电泳实验报告

化学实验报告之电泳实验目的：认识胶体粒子是带电粒子实验原理：带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动实验器材及药品：铁架台、u形管、石墨碳棒、粗铜丝、滴管、导线、直流电源、fe(oh)3胶体、定量nacl溶液实验操作：1、将烧杯中的蒸馏水加热至沸腾，向沸水中逐滴滴加入6滴fecl3饱和溶液。继续煮沸至溶液呈红褐色，停止加热。观察制得的fe（oh）3胶体2、取一支u形管，注入fe（oh）3胶体到距离管口5.0cm处，固定在铁架台上，用滴管给u形管的两端沿壁慢慢注入一定浓度的nacl溶液，使u形管两端明显分层，形成清晰的液面3、给u形管两端插入碳棒电极，并分别连接电源的正负极，观察现象并记录时间。实验现象：u形管和阴极连接的一端液面上升，出现明显的液面差，阴极一端颜色加深，阳极一端颜色变浅实验分析：在外加直流电源的作用下，fe（oh）3胶体微粒在分散介质里向阴极作定向移动,注意碳棒不要和胶体接触，，否则胶体放电或电解水，nacl溶液的浓度不要太大最好是51毫摩每升。篇二：电泳实验报告实验十二电泳一、目的要求1）掌握电泳法测ζ电势的原理和技术；2）从实验现象中加深对胶体的电学性质的理解，即在外电场作用下，胶粒和介质分别向带相反电荷的电极移动，就产生了电泳和电渗的电动现象（因电而动）。二、基本原理1．电泳由于胶粒带电，而溶胶是电中性的，则介质带与胶粒相反的电荷。在外电场作用下，胶粒和介质分别向带相反电荷的电极移动，就产生了电泳和电渗的电动现象。影响电泳的因素有：带电粒子的大小、形状；粒子表面电荷的数目；介质中电解质的种类、离子强度，ph值和粘度；电泳的温度和外加电压等。从电泳现象可以获得胶粒或大分子的结构、大小和形状等有关信息。2．三种电势，固体表面相对溶液的电势，?0=f（固体表面电荷密?0：热力学电势（或平衡电势）度，电势决定离子浓度）。??：斯特恩电势。离子是有一定大小的，而且离子与质点表面除了静电作用外，还有范德华吸引力。所以在靠近表面1-2个分子厚的区域内，反离子由于受到强烈的吸引，会牢固的结合在表面，形成一个紧密的吸附层，称为固定吸附层或斯特恩层；在斯特恩层中，除反离子外，还有一些溶剂分子同时被吸附。反离子的电性中心所形成的假想面，称为斯特恩面。在斯特恩面内，电势呈直线下降，由表面的?0直线下降到斯特恩面??。??称为斯特恩电势。?：电动电势。当固、液两相发生相对移动时，紧密层中吸附在固体表面的反离子和溶剂分子与质点作为一个整体一起运动，其滑动面在斯特恩面稍靠外一些。滑动面与溶液本体之间的电势差，称为?电势。?电势与??电势在数值上相差甚小，但却具有不同的含义。应当指出，只有在固、液两相发生相对移动时，才能呈现出?电势。?电势的大小，反映了胶粒带电的程度。?电势越高，表明胶粒带电越多，其滑动面与溶液本体之间的电势差越大，扩散层也越厚。当溶液中电解质浓度增加时，介质中反离子的浓度加大，将压缩扩散层使其变薄，把更多的反离子挤进滑动面以内，使?电势在数值上变小当电解质浓度足够大时，可使?电势为零。此时相应的状态，称为等电态。处于等电态的胶体质点不带电，因此不会发生电动现象，电泳、电渗速度也必然为零，这时的溶胶非常容易聚沉。3．电泳公式当带电胶粒在外电场作用下迁移时，胶粒受到的静电力f1为：f1?qe(1)其中q为胶粒的电荷，e为电场强度(或称为电位梯度)本次实验研究的fe(oh)3为棒形胶粒。棒形胶粒在介质中运动受到的阻力f2按stokes定律为：f2?4??r?(2)其中r为胶粒的半径，?为电泳速度，?为介质的粘度，当胶粒运动速度即电泳速度达到稳定时，f1=f2，结合(1)、(2)式得到：??qe(3)4??r根据静电学原理可知??q(4)?r其中r为胶粒的半径，?为介质的界电常数，所以有????e(5)4??4???(6)?e??由该式可知，若已知?、?，可通过测定?和e算出?电势。该式只适合于c·g·s单位制，且得出?电势的单位为静电伏特。