3年生物高考题-选修三

基因工程

选择题

（13年江苏-22）小鼠杂交瘤细胞表达的单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应，为了克

服这个缺陷，可选择性扩增抗体的可变区基因（目的基因）后再重组表达。下列相关叙述正

确的是

A.设计扩增目的基因的引物忖不必考虑表达载体的序列

B.用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列

C.PCR体系中一定要添加从受体细胞中提取的DNA聚合酶

D.一定要根据目的基因编码产物的特性选择合适的受体细胞

【答案】BD

【解析】设计引物时应当与表达载体两端的序列进行万.补配对A错误；PCR法扩增目的基

因只需要知道基因两端的序列设计合适的引物即可，而不必知道其全部序列，B正确；PCR中

应用耐高温的DNA聚合酣C错误；根据H的基因的编码产物选择合适的受体细胞，以有利于

基因的表达，1）正确，因此答案为BD。

【试题评价】本题主要考查基因工程中PCR技术等相关知识，旨在考查学生的理解分析

能力。

（13年安徽-6）下图为通过DNA分子杂交鉴定含有某特定DNA的细菌克隆示意图。下列叙述

正确的是

的州ISH

前落附GGHLh,MR

MO-在ILt例■植

7ftDNAtit优去桃合Mtt

楙则咆；MHI

族W的加曲曲落

A.根据培养皿中菌落数可以准确计算样品中含有的活菌实际数目

B.外源DNA必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行复制

C.重组质粒与探针能进行分子杂交是因为DNA分子脱氧核糖和磷酸交替连接

D.放射自显影结果可以显示原培养皿中含有特定DNA的细菌菌落位置

【答案】D

【解析】稀释涂布平板法可以测定活菌数量，但如果菌种之间的距离较小时会有多个活菌种

共同形成一个菌落的现象，菌落数只能大约推测出活菌数，因而往往不准确。启动子与终止

子之间的部分是基因转录区段，只有在复制子下游，就可以复制，与启动子无关。所有DNA

分子都是脱氧核糖和磷酸交替连接，是共性，不同的碱基序列才是DNA分子的特异性，DNA分

子杂交原理是相应碱基序列的互补配对。显然D项正是本题的结论：通过DNA分子杂交鉴定

含有某特定DNA的细菌克隆。因为放射性标记的DNA探针能与相应的DNA杂交，而产生放射

自显影，而只有特定的DNA才与探针相结合，所以可以显示原培养皿中含有特定DNA的细菌

菌落位置，D正确。

【试题点评】本题主要考查细菌培养和基因工程等有关知识，选修内容回归选择题，难

度适中。

解析：考查识图和获取信息能力和微生物知识。

有可能两个或多个细菌聚集在一起，只形成一个菌落，所以菌落数不能准确计算样品中含有

的活菌实际数目。因为质粒上有复制原点，所以用组质粒都可以复制，但基因要位于启动子

和终止子之间才能表达，重组质粒和探针能进行分子杂交原理是碱基互补。胶片中细菌是从

原培养基上影印下来，与原位置相同。

（A选项错误，根据培养皿中菌落数不能准确计算样品中含有的活菌实际数目；B选项的描述

有益于基因转录表达，B选项错误；重组质粒与探针能进行分子杂交是因为DNA分子单链间的

碱基序列存在一一对应关系，C选项错误；实验流程图直观表明，D选项描述正确。】

（13年江苏一15）下列关于转基因生物安全性的叙述中，错误的是

A.我国一经对转基因食品和转基因农产品强制实施了产品标识制度

B.国际上大多数国家都在转基因食品标签上警示性注明可能的危害

C.开展风险评估、预警跟踪和风险管理是保障转基因生物安全的前提

D.目前对转基因生物安全性的争论主要集中在食用安全性和环境安全性上

【答案】B

【解析】转基因生物是否存在安全问题，尚在争论之中，国家为了维护消费者对转基因

产品的选择权和知情权，一般会加贴标注，但不会警示性注明可能的危害，B错误。

（13年广东-3）从某海洋动物中获得一基因，其表达产物为一种抗菌性和溶血性均较强的多

肽P1。目前在P1的基础上研发抗菌性强但溶血性弱的多肽药物，首先要做的是

A.合成编码目的肽的DNA片段

B.构建含目的肽DNA片段的表达教体

C.依据P1氨基酸序列设计多条模拟肽

D.筛选出具有优良活性的模拟肽作为目的肽

【答案】C

【解析】山题可知，要设计出抗菌性强但溶血性弱的多肽P1,即在P1的基础之上设计出自然

界原本不存在的蛋白质，可用蛋白质工程技术来实现。蛋白质工程的第•步是根据蛋白质的

功能来设计预期的蛋白质结构，即题干中“依据P1氨基酸序列设计多条模拟肽”，答案为C。

【解析】山题可知多肽P1为抗菌性强和溶血性也强的多肽，但是要设计出抗菌性强但溶血性

弱的多肽，即在P1的基础之上设计出自然界原本不存在的蛋白质，应用蛋白质工程，依据P1

氨基酸序列设计多条模拟肽，即答案为C。

【试题点评】本题以多肽药物的研发为情境，考查蛋白质工程技术的基本过程，旨在考查应

用能力。难度较小.

