静类：安眠酮及制剂所有用途所有食品动物9林丹（丙体六六六）杀虫剂所有食品动物10毒杀芬（氯化烯）杀虫剂、清塘剂所有食品动物当前第28页\共有61页\编于星期二\12点序号兽药及其它化合物名称禁止用途禁用动物11呋喃丹（克百威）杀虫剂所有食品动物12杀虫脒（克死螨）杀虫剂所有食品动物13双甲脒杀虫剂水生食品动物14酒石酸锑钾杀虫剂所有食品动物15锥虫胂胺杀虫剂所有食品动物16孔雀石绿抗菌剂、杀虫剂所有食品动物17五氯酚酸钠杀螺剂所有食品动物18各种汞制剂包括：氯化亚汞（甘汞）、硝酸亚汞、醋酸汞、吡啶基醋酸汞杀虫剂所有食品动物19性激素类：甲基睾丸酮、丙酸睾酮、苯丙酸诺龙、苯甲酸雌二醇及其盐、酯及制剂促生长所有食品动物20催眠、镇静类：氯丙嗪、地西泮、及其盐、酯及制剂促生长所有食品动物21硝基咪唑类：甲硝唑、地美硝唑及其盐、酯及制剂促生长所有食品动物当前第29页\共有61页\编于星期二\12点农业部1519号公告

禁止在饲料和动物饮水中使用的物质

苯乙醇胺A（PhenylethanolamineA）：β-肾上腺素受体激动剂。班布特罗（Bambuterol）：β-肾上腺素受体激动剂。盐酸齐帕特罗（ZilpaterolHydrochloride）：β-肾上腺素受体激动剂。盐酸氯丙那林（ClorprenalineHydrochloride）：药典2010版二部P783。β-肾上腺素受体激动剂。马布特罗（Mabuterol）：β-肾上腺素受体激动剂。西布特罗（Cimbuterol）：β-肾上腺素受体激动剂。溴布特罗（Brombuterol）：β-肾上腺素受体激动剂。酒石酸阿福特罗（ArformoterolTartrate）：长效型β-肾上腺素受体激动剂。富马酸福莫特罗（FormoterolFumatrate）：长效型β-肾上腺素受体激动剂。盐酸可乐定（ClonidineHydrochloride）：药典2010版二部P645。抗高血压药。盐酸赛庚啶（CyproheptadineHydrochloride）：药典2010版二部P803。抗组胺药。当前第30页\共有61页\编于星期二\12点瘦肉精发展新情况当前第31页\共有61页\编于星期二\12点1、老药新对象克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇用于牛羊兔禽等。2、新药老对象苯乙醇胺A用于猪；在国家残留监控中，检测猪肉、猪肝9种激动剂，猪尿检测3种。3、非饲料添加使用（1）添于垫料，经皮肤吸收；（2）屠宰前使用，注水增重。当前第32页\共有61页\编于星期二\12点五、残留检测技术残留分析一般程序

先用快速检测产品（试剂盒或试纸条）进行筛查，可疑阳性样品再用仪器分析方法尤其是色质联用检测方法加以确证。美国、欧盟和日本等发达国家均按此程序进行。当前第33页\共有61页\编于星期二\12点各种测定方法的灵敏度范围10-1210-910-610-3紫外/可见分光光度法放射免疫测定法/酶免疫测定法色质联用分析放射受体分析气相色谱(ECD/NPD)气相色谱(FID)高效液相色谱(FLD/UVD)时间分辨免疫/化学发光免疫荧光分光光度法微生物测定法比色法10-15当前第34页\共有61页\编于星期二\12点（一）色谱分析技术气相色谱法（GC）高效液相色谱法（HPLC）超高效液相色谱法（UPLC）气谱-质谱法（GC-MS）气谱-串联质谱法（GC-MS/MS）液谱-质谱法（LC-MS）液谱-串联质谱法（LC-MS/MS）其他新技术，如飞行时间质谱等当前第35页\共有61页\编于星期二\12点兽药残留实验技术规范，农牧发[2003]1号瘦肉精仪器检测方法（HPLC、LC-MS/MS等）检测限为0.5-2ppb。当前第36页\共有61页\编于星期二\12点精确度高假阳性率低较高的灵敏度重现性好效率较高准确度高优点当前第37页\共有61页\编于星期二\12点需要专业操作人员仪器难以普及成本高操作繁琐缺点当前第38页\共有61页\编于星期二\12点酶联免疫吸附测定法化学发光免疫测定法荧光偏振免疫测定法量子点标记荧光测定法时间分辨荧光免疫测定法胶体金免疫测定法放射免疫测定法微生物抑制测定法生物传感器生物芯片（二）快速检测技术当前第39页\共有61页\编于星期二\12点1、酶联免疫吸附测定法基本原理在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体与固相载体表面的抗原或抗体起反应，结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量有一定的比例，加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。

当前第40页\共有61页\编于星期二\12点1、加入待测物；2、加入抗体；3、加入酶标二体；4、加入底物；5、加入终止液目前最常用方法为间接竞争ELISA法，其他还用直接法、夹心法等。当前第41页\共有61页\编于星期二\12点优点

灵敏度高，特异性强，可进行定性和定量测定检测方便、快捷，一般1-2个小时就能出结果对操作者和实验室条件要求不高可以用于大量样本的快速筛选当前第42页\共有61页\编于星期二\12点目前市场上兽药等残留检测ELISA试剂盒品种有数十个，克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等试剂盒产品非常成熟。