若各物理量都采用si单位，r的单位为m；?的单位为m·s-1；?的单位为pa·s；e的单位为v·m-1此时公式为：??三、仪器与试剂4????9?109伏特(7)?e界面移动电泳仪；213型铂电极两个；高压数显稳压电源；滴管2根；烧杯（250ml）；1玻璃棒一根；fec13溶液（10%）；kcl溶液（0.02mol·l）；四、实验步骤1．仪器装置图如下。图1.实验装置图2．溶胶的制备：在不断搅拌的条件下、将fec13稀溶液滴入沸腾的水中水解，即可生成棕红色、透明fe(oh)3溶胶：fecl3+3h2fe(oh)3↓+3hcl部分氢氧化铁跟盐酸作用fe(oh)3+hcl=feocl+2h2ofeocl=feo++cl－氢氧化铁吸附溶液中带正电荷的离子（feo+），胶团结构为：{[fe(oh)3]m?yfeo+,(y-z)cl-}z+?zcl-分子团选择吸附离子紧密层扩散层胶粒带正电荷，因此在电场作用下向阴极移动，出现电泳现象。3．测定电泳速度和电位梯度六、思考题：1、要准确测定胶体的电泳速度必须注意哪些问题?答:①电压要足够,稳定;②电路畅通;③溶液保证畅通无气泡;篇四：琼脂糖凝胶电泳实验琼脂糖凝胶电泳实验2011-11-0309:43:56来源：生物秀评论：0我要评论实验二琼脂糖凝胶电泳实验【实验目的】（1）学习琼脂糖凝胶电泳的基本原理；（2）掌握使用水平式电泳仪的方法；（3）学习在含有甲醛的凝胶上进行rna电泳的方法。【实验原理】琼脂糖凝胶电泳是基因工程实验室中分离鉴定核酸的常规方法。核酸是两性电解质，其等电点为ph2-2.5，在常规的...实验二琼脂糖凝胶电泳实验【实验目的】（1）学习琼脂糖凝胶电泳的基本原理；（2）掌握使用水平式电泳仪的方法；（3）学习在含有甲醛的凝胶上进行rna电泳的方法。【实验原理】琼脂糖凝胶电泳是基因工程实验室中分离鉴定核酸的常规方法。核酸是两性电解质，其等电点为ph2-2.5，在常规的电泳缓冲液中（ph约8.5），核酸分子带负电荷，在电场中向正极移动。核酸分子在琼脂糖凝胶中泳动时，具有电荷效应和分子筛效应，但主要为分子筛效应。因此，核酸分子的迁移率由下列几种因素决定：（1）dna的分子大小。线状双链dna分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与dna分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中移动，因而迁移得越慢。（2）dna分子的构象。当dna分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋质粒dna在琼脂糖凝胶中移动的速度是不一样的，超螺旋dna移动得最快，而开环状dna移动最慢。如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条dna带难以确定是质粒dna不同构象引起还是因为含有其他dna引起时，可从琼脂糖凝胶上将dna带逐个回收，用同一种限制性内切酶分别水解，然后电泳，如在凝胶上出现相同的dna图谱，则为同一种dna。（3）电源电压。在低电压时，线状dna片段的迁移速率与所加电压成正比。但是随着电场强度的增加，不同分子量的dna片段的迁移率将以不同的幅度增长，片段越大，因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大，因此电压增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。要使大于2kb的dna片段的分辨率达到最大，所加电压不得超过5v/cm。（4）离子强度影响。电泳缓冲液的组成及其离子强度影响dna的电泳迁移率。在没有离子存在时（如误用蒸馏水配制凝胶），电导率最小，dna几乎不移动；在高离子强度的缓冲液中（如误加10×电泳缓冲液），则电导很高并明显产热，严重时会引起凝胶熔化或dna变性。