非选择题

（13年广东-28）（16分）地中海贫血症属于常染色体遗传病。一对夫妇生有一位重型B地

中海贫血症患儿，分析发现，患儿血红蛋白B链第39位氨基酸的编码序列发生了点突变

（C-T）。用PCR扩增包含该位点的一段DNA片段1,突变序列的扩增片段可用一种限制酶酶

切为大小不同的两个片段必和s；但正常序列的扩增片段不能被该酶酶切，如图11（a）o目

前患儿母亲再次怀孕，并接受了产前基因诊断。家庭成员及胎儿的PCR扩增产物酶切电泳带

型示意图见图11（b）。（终止密码子为UAA、UAG、UGA»）

母亲父亲患儿胎儿

383940点样孔匚二）匚二1匚二1匚二।

正常...................................ACCCAGAGG-—

序列转录模板连...................................TGGGTCTCC--------

F.............................(1

...................................ACCTAGAGG……—m

转录模板连—............................TGGATCTCC...........

f、一示PCR引物

图11(a)图11(b)

（1）在获得单链模板的方式上，PCR扩增与体内DNA复制不同，前者通过解

开双链，后者通过解开双链。

（2）据图分析，胎儿的基因型是（基因用A、a表示）。患儿患病可能的原因是

一的原始生殖细胞通过过程产生配子时，发生了基因突变；从基因

表达水平分析，其患病是由于。

（3）研究者在另一种贫血症的一位患者P链基因中检测到•个新的突变位点，该突变

导致B链第102位的天冬酰胺替换为苏氨酸。如果，但.，则为证

明该突变位点就是这种贫血症的致病位点提供了一个有力证据。

【答案】

（1）高温解旋酶

（2）Aa母亲减数分裂mRNA上编码第39位氨基酸的密码子变为终止密码子，

B链的合成提前终止，P链变短而失去功能

（3）在无亲缘关系的这种贫血症患者中检测到该突变位点正常人为未检测到该突

变位点的纯合子

【解析】

（1）PCR是体外扩增DNA的方式，通过高温使双链之间的短键断裂，从而解开双链；而

生物体内的DNA的复制则是通过解旋能使DNA双链之间的氢键断裂来解开双链的。

（2）由“一对夫妇生有一位重型B地中海贫血症患儿”可推出，重度P地中海贫血是隐性

遗传病。结合题干中“用PCR扩增包含该位点的一段DNA片段乙突变序列的扩增片段可用

一种限制酶酶切为大小不同的两个片段R和s”和图11（b）,可推出电泳结果中存在1片段

者，存在A基因；存在巾和$片段者，存在a基因，因此我们可推出母亲、父亲、患儿和胎

儿的基因型分别为：AA、Aa、aa和Aa。母亲和父亲的基因型为AA和Aa,患儿的•个a基因

来自父亲，另一个a基因可能是因为母亲的原始生殖细胞进行减数分裂的过程发生生了基因

突变，使得配子中的A基因变成a基因。山图11（a）可知，该突变导致模板链中的CTC突变

成ATC,相应mRNA上的密码子由GAG变成UAG,导致终止密码子提前出现，使翻译提前终止。

【解析】（1）PCR是体外扩增DNA的方式，通过高温的使双链解开，体内DNA的复制则是通过

解旋酶使DNA双链解开。

（2）由题意可知重度B地中海贫血是隐性遗传病，突变后的序列可以被剪切成m和s的两

个片段，而正常序列无法被剪切，因此母亲、父亲、患儿和胎儿的基因型分别为：AA、Aa、

aa和IAa,母亲和父亲的基因型为AA和Aa,生下患儿可能是因此母亲的原始生殖细胞通过减

数分裂产生配子时发生了基因突变。由图可知，其突变为由模板链的CTC突变成ATC,mRNA

上由GAG变成UAG,因此终止密码子提前出现，使翻译提前终止。

如果这种贫血病可以遗传给后代,，而乂能证实不是重型地中海贫血，即B链不能被限制性

酶切割，则为证明该突变位点就是这种贫血病的致病点提供了有力证据。

（13年上海一6）回答下列有关遗传信息传递和表达的问题。（9分）

9。冬人

0致病病

£««««Nd

图17

图17表示利用致病病毒M的表面蛋白基因和无害病毒N,通过基因工程制作重组M病毒

疫苗的部分过程。其中①〜⑤表示操作流程，a〜h表示分子或结构。据图回答问题。

56.基因工程除了微生物基因工程外，还有。在图17所示过程

中，获取目的基因的步骤是流程（用图中编号回答）；在流程③中

必需实施的步骤有。

57.在图17所示的整个过程中，用作运载体的DNA来自分子（用图中字母回答）.