96孔酶标版样品稀释液标准溶液底物溶液终止液酶标二抗工作液浓缩洗涤液抗体工作液当前第43页\共有61页\编于星期二\12点瘦肉精检测ELISA试剂盒药物样品检测限（ppb）检测时间克伦特罗尿液、组织、血清、饲料0.1、0.1、0.2、501-2h莱克多巴胺尿液、组织、血清、饲料0.1、0.5、0.3、501-2h沙丁胺醇尿液、组织、血清、饲料0.2、0.5、0.2、21-2h当前第44页\共有61页\编于星期二\12点方法名称灵敏度级别本底干扰单个样品检测时间酶联免疫吸附10-8-10-10一般1h左右化学发光免疫10-12-10-15小1h左右荧光偏振免疫10-8-10-10小5-10min量子点标记免疫10-9-10-10一般0.5h左右时间分辨免疫10-15-10-19几乎为零1h左右试剂盒方法比较当前第45页\共有61页\编于星期二\12点2、胶体金免疫测定法试纸条结构采用竞争法，样品滴入后，在层析作用下经胶体金标记抗体的结合垫，再流经包被抗原和二抗的T线和C线，若样品中含有药物，药物与金标抗体结合后不再与抗原反应，T线不显色；若不含药物，则金标抗体与抗原反应，T线显色；无论有无药物，二抗与金标抗体均反应，即C线显色。当前第46页\共有61页\编于星期二\12点优点灵敏度高，特异性强检测方便、快捷，一般3-5分钟就能出结果几乎不需要任何仪器设备可用于大量样本的快速筛选，适用于现场检测当前第47页\共有61页\编于星期二\12点检测卡组成当前第48页\共有61页\编于星期二\12点试纸条的一般检测步骤1、样品前处理对尿液、血清等样品，只需进行简单稀释即可；对猪肉等组织样品，通过提取或加热处理后，进行稀释；2、取出检测卡，平放到桌面上，用一次性吸管吸取样品处理液，在加样孔中加入3-4滴；3、5min后观察结果；4、结果判定。当前第49页\共有61页\编于星期二\12点阴性：C线显色，T线有颜色，无论颜色深浅均判为阴性。阳性：C线显色，T线无颜色，判为阳性。无效：C线不显色，无论T线是否有无，该试纸条均判为无效。结果判定当前第50页\共有61页\编于星期二\12点瘦肉精检测卡药物样品检测限（ppb）检测时间克伦特罗尿液、血清、肌肉、饲料2、3、5、1005min莱克多巴胺尿液、血清、肌肉、饲料3、3、8、1005min沙丁胺醇尿液、血清、肌肉、饲料5、5、10、1005min当前第51页\共有61页\编于星期二\12点3、多残留检测胶体金层析技术在传统胶体金层析技术的基础上，在硝酸纤维素膜上包被多条检测线，实现“一条多检”。检测更加快捷、方便。克伦特罗-莱克多巴胺、喹诺酮类-庆大霉素、磺胺类-喹诺酮类、三聚氰胺-庆大霉素-四环素类T1T2T3C当前第52页\共有61页\编于星期二\12点快速筛查原则“在快速筛查技术研究中，国内外的一个基本原则是’绝不能有假阴性，但允许有假阳性’，也就是说，快速筛查为阴性的样品，肯定不含瘦肉精，而筛查为阳性的样品，可以有误判。”——河南农科院张改平院士接受中央电视台采访时谈到当前第53页\共有61页\编于星期二\12点2001年至今，先后颁布了39项瘦肉精残留检测方法国家标准、行业标准以及地方标准。主要为液相色谱-质谱法、气相色谱-质谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法、胶体金免疫层析法等。六、残留检测方法标准当前第54页\共有61页\编于星期二\12点GB/T5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的测定GB/T21313-2007动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法GB/T22147-2008饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定液相色谱质谱联用法GB/T22286-2008动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法农业部1025号公告-18-2008动物源性食品中β-受体激动剂残留检测液相色谱-串联质谱法农业部1025号公告-16-2008动物尿液中盐酸克伦特罗残留检测气相色谱-质谱法农业部1025号公告-11-2008猪尿中β-受体激动剂多残留检测液相色谱-串联质谱法NY438-2001饲料中盐酸克仑特罗的测定当前第55页\共有61页\编于星期二\12点农业部958号公告-8-2007牛可食性组织中克仑特罗残留检测方法气相色谱-质谱法农业部1063号公告-7-2008饲料中8种β-受体激动剂的检测气相色谱-质谱法农业部1063号公告-6-2008饲料中13种β-受体激动剂的检测液相色谱-串联质谱法农业部1063号公告-3-2008动物尿液中11种β-受体激动剂的检测液相色谱-串联质谱法农业部1031号公告-3-2008猪肝和猪尿中β-受体激动剂残留检测气相色谱-质谱法NY/T468-2006动物组织中盐酸克伦特罗的测定气相色谱-质谱法NY/QY421-2003动物尿液中盐酸克伦特罗（瘦肉精）残留的检测－气相色谱/质谱（GC/MS）方法NY/T933-2005尿液中盐酸克仑特罗的测定胶体金免疫层析法NY/T1460-2007饲料中盐酸克仑特罗的测定酶联免疫吸附法当前第56页\共有61页\编于星期二\12点DB33/T454-2003动物血清中盐酸克伦特罗残留的检测方法DB33/T455-2003动物毛发中盐酸克伦特罗残留的检测方法DB33/T623-2006动物尿液中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺残留量的测定气相色谱-质谱法DB33/T624-2006动物组织中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺残留量的测定气相色谱-质谱法DB34/T818-2008饲料中盐酸克伦特罗的测定-胶体金免疫层析法DB34/T823-2008动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定——酶联免疫吸附法D