溴化乙啶(ethidiumbromide,eb)（1）能插入dna分子中形成复合物，在波长为254nm紫外光照射下eb能发射荧光，而且荧光的强度正比于核酸的含量，如将已知浓度的标准样品作电泳对照，就可估算出待测样品的浓度。由于溴化乙啶有致癌的嫌疑，所以现在也开发出了安全的染料，如sybergreen。常规的水平式琼脂糖凝胶电泳适合于dna和rna的分离鉴定；但经甲醛进行变性处理的琼脂糖电泳更适用于rna的分离鉴定和northern杂交，因为变性后的rna是单链，其泳动速度与相同大小的dna分子量一样，因而可以进行rna分子大小的测定，而且染色后条带更为锐利，也更牢固结合于硝酸纤维素膜上，与放射性或非放射性标记的探针发生高效杂交。【试剂与器材】（一）材料电泳仪、水平电泳槽、样品梳子、琼脂糖等（二）试剂1、50?tae(1000ml)：242gtris,57.1ml冰醋酸，18.6gedta。2、eb溶液：100ml水中加入1g溴化乙啶，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，分装，室温避光保存。3、dna加样缓冲液：0.25%溴酚蓝，0.25%二甲苯青，50%甘油（w/v）。4、rna甲醛变性胶上样缓冲液：0.25%溴酚蓝，0.25%二甲苯青，1mmedta(ph8.0)，50%甘油（w/v），用depc水配制，高压灭菌备用。5、5?甲醛变性胶电泳缓冲液：0.1mmops(ph7.0)，40mm醋酸钠，5mmedta(ph8.0)，用depc水配制，过滤除菌，室温避光保存。淡黄色缓冲液可正常使用，深黄色应弃用。【操作方法】（一）常规的水平式琼脂糖电泳制备琼脂糖凝胶：按照被分离dna分子的大小，决定凝胶中琼脂糖的百分含量；一般情况下，可参考下表：琼脂糖的含量（%）分离线状dna分子的有效范围（kb）0.360-50.620-10.710-0.80.97-0.51.26-0.41.54-0.22.03-0.11．制备琼脂糖凝胶：称取琼脂糖，加入1x电泳缓冲液，待水合数分钟后，置微波炉中将琼脂糖融化均匀。在加热过程中要不时摇动,使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液；加热时应盖上封口膜,以减少水份蒸发。2．胶板的制备：将胶槽置于制胶板上,插上样品梳子,注意观察梳子齿下缘应与胶槽底面保持1mm左右的间隙，待胶溶液冷却至50℃左右时，加入最终浓度为0.5微克/毫升的eb(也可不把eb加入凝胶中,而是电泳后再用0.5μg/ml的eb溶液浸泡染色15分钟)，摇匀，轻轻倒入电泳制胶板上，除掉气泡；待凝胶冷却凝固后，垂直轻拔梳子；将凝胶放入电泳槽内，加入1x电泳缓冲液，使电泳缓冲液液面刚高出琼脂糖凝胶面；3．加样：点样板或薄膜上混合dna样品和上样缓冲液，上样缓冲液的最终稀释倍数应不小于1x。用10μl微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内，每加完一个样品，应更换一个加样头，以防污染，加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面。（注意：加样前要先记下加样的顺序和点样量）。4．电泳：加样后的凝胶板立即通电进行电泳，dna的迁移速度与电压成正比，最高电压不超过5v/cm。当琼脂糖浓度低于0.5%，电泳温度不能太高。样品由负极（黑色）向正极（红色）方向移动。电压升高，琼脂糖凝胶的有效分离范围降低。当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时，停止电泳。5．观察和拍照：电泳完毕，取出凝胶。在波长为254nm的紫外灯下观察染色后之。（二）在含有甲醛的凝胶上进行的rna电泳（选做）配制23ml甲醛电泳胶：0.336g琼脂糖溶于20mldepc水中，冷却至60?c，加入5ml的5x甲醛变性胶电泳缓冲液和5.5ml的甲醛，在通风橱内倒胶，冷却30分钟后使用。