58.下列关于质粒运载体的说法正确的是（多选）。

A.使用质粒运载体是为了避免目的基因被分解

B.质粒运载体只能在与目的基因重组后进入细胞

C.质粒运载体可能是从细菌或者病毒的DNA改造的

D.质粒运载体的复制和表达也遵循中心法则

E.质粒运载体只有把目的基因整合到受体细胞的DNA中才能表达

F.没有限制酶就无法使用质粒运载体

59.据图比较结构g和结构h的异同，并解释产生差异因。

【答案】

56.植物基因工程、动物基因工程①、②切割质粒、将质粒与目的基因重组

57.c^d

58.A>D、F

59.相同点：遗传物质相同；不同点：表面蛋白质不同。

差异的原因：因为g导入受体细胞后，目的基因得以表达，合成了致病病毒M的表面

蛋白

【解析】基因工程有植物基因工程、动物基因工程和微生物基因工程。

(13年新课标1-40)(15分)阅读如下材料:

材料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵在，得到了体型巨大的“超级小鼠”；

科学家采用农杆菌转化法培育出转基因烟草。

材料乙：T,溶菌酶在温度较高时易失去活性，科学家对编码T」溶菌酶的基因进行改造，

使其表达的T，溶菌酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97为的半胱氨酸

之间形成了一个二硫键，提高了「溶菌酶的耐热性。

材料丙：兔甲和兔乙是同一物种的两个雌性个体，科学家将兔甲受精卵发育成的胚胎移

植到兔乙的体内，成功产出兔甲的后代，证实了同一物种的胚胎可在不同个体的体内发育。

回答下列问题：

(1)材料甲属于基因工程的范畴。将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用

法。构建基因表达载体常用的工具酶有和。在培育转基因植物是,

常用农杆菌转化发，农杆菌的作用是.

(2)材料乙属于工程范畴。该工程是指以分子生物学相关理论为基础,

通过基因修饰或基因合成，对进行改造，或制造制造一种的技

术。在该实例中，引起T,溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶肽链的序列

发生了改变。

(4)材料丙属于胚胎工程的范畴。胚胎移植是指将获得的早期胚胎移植到种的、

生理状况相同的另一个雌性动物体内，使之继续发育成新个体的技术。在资料丙的实例中，

兔甲称为体，兔乙称为体。

【答案】

(1)显微注射法限制性内切酶DNA连接酶农杆菌可感染植物，将目的基因转移到受体

细胞中

(2)蛋白质现有蛋白质新蛋白质氨基酸(3)同供体受体

【解析】

(1)将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用显微注射法，构建基因表达载体常用的工具

酶是限制性内切酶和DNA连接酶。农杆菌的作用是将目的基因导入到植物（受体）细胞内。

（2）资料乙中的技术属于蛋白质工程的范畴，该工程是指以分子生物学相关理论为基

础，通过对基因修饰或基因合成，对现有的蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质的技术。

在该实例中，引起T4溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶肽链的氨基酸序列发生「改变。

（3）胚胎移植是指将获得的早期胚胎移植到同种的、生理状态相同的另一个雌性动物体

内，使之继续发育为新个体的技术。在资料丙实例中，兔甲称为供体，兔乙称为受体。

【试题点评】本题通过基因工程和胚胎工程知识结合，主要考查对基础知识的理解和识记

能力。

（12年新课标一40）根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

浓度/mglI

培养基编号m/%n/个

6-BAIAA

1076.73.1

20.50.177.46.1

30.266.75.3

40.560.05.0

（1）限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有粘性末端和平末端。

（2）质粒运载体用EcoRI切割后产生的片段如下：

AATTC......G

G......CTTAA

为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRI切割外，还可用另一种

限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是切割产生的DNA片段末端可EcoR1切割产生的

相同。

（3）按其来源不同，基因工程找那个所使用的DNA连接能有两类，即大肠杆菌DNA连接

酶和T4_DNA连接酶。

（4）反转录作用的模板是mRNA（或RNA）,产物是cDNA（或DNA）。若要在体外获得

大量反转录产物，常采用PCR技术。

（5）基因工程中除质粒外，噬菌体和动植物病毒也可作为运载体。

（6）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体

细胞，原因是未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱。

（12年-福建-32）（10分）肺细胞中的let7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。

研究人员利用基因工程技术将let-7基因导人肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑

制。该基因工程技术基本流程如图1。

「”•7基因R4S基因

传代培养请回

肺痛细胞答：

图I图2(1)

进行过程①时，需用酶切开载体以插入let-7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合

的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为。

(2)进行过程e委时，需用酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。

(3)研究发现，如let-7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可

从细胞中提取.

