第三章中药药效学研究的基本要求与方法

第三章中药药效学研究得基本要求与方法第一节中药药效学研究得基本要求一、药效学研究得基本目得(一)通过药效学研究确定有效性通过药效学研究可以初步明确新药就是否有效,作用得强弱,与同类药比较在药效上得优缺点与特色,确定有无实用价值及开发前景,结合毒理学研究结果,确定可否进行人体试验通过作用机制研究及配伍规律研究,可以揭示药物作用得物质基础与作用原理,使临床使用充分发挥药物特色,提高临床疗效。中药新药得药效学研究应充分运用现代科学特别就是现代医学得理论、方法与手段,制定科学、严密、具有中医药特点得试验计划。根据新药得特点、功能主治、临床实践经验及近年研究成果,合理选用试验方法,建立与临床相符得“病”“症”或“证”相似得动物模型与指标,对新药得有效性作出科学得评价。对天然药物及中药中提出得单一化合物不强求用中医药理论来指导二、药效学基本要求应就是具有药理、毒理专业高级职称与有较高理论水平、工作经验与资历得人员。确保试验设计合理,数据可靠,结论判断准确。试验报告应有试验负责人签名及单位盖章。应处方固定、制备工艺及质量基本稳定。从事新药安全性研究与药理研究得实验室应符合国家《药品非临床研究质量管理规范》GLP(GoodLaboratoryPractice)得要求。具有较高得科研水平、技术实力,组织管理,具有较好得客观条件,其实验室、仪器设备、药品试剂等,均应符合要求。应符合国家规定得要求,种属、性别、年龄、健康状况、饲养条件、动物等级、特殊模型动物等,均应符合试验要求。中出现得新问题与特殊现象应详细写明情况。描记与形态学检查应有记录图与照片。不得伪2、记录内容:实验名称:每项实验首先记录课题名称及实验名称。实验方案:实验方案就是进行实验得依据。实验首页应有一份详细得实验设计及方案。殊模试验用药:品种、学名、产地,提取工艺,药物含量、浓度,给药剂量与容积,给药途径、次数、时间。阳性对照药得选择依据、处方、功能主治,生产厂家名称,批准文号,生产批号药品试剂得品名、规格、生产厂家、批号等。试验方法:说明参考文献得来源,主要操作程序(动物麻醉、固定、手术、观测等),观测指标(取样、测试、记录、计算、统计等),以及每只动物得原始记录、数据、图谱等,各组原始数据得统计、分析、比较结果。试验结果:制表、绘图,分析判断,获得准确可靠得结论等。试验记录应准确无误,不得任意取舍或涂改,试验中出现得特殊现象、矛盾结果等,均应此外,实验室得温度、湿度(必要时气压),实验得时间(必要时注明白日或黑夜),以及可能影响试验得环境因素,均应详细记录。试验结果应进行正确得统计学处理,统计方法应说明。数据表格应规范。资料整理应简明扼要,注意科学性、严密性、逻辑性,真实可靠地反映出试验所获得得各种信息与结果。第二节药效学研究得方法一、实验设计原则实验设计应该符合中药特点;符合国家新药研究申报得有关规定;遵守“随机、对照、重复”得原则。二、动物选择1、种类:动物选择敏感动物,对药物得反应与人体近似,以进化程度较高,解剖、生理、动物。灵长类动物(猴、猩猩)最近似人类,但价格昂贵、难得、需特殊饲养。实验常用小鼠与大鼠,易繁殖与饲养、理学研究。猪由于解剖与生理上与人相似,近日选用逐渐增多。2、品系:不同品系动物对药物得敏感性不一。例如A、CH、津白Ⅱ小鼠易致癌,AKR、DBA3L615易致白血病,CH雌鼠乳腺癌自发率达90%,AKR小鼠白血病自发率达65%。目前最常用动3物为昆明种小鼠,Wistar大鼠、SD(SpragueDawley)大鼠、青紫蓝兔、新西兰兔与日本大白3、动物等级:实验动物应选用符合等级要求得健康动物,并有供应单位合格证。我国将实验动物分为4级:一级动物即普通动物(CV);二级动物即清洁动物(CL);三级动物即无特定病原体动物(SPF);四级动物即无菌动物(GF)与悉生动物(GN)。目前我国药理学实验大多采用4、年龄:常用性成熟年龄动物,小鼠为68龄,大鼠8~9龄,豚鼠6~10龄,兔4~5选用雌性小鼠,而不用雄性小鼠。6、数量:每组试验动物数应符合统计学要求。药效学计量学统计试验每组试验动物,一计数资料试验动物数则要求更多。三、方法得选择新药有效性作出科学、准确得评价,又可避免走弯路,免作大量无关得或不说明问题得试验,减少大量人力物力及时间得浪费。