甲醛变性胶rna样品的制备：1μlrna，5?甲醛变性胶电泳缓冲液0.5μl，甲醛0.7μl，甲酰胺2μl，65oc加热15min，迅速冰浴，加1μl上样缓冲液和0.2μl的eb。步骤：1．用3%过氧化氢浸泡电泳槽、胶板、梳子30分钟以上。2．胶板的制备：按常规琼脂糖电泳法。3．预电泳：1×甲醛变性胶电泳缓冲液，预电泳10min。电压为5v/cm。4．小心地进行点样，记录样品次序与点样量；然后开始电泳，电压为3-4v/cm。5．观察和拍照：在波长为254nm的紫外灯下观察电泳胶板并拍照保存图片。【注意事项与提示】（1）eb是强诱变剂并有中等毒性，易挥发，配制和使用时都应戴手套，并且不要把eb洒到桌面或地面上。凡是沾污了eb的容器或物品必须经专门处理后才能清洗或丢弃。简单处理方法为：加入大量的水进行稀释（达到0.5mg/ml以下），然后加入0.2倍体积新鲜配制的5%次磷酸（由50%次磷酸配制而成）和0.12倍体积新鲜配制的0.5mol/l的亚硝酸钠，混匀，放置1天后，加入过量的1mol/l碳酸氢钠。如此处理后的eb的诱变活性可降至原来的1/200左右。（2）由于eb会嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环状dna，使dna迁移率降低。因此，如果要准确地测定dna的分子量，应该采用跑完电泳后再用0.5μg/ml的eb溶液浸泡染色的方法。（3）总rna的分析：哺乳动物的rna由28srrna、18srrna和mrna以及其它小分子rna组成，28s和18srrna处为明显的亮带（相当于4.5kb和1.9kb），28s/18s应为1.5-2.5/1；植物、昆虫、酵母和两栖动物的rna带分布较小，约为0.5-3.0kb左右；假如28s/18s小于1/1，或者出现拖带，说明rna已经有部分降解，如果28s和18srrna大部分已降解，则需重新制备。【实验安排】只需一天：上午配试剂倒胶，下午跑电泳并观察拍照。【实验报告要求与思考题】1、附上电泳结果的图片并进行正确的标注（如下图）（2）的或已加有eb的电泳胶板。dna存在处显示出肉眼可辨的桔红色荧光条带。于凝胶成像系统中拍照并保存m：1kbdnaladder；1：质粒dna2、琼脂糖凝胶电泳中dna分子迁移率受哪些因素的影响？3、如果样品电泳后很久都没有跑出点样孔，你认为有哪几方面的原因？电泳流程图：凝胶加样缓冲液使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保dna均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青ff的2.2倍，而与琼脂糖浓度无关。以0.5×tbf作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状dna相同，而二甲苯青ff的泳动则与长4kb的双链线状dna相同。在琼脂糖浓度为0.5%～1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱性ph条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。篇五：dna的提取和电泳实验报告基因组dna的提取和电泳（实验五）实验报告一、实验目的了解dna提取的方法，以及琼脂糖凝胶电泳分析dna技术。二、器材和试剂器材水平琼脂糖电泳仪，离心机，水浴锅，研钵，离心管、移液枪、水稻幼苗等试剂1mol/ltris.cl(ph8.0)的配制：称取12.11g的tris，置于80ml的ddh20,加入浓盐酸（约4.2ml）,调节ph值至8.0，定容至100ml。0.5mol/ledta(ph8.0)的配制：18.61gna2edta·2h2o，加入80ml的ddh2o,用naoh颗粒调ph值至8.0（约需2g），定容至100ml。提取缓冲液的配制：