进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能

是由于细胞中(RASmRNA/RAS蛋白质)含最减少引起的。

答案：⑴限制(限制性核酸内切)启动子⑵胰蛋白酶⑶RNARAS蛋白质

解析：本题主要考查基因工程的相关知识。切开载体以插入H的基因需要用限制酶，限制酣

能在特定的系列中的特定位点上将DNA切断；启动子是位于目的基因首端，是RNA聚合酶识

别和结合的部位。在动物细胞培养的过程中，要用胰蛋白酣或者胶原蛋白酶将组织细胞分散

开，有利于细胞直接从培养中吸取营养物质并派出代谢废物，同时解除接触抑制有利于细胞

增殖。如果let-7基因进行转录，细胞中就会出现miRNA,用基因探针检测细胞中是否出现miRNA

来判断let-7基因是否进行转录，那么应该提取细胞所有的RNA与相应的基因探针进行分子杂

交。由图可知癌细胞受到抑制的机理是let-7基因转录形成miRNA与癌基因RAS转录形成的

RASRNA进行配对，从而阻止RASRNA的翻译，从而减少RAS蛋白质的含量。

(12年海南-31)(15分)已知甲种农作物因受到乙种昆虫危害而减产，乙种昆虫食用某种原

核生物分泌的丙种蛋白质后死亡.因此，可将丙种蛋白质基因转入到甲种农作物体内，使甲

种农作物获得抗乙种昆虫危害的能力。

回答下列问题:

(1)为了获得丙中蛋白质的基因，在已知丙种蛋白质氨基酸序列的基础上，推测出丙中

蛋白质的序列，据此可利用方法合成目的基因。获得丙中蛋白质的基因还

可用、方法。

(2)在利用上述丙中蛋白质基因和质粒载体构建重组质粒的过程中，常需使用

酶和。

(3)将含有重组质粒的农杆菌与甲种农作物的愈伤组织共培养，筛选出含有丙种蛋白质

的愈伤组织，由该愈伤组织培养成的再生植株可抵抗的危害。

(4)若用含有重组质粒的农杆菌直接感染甲种农作物植株叶片伤口，则该植株的种子

(填"含有"或"不含")丙种蛋白质基因。

【答案】（15分）（1）基因化学基因文库PCR（每空2分，共8分，其他答案也给分）

（2）限制DNA连接（每空1分，共2分）（3）乙种昆虫（2分）

（4）不含（3分）。

【解析】（1）在已知蛋白质的氨基酸序列的情况下，可根据氨基酸和碱基的对应关系，推出

合成该蛋白质的基因序列，然后用DNA合成仪通过化学方法来合成目的基因。此外也可以从

基因文库中获取目的基因，也可通过PCR方法获取目的基因。

（2）构建雨组质粒时，需要用限制酶将运载体切开，并用DNA连接酶将目的基因连接到运载

体上，从而构建基因表达载体。

（3）愈伤组织中含有丙蛋白，说明丙蛋白的基因得到了表达，在培养成的植株体内也含有丙

蛋白，乙昆虫食用丙蛋白后会死亡，则该植株可抵抗乙昆虫的危害。

（4）直接用含有重组质粒的农杆菌直接感染甲种农作物植株叶片伤U,仅仅在该叶片内部分

细胞中能合成丙蛋白，该植株的种子和其他的营养器官均不含有重组质粒，也就不含有丙中

蛋白质的基因。

【试题点评】本题以农作物虫害防治为背景考查基因工程的操作流程、基因工程所用的工具、

获取目的基因的方法、基因表达载体的构建、目的基因的筛选等内容，难度不大。

（12年上海-6）回答下列有关遗传信息传递和表达的问题。（10分）

55.如图18所示,若用两种识别切割序列完全不同的限制成E和F从基因组DNA上切下目

的基因，并将之取代质粒pZHZl（3.7kb,lkb=1000对碱基）上相应的E—'F区域（0.2kb）,那么所

形成的重组质粒PZHZ2。

A.既能被E也能被F切开B.能被E但不能被F切开

C.既不能被E也不能被F切开D.能被F但不能被E切开

ffl18

56.已知在质粒pZHZl中，限制酶G切割位点距限制酶E切割位点0.8kb,限制酶H切割

位点距限制能F切割位点O.5kbo若分别用限制酶G和H酶切两份重组质粒pZHZ2样品，

据表4所列酶切结果判断目的基因的大小为一一kb；并将目的基因内部的限制酶G和H切割

位点标注在图19中。

质粒区域目的基因

（每小格代表0.1kb）

57.若想在山羊的乳汁中收获上述目的基因的表达产物，则需将重组质粒pZHZ2导入至山

羊的细胞中。若PZHZ2进入细胞后插入在一条染色体DNA上，那么获得转基

因纯合子山羊的方式是。

58.上述目的基因模板链中的。TGA序列对应一个密码子，翻译时识别该密码子的tRNA上

.相应的碱基序列是。一般而言，一个核糖体可同忖容纳分子的tRNA。

59.下列四幅图中能正确反映目的基因转录产物内部结构的是。

TSS:转录起始位点，TTS:转录终止位点，STC:起始密码子，SPC:终止密码子

TSSSTCTTSSPCTSSSTCSPCTTS

细胞工程

植物细胞工程

（13年重庆一5）某兴趣小组拟用组织培养繁殖一种名贵花卉，其技术路线为“取材一消毒一

愈伤组织培养一出芽一生根一移栽”。下列有关叙述，错误的是

A.消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害

B.在愈伤组织培养中加入细胞融合的诱导剂，可获得染色体加倍的细胞

C.出芽是细胞再分化的的结果，受基因选择性表达的调控

D.生根时，培养基通常应含a-蔡乙酸等生长素类调节剂

答案：B

【解析】在植物组织培养中，对已经选用的材料消毒，是为了杀死材料表面的微生物，又减

少消毒剂对细胞的伤害，A对；在植物体细胞杂交中，要先加入纤维素酸和果胶酶以除去细胞

壁，再加入细胞融合的诱导剂，才能得到融合的细胞，获得染色体加倍的细胞，B错；细胞分

化是相同细胞的后代在形态结构和生理功能上.发生稳定性差异的过程，是基因选择性表达的

结果，再分化也是受基因选择性表达的调控，C对；外植体脱分化形成愈伤组织，再分化形

成具有根芽的胚状体，在这一过程中要加入生长素和细胞分裂素，a-蔡乙酸为生长素类调节

剂，D对。

【命题透析】本题考查了植物的组织培养，脱分化和再分化，植物体细胞杂交的方法利步骤,

细胞分化的实质，在植物组织培养中植物激素的使用等知识，难度中等。

（13年上海一9）在工业化大量培养植物试管苗的过程中，一般进行如下操作，则正确的操作

顺序是（）

①诱导形成芽②取合适外植体③诱导形成愈伤组织

④诱导形成未分化状态的细胞⑤诱导形成根

A.②①③④⑤B.②④③①⑤C.②③④①⑤D.②⑤①④③

【答案】B

【解析】植物组织培养步骤：1.培养材料的选择与采集（取合适外植体），2.诱导形成未

分化状态的细胞，3.诱导形成愈伤组织，4.诱导形成芽，5.诱导形成根，6.炼苗移栽。

（13年四川一1）在诱导离体菊花茎段形成幼苗的过程中，下列生命活动不会同时发生的是：

A.细胞的增殖和分化B.光能的吸收与转化

C.ATP的合成与分解D.基因的突变与重组

【答案】：D

【解析】：诱导茎分化形成幼苗为有丝分裂，故不可能发生基因重组。故D错误。

(13年江苏一11)某种极具观赏价值的兰科珍稀花卉很难获得成熟种子。为尽快推广种植，

可应用多种技术获得大量优质苗，下列技术中不能选用的是

A.利用茎段杆插诱导生根技术快速育苗

B.采用花粉粒组织培养获得单倍体苗

C.采集幼芽嫁接到合适的其他种类植物体上

D.采用幼叶、茎尖等部位的组织进行组织培养

【答案】B

【解析】茎段托插、幼芽嫁接、植物组织培养都是无性繁殖，可以大量快速得到与原有

性状相同的个体，A、C、D均可选用；采用花粉粒离体培养可获得单倍体幼苗，但由于花粉粒

为雄配子，发育来的单倍体植株会发生性状分离，不能保持亲代的优良性状，B错误。

【试题评价】此题考查无性繁殖及单倍体植株的特点，难度适中。

(12年广东-2)培育草莓脱毒苗所采用的主要技术是A

A.组织培养B.细胞杂交C.显微注射D.核移植

(13年天津一9)(15分)花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥具有黑腐病的

抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。

再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病

杂种植株。流程如下图。

据图回答下列问题：

(1)过程①所需的酶是，

(2)过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的存在，这