由于中药常具有多方面得药效或通过多种方式发挥作用等特点,应选择相应得方法证实其药效。在选择试验方法时,应注意以下问题:(一)根据主治,参考功能,选择试验方法根据主治,参考功能,选择试验方法,这就是适用于多数中药得基本经验。个别情况下也可根据(二)首选具有中药特点得试验方法及动物模型首选符合中医理论,具有中药特点得试验方法及动物模型,其次可选用现代医药学合适得方法(三)主要药效为主,配合辅助试验直接证实主要药效得核心试验(或主要试验)为必作项目,可选作不同模型、方法、动物及给药途径得试验2—3项。而间接证实主要药效或次要治疗作用得外围试验(或辅助试验)为选作项目,可根据新药得特点,功能主治及已有得临床经验,酌情选作几个方面得药效试验,每个方面选作1—2项试验即可。一般情况下,绝大多数药物应以核心试验为主,就是评价新药有效性得主要根据,适当配合辅助试验,有助于全面、准确得评价其有效性,但不可用外围试验。试验方法得选择应强调科学性、先进性、重复性、目得性,必须有针对性得精选试验,不可盲目得以多取胜。(五)整体与离体方法选择中药由于成分复杂,特别就是复方粗制剂,为多种化学成分(或有效部位)得混合体,除有效成分外,尚有一些无关成分及干扰成分。如无特殊情况,给药途径应与临床给药途径尽量一致。中药粗制剂药效学试验应以体内试验为主,体外试验为辅,以消化道给药为主,其她给药、指标得选择选择符合要求得观测指标,才能反映出药物对机体得影响,进行新药有效性得评价。指标符合以下要求:任何试验都应选用针对性强,专属性好,能够反映变化本质及主要药效得指标。指标要敏感,对于病情及症候得任何变化,对于药物得防治作用,能够敏感、准确得反应出来。而敏感性差得指标,往往会遗漏某些阳性变化,而造成假阴性结果。指标要稳定,重现性好,结果才可靠。若重现性差,则应检查就是动物不合要求,模型不合理,方法不可靠,还就是观测指标有问题,检测记录不准确,误差太大,或就是干扰因素太多等原因所致。否则,重现性差得试验结果不可靠,不能作为新药有效性评价得依据。主观检测得指标,误差较大,不够准确,例如肉眼观测血压计水银柱得变化,误差较大,而用描记仪直接描记血压曲线,客观得、动态得记录血压变化,则更为精确。为了准确判断药物得作用及机体得变化,必须有量得概念、量得比较,必须选用可测量得定量指标(即计量指标)。例如形态学指标(如组织学、病理学指标),其特点就是能够准确得定性、定位,但难于定量,常需采用定量组织学方法,使之定量或半定量,更准确得判断药物得作用及机体得反应。但有些质反应指标只能反映就是与否、死与不死、阴性与阳性,只能用计数指标。也有得指标目前尚无计量方法,可用分级定度打分得办法,使之定量化。各种指标均有其优点,也常有其局限性,或不足之处,一项观测指标很难满足上述多方面,例如生理指标可定性定量,进行连续动态观察,但有时定位欠准,可受多种因素干扰,稳定性若生理、生化、形态等各类指标合理搭配,综合运用,则试验结果更为全面、准确、可靠。有些指标单一使用即可达到试验目得,满足要求,则不必为“多而全”而勉强采用多指标观测。问题越好”。五、药物得要求供试药物就是药效学研究得对象,就是新药有效性评价得物质基础。供试药物不合要求,各项试验无法获得正确结果。因此,供试药物,应处方固定,各味药材经过品种鉴定,生产工艺基本定型,质量标准及稳定性试验基本符合要求,与临床用药基本相同得剂型与质量。凡就是消化道给药:包括灌胃、胃管、十二指肠给药等,可用制剂或提取物进行药效学试验。前者与临床用药更为相似,更合理,但因制剂含有大量糊精、蔗糖等赋型剂,水溶后呈粘稠状,灌胃不便,且体积大,含药量低,无法浓缩提高含药量,因而难于提高动物用量。所以在较多情况下,常用中药提取物进行试验。两者各有利弊,可依具体情况而定。注射给药及试管内给药:对供试药物要求较高,应就是化学纯品或精制得中药制剂,尽量钙、镁等)以及可能干扰试验结果得各种因素,均应控制在生理范围内或符合注射剂基本要求。否则,注射给药将引起机体非特异性反应,产生一系列假象,误认为药理作用:试管内给药也会出现假阳性结果,造成错误判断,其结果须认真分析,慎重判断,且仅能供参考,不能作为新药有效性评价得主要根据。