一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。

(3)原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用

是。原生质体经过再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。

(4)若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和植株的

根尖，通过、、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下

观察比较染色体的形态和数目。

(5)采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNA进行PCR扩增，得到两亲本的差异性条

带，可用于杂种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1—4进行PCR扩增的结果。

据图判断，再生植株1—4中一定是杂种植株的有。

花椰菜1234黑芥碱基对

1500

————1300

一—_1000

--------------------------------------------------600

---------------------------------------------------300

(6)对杂种植株进行接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。

【答案】(1)纤维素酶和果胶酶

(2)叶绿体

(3)保持原生质体完整性细胞壁

(4)双亲(或花椰菜和黑芥)解离漂洗

(5)1、2、4(6)黑腐病菌

【解析】

(1)过程①表示原生质体的制备，要用纤维素酶和果胶酶去掉植物细胞的细胞壁

(2)用于融合的两个细胞，一个是黑芥苗的叶肉细胞，•个是花椰菜的根部细胞，其中

供体细胞特有的结构是叶绿体，可通过观察叶绿体的有无作为初步筛选杂种细胞的标志。

(3)原生质体没有细胞壁的保护，需要加入适宜浓度的甘露醉以保证渗透压的稳定，以

避免原生质体吸水或失水破坏原生质体的完整性；原生质体通过细胞壁杂声形成杂种细胞，

进而形成愈伤组织。

(4)分析再生植株染色体变异类型，需要将再生植株细胞染色体和黑芥苗与花椰菜细胞

中的染色体制片观察进行比较，制片的基本程序是解离、漂洗、染色、制片。

(5)根据图谱，花椰菜含有碱基对为300和600的DNA片段，黑芥还有碱基对为1000、

1300和1500的片段，再生植株3,只含有长度为300和600的片段，与花椰菜一致，1、2、4

既含有花椰菜DNA片段，又含有黑芥DNA片段，为杂种植株。

(6)对杂种植株接种黑腐病菌，能正常生长的即为具有高抗性的杂种植株。

【试题评价】本题以抗黑腐病花椰菜的培育为信息载体，综合考查了植物细胞工程、细

胞分裂装片的制作观察、PCR图谱的识别等相关内容，同时也考查了考生识图获取信息的能

力，具有一定难度。

（13年新课标2-40）甲、乙是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，甲含有效成分A,乙

含有效成分B。某研究小组拟培育同时含有A和B的新型药用植物。

回答下列问题：

（1）为了培养该新型药用植物，可取甲和乙的叶片，先用酶和—酶去除细胞壁,

获得具有活力的，再用化学诱导剂诱导二者融合。形成的融合细胞进一步培养形成

组织，然后经过一一形成完整的杂种植株。这种培养技术称为.一。

（2）上述杂种植株属于多倍体，多倍体是指o假设甲和乙有性杂交的后代是不

育的，而上述杂种植株是可育的，造成这种差异的原因是O

（3）这种杂种植株可通过制作人工种子的方法来大量繁殖。经植物组织培养得到的

等材料用人工薄膜包装后可得到人工种子。

【答案】：

（1）纤维素酶果胶酶原生质体愈伤再分化（或分化）植物体细胞杂交

（2）体细胞中含有三个或三个以匕染色体组的个体在减数分裂过程中，前者染色体联

会异常，而后者染色体联会正常

（3）胚状体、不定芽、顶芽、腋芽

【解析】：本题考查植物体细胞杂交。（1）为了培养新型药用植物，可取甲和乙的叶片，

先用纤维素酶和果胶酶处理，获得具有活力的原生质体A、B,再用化学诱导剂聚乙二醇诱导

融合形成杂种细胞，进一步培养形成愈伤组织，经过再分化形成根、芽，长成完整植株，以

上获得杂种植株的方法叫植物体细胞杂交，能克服远缘杂交不亲和的障碍。（2）植物A、B体

细胞杂交形成的杂种植株是四倍体，且该杂种植株减数分裂能形成正常配子，理论上是可育

的：但如果将甲和乙有性杂交形成的二倍体，减数分裂由于不存在同源染色体无法联会，无

法形成正常配子，不可育。（3）在植物组织培养至胚状体阶段，可包裹上人工种皮制备人工

种子。

动物细胞工程

（13年浙江一6）实验小鼠皮肤细胞培养（非克隆培养）的基本过程如图所示。下列叙述错误

的是

实验小鼠里一皮肤组织三皮肤细胞—*细胞培养1工细胞培养2

第6颗图

A.甲过程需要对实验小鼠进行消毒

B.乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶消化

C.丙过程得到的细胞大多具有异倍体核型

D.丁过程得到的细胞具有异质性

答案：C

解析：A进行细胞培养前需要对细胞进行消毒，A正确；B进行培养的组织细胞用胰蛋白

酶消化分散成单个细胞，B正确；C丙过程属于原代培养，细胞的核型稳定，C错误；D

丁过程属于传代培养，期间部分细胞会出现异质性，D正确；

（13年大纲卷-2）关于动物细胞培养和植物组织培养的叙述，错误的是

A.动物细胞培养和植物组织培养所用培养基不同

B.动物细胞培养和植物组织培养过程中都要用到胰蛋白酶

C.烟草叶片离体培养能产生新个体，小鼠杂交瘤细胞可离体培养增殖

D.动物细胞培养可用于检测有毒物质，茎尖培养可用于植物脱除病毒

【答案】B

【解析】植物组织培养不需要用胰蛋白酶，B错误。

【试题点评】本题考察学生对细胞工程技术的了解，难度较低。

（13年重庆一2）题2图是单克隆抗体制备流程的简明示意图。下列有关叙述，正确的是

A.①是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应T淋巴细胞

B.②中使用胰蛋白酶有利于杂交瘤细胞的形成

C.③同时具有脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞的特性

D.④是经筛选培养获得的能分泌特异性抗体的细胞群

【答案】D

【解析】①是获得已经免疫的B细胞，A项错误；胰蛋白酶使得组织块分散为单个细胞,

B项错误：③同时具有B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的特性，C项错误；④经筛选后获得能够获

得分泌特异性抗体的杂交瘤细胞，D项正确。

【试题评价】本题考查单克隆抗体制备流程相关只是和考生的识图能力，属理解层次，较易

得分。

【解析】本题考查了单克隆抗体的制备过程，①是从已免疫的小鼠体内获得的效应B细胞（浆

细胞）,A错;②过程是细胞融合，常用的方法除了物理的方法外，化学诱导剂是聚乙二醇（PEG）,

生物诱导剂常用火火的仙台病毒，而胰蛋白酶用于获得单个的动物细胞和细胞培养过程中，B

错：③是融合的细胞，如果只考虑两两融合，则包括浆细胞自身的融合，骨髓瘤细胞的自身

融合，浆细胞和骨髓瘤细胞的融合三种情况，C错；④是经筛选培养获得的能分泌特异性抗体

的细胞群，它同时具有浆细胞分泌特异性抗体的特点，同时又具有骨髓瘤细胞无限增殖的特

点，D对。

【命题透析】本题考查了单克隆抗体的制备过程，各个细胞的名称和主要特点，既考查了免

疫的知识，乂涉及到了细胞培养，细胞融合和细胞筛选。难度不大。

（12年上海-13）以绵羊红细胞刺激小鼠脾脏B淋巴细胞，再将后者与小鼠骨髓瘤细胞融合形

成杂交瘤细胞克隆群，由此筛选出的单克隆杂交瘤细胞所产生的抗体B

A•能识别绵羊整个红细胞B.只识别绵羊红细胞表面的特定分子

C•能识别绵羊所有体细胞D.只识别绵羊所有体细胞表面的特定分子

（13年海南-31）单纯疱疹病毒I型（HSV-I）可引起水疱性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出

抗HSV-I的单克隆抗体可快速检测HSV-I»

回答下列问题：

（1）在制备抗HSV-I的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化的HSV-I蛋白，

一段时间后，若小鼠血清中抗的抗体检测呈阳性，说明小鼠体内产生了反应，再

从小鼠的中获取B淋巴细胞。将该B淋巴细胞与小鼠的细胞融合，再经过筛

选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞，该细胞具有的特点是«

（2）若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体，可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的中