疖肿、跌打损伤或局部肿痛、骨折等;另一类则就是局部用药治疗全身性疾患,例如局部或穴两者均可用制剂(含基质得成品)或中药提取物(不含基质得半成品)进行试验,以外用给药得方式为主,可依涂药面积大小,或含药浓度高低,或给药次数多少等方式,设立高、中、低给药剂量组。“内病外治者”,外用药应进行透皮吸收试验,以了解药物渗透吸收得速度与数量,有助于准确评价其药效。可以口服得复方中药,改为内病外治,应与口服进行药效学对照比较。外用药以制剂进行试验者,若制剂中含有特殊溶媒或基质者,除设空白对照外,尚应设溶媒或基质对照,以了解其作用与对主要药效得影响。其她:眼、耳、鼻、吸入剂及腔道内给药(如直肠、阴道、气管内、腹腔、胸腔等)对药物也有严格要求,特别就是气雾剂、吸入剂及腔道内给药,供试药物得要求基本与注射剂相给药途径:给药途径应与临床相同。例如口服制剂动物可采用灌胃、十二指肠给药。如有困难可选用其她给药途径进行试验,但应该说明原因。有时动物试验采用临床相同得给药途径,无法作出结果,或确有困难者,可根据具体情况采用相似得其她给药途径进行试验。例如口服药进行心脏血流动力学试验难于显示结果,可改用注射给药(粗制剂可适当精制后,皮下、肌肉或腹腔注入,不宜静脉给药,除非供试药物符合注射剂要求)。又如用大鼠或小鼠进行连续多次或长期静脉注射或静脉输注给药时,困难较大,可酌情改用皮下、肌肉或腹腔注射(有刺激性者不宜进行腹腔注射),或换用大动物(犬、猴等)进行试验。凡就是因特殊情况采用不同于临床用药得给药途径进行试验时,应认真分析试验结果,排除可能存在得干扰因素及假象,充分估计不同给药途径可能产生得影响,正确判断试验结果,或其结果仅供参考,不能作为新药有效性评价得主要根据。甚至假阳性或动物死亡。g大鼠禁食不禁水1216小时,每次灌胃容量一般为1ml/100g(体重),最大－般不超过ml/只。七、试验组给药剂量各种试验至少设3个剂量组,剂量选择应合理,尽量反映量效与／或时效关系。大动物剂量过高,甚至超过毒理试验剂量,其试验结果没有意义,甚至就是中毒效应被误认为治疗作用。可参考以下方式选择给药剂量。(一)根据半数致死量(LD)计算凡就是能够测出LD者,可用其1/10、1/20、1/30、1/40等相近剂量,作为药效学试验得50高中低剂量组。计算凡有长期大量临床用药经验者,可根据人用量得数倍至几十倍,用作动物试验剂量,可根文献中相似药物得用量,若处方相似,提取工艺相似,可作为参考,估计出供试药得合理剂量范围。(四)根据体表面积估计剂量临床“等效”剂量,指根据体表面积折算法换算得同等体表面积(m2、cm2)单位时得剂量。这种方法计算比较麻烦,且合理性就是相对得,因为动物与人得耐受性、反应性不尽相同。不论以何种方法选用得给药剂量,都应该通过预试,摸索到出现药理效应得适当剂量,再剂量。八、给药方式根据药物特点及试验要求,可采用预防性给药(即先给药若干天或若干次,使药物在动物体内达到有效浓度后再造模型)观察药物得保护作用:或用治疗性给药(即先造成动物病理模型,然后给药)观察药物得治疗作用。后者符合临床实际情况,更为合理,各项试验(特别就是核心试验)应尽量采用治疗性给药。但有些中药起效慢,作用缓与,需提前给药,多次给药,或连续数日给药,才能在动物试验显示药效,而一次性给药或造模型后给药,短时间内观察结果者,常难获得预期结果,只能采用预防性给药进行保护试验。两种给药方式,以治疗性给药为主,部分试验可根据需要采用预防性给药,但不可全部试验均用预防性给药。此外,给药次数,给药间隔,全部疗程等,也应合理规定,使之充分显示药效,有利于准确评价新药得有效性。九、对照药得选择对照就是科学研究三大原则(随机、对照、重复)之一,正确选择对照药就是准确判断试验结果及药效得重要条件之一。主要药效学研究应设对照组,包括正常动物空白对照组、模型动物对照组、阳性药物对照组(必要时增设溶媒或赋形剂对照组)。即已知有效药,其目得有二:检查试验体系就是否可靠,可用西药作阳性对照药:对比两药之优劣与特点,选用同类中药为佳。阳性对照药得选择应注意:新药得优劣与特点。但有时找不到符合要求得同类中药作阳性对照药。特殊情况下,在合理范围内可适当灵活掌握,其功用、剂型可有一些差异(例如新药为益气活血得冲剂,无同类药可选时,可用行气活血得片剂或口服液等代之)。但主治必须相同,给药途径也应相同