使其增殖，再从中提取、纯化获得。

（3）通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种HSV-I蛋白，其原因是该抗体具

有和等特性。

【解析】（1）由题意可知，单纯疱疹病毒I型可引起水泡性口炎，病毒蛋白HSV-I可以

作为一种抗原刺激机体通过免疫反应产生特异性抗体。在单克隆抗体的制备过程中，首先应

注射纯化的HSV-I蛋白作为抗原，一段时间后对小鼠血清进行检测，如果抗HSV-I蛋白的抗

体检测为阳性，说明小鼠体内通过体液免疫产生了特异性抗体。此时可以从小鼠的免疫器官

中，如脾脏、骨髓、淋巴结等部位获取已免疫的B淋巴细胞，与小鼠的骨髓瘤细胞融合，经

过筛选检测获得能稳定的产生特异性抗体的杂交瘤细胞。已免疫的B淋巴细胞具有产生特异

性抗体的特点，而骨髓瘤细胞能无限增殖，因此获得的杂交瘤细胞具有既能无限增殖又能产

生特异性抗体（抗HSV-I蛋白的抗体）的特点。

（2）获得大量单克隆抗体途径有两种：体外培养和体内培养。体外培养即通过动物细胞

培养技术状得大量的杂交瘤细胞，进而产生大量的单克隆抗体；体内培养即将杂交瘤细胞注

射到小鼠的腹腔中增殖，最后从小鼠的腹水中提取、纯化单克隆抗体。

（3）单克隆抗体是通过细胞融合技术单•的B淋巴细胞核杂交瘤细胞融合而获得的，因

此融合后的细胞只能产生一种特异性抗体，所制备的单克隆抗体具有特异性强，灵敏度高的

特点。

【试题点评】本题以疱疹病毒为素材切入，综合考查了学生对单克隆抗体的制备原理、

过程及其特点的理解。旨在考查学生的理解和应用能力。

（13年安徽-29）（14分）近年来，有关肿瘤细胞特定分子的靶向治疗研究进展迅速。研究

发现，蛋白X是细胞膜上的一种受体，由原癌基因X编码。在一些肿瘤细胞中，原癌基因X过

量表达会持续激活细胞内的信号传导，启动细胞DNA的复制，导致细胞异常增殖，利用动物

细胞融合技术制备的单克隆抗体，可用于诊断和治疗原癌基因X过量表达的肿瘤，请回答下列

问题：

（1）同一个体各种体细胞来源于受精卵的分裂与分化。正常情况下，体细胞核遗传信息相同

的原因是_________「

（2）通过检测原癌基因x的和可判断其是否转录和翻译。检测成人多

种正常组织后，发现原癌基因尤只在乳腺、呼吸道等上皮细胞中有微弱表达，这说明——

（3）根据以上信息，可推测原癌基因的主要功能是-

（4）制备该单克隆抗体时，免疫动物的抗原可以是。B淋巴细胞识别抗原并与之

结合，之后在适当的信号作用下增殖分化为和__________「

（5）用该单克隆抗体处理原癌基因X过量表达的某肿瘤细胞株，发现其增殖能力明显下降。

这是因为-

【答案】（1）亲代细胞通过有丝分裂将复制后的核DNA平均分配到两个子细胞中。

（2）合成的mRNA蛋白X原癌基因X的表达具有（组织）特异性

（3）维持细胞周期，控制细胞生长和分裂的进程

（4）蛋白X浆细胞记忆细胞

（5）该单克隆抗体与肿瘤细胞表面的蛋白X特异性结合，从而阻断蛋白X介导的信号传导

解析：（1）iE常情况下，体细胞核遗传信息相同的原因是有丝分裂过程中染色体（核DNA）准

确复制后平均分配到两个子细胞中：（2）通过检测原癌基因X的mRNA和特异蛋白X

可判断其是否转录和翻译。检测成人多种正常组织后，发现原癌基因x只在乳腺、呼吸道等上

皮细胞中有微弱表达，这说明基因的表达具有组织特异性（选择性表达）；（4）制备该单克隆

抗体时，免疫动物的抗原可以是“蛋白X”，B淋巴细胞识别抗原并与之结合，之后在适当的

信号作用下增殖分化为浆细胞和记忆细胞；（5）用该单克隆抗体处理原癌基因x过量表达的某

肿瘤细胞株，发现其增殖能力明显下降。这是因为该单克隆抗体与肿瘤细胞表面的“蛋白X”

特异性结合，从而阻断“蛋白X”介导的信号传导。

【解析】（1）体细胞是通过有丝分裂进行增殖；

（2）转录是合成信使RNA的过程，而翻译是合成蛋白质的过程；虽然各种体细胞中都有

原癌基因，但只有一定的细胞才表达，这说明原癌基因X的表达具有（组织）特异性基因的

选择性表达：

（3）通过题目信息可知，原翔基因是通过控制受体蛋白的合成来控制细胞内信号传导，

启动DNA的复制；

（4）由于原癌基因X能维持细胞周期，捽制细胞生长和分裂的进程；B淋巴细胞受到抗

原刺激后能分化产生记忆细胞和浆细胞;

（5）由于抗体能与抗原（蛋白X）结合，而蛋白X为细胞膜上的受体，从而阻断了信号

传导。

【试题点评】本题主要考查癌细胞的相关知识，涉及到了细胞的分裂分化、转录和翻译、

细胞免疫以及单克隆抗体的制备等内容，综合性较强，难度较大。

胚胎工程

（13年天津-2）哺乳动物卵原细胞减数分裂形成成熟卵子的过程，只有在促性腺激素和精子

的诱导下才能完成。下面为某哺乳动物卵子及早期胚胎的形成过程示意图（N表示染色体组）

据图分析，下列叙述错误的是（）

A.次级卵母细胞形成的过程需要激素调节

B.细胞HI只有在精子的作用下才能形成成熟卵子

C.II,III和IV细胞分裂后期染色体数目相同

D.培育转基因动物应选择细胞IV作为受体细胞

【答案】C

【解析】据图可知，初级卵母细胞形成次级精母细胞的过程需要促性腺激素的调节，A项

正确；细胞HI为次级卵母细胞，减数第二次分裂是在输卵管中伴随着受精作用完成的，B项

正确；II、HI和IV分别为初级卵母细胞、次级卵母细胞和受精卵，它们在细胞分裂后期的

染色体组数依次为：2N、2N、4N,染色体数不同，C项错误；动物细胞的受精卵全能性高，因

此培育转基因动物常用受精卵作为受体细胞，D项正确。

【试题评价】本题综合考查卵细胞的形成过程和考生理解识图能力，涉及基因工程、细

胞分裂过程中染色体数目变化等相关内容，难度不大，较易得分。

（13年江苏一13）软骨发育不全为常染色体显性遗传病，基因型为HH的个体早期死亡。-

对夫妻均为该病患者，希望通过胚胎工程技术辅助生育一个健康的孩子。下列做法错误的是

A.首先经超排卵处理后进行体外受精

B.从囊胚中分离细胞，培养后检测基因型

C.根据检测结果筛选基因型为hh的胚胎

D.将胚胎培养至原肠胚期后移植到子宫

【答案】D

【解析】超数排卵可以得到多个次级卵母细胞，以便于体外受精得到更多的胚胎，A正确;

检测基因型，是从囊胚中分离细胞，以便于选择正常胚胎，B正确；软骨发育不全为常染色体

显性遗传病，健康个体基因型应为hh,C正确；人类进行胚胎移植的时间一般8T6个细胞时

期，D错误。

【试题评价】此题考查胚胎工程的原理及关键技术，难度不大。

（13年山东