采血前初筛检验课件

Welcome!6/9/20231采血前初筛检验湘潭市中心血站质管科张锦泉6/9/20232主要内容一、ABO血型鉴定二、乙肝表面抗原（HBsAg）检测三、血红蛋白含量检测四、ALT检测6/9/20233一、ABO血型鉴定ISBT认可的血型系统有29个，221个抗原。血型系统：ABO、Rh(D)、MNS、P、kell、lewis、Duff以及kidd等。临床上与输血关系密切的有ABO血型系统和Rh(D)血型系统。血型(bloodgroup)是指红细胞膜上特异抗原的类型。6/9/20234ABO血型系统的分型是由体内A、B抗原和抗体两者共同决定的。人体内的ABO血型抗原不仅存在于红细胞膜上，而且广泛地存在于很多组织细胞膜和体液、分泌液中【唾液、胃液、精液等】。人体ABO血型抗体最多的是IgM类天然抗体，在ABO母婴血型不合的妊娠或输ABO不相容的血液后可产生IgG类免疫抗体。6/9/20235

ABO血型分型原理6/9/20236ABO血型系统的抗原和抗体血型红细胞上的抗原血清中的抗体A型A1A+A1抗BA2A抗B+抗A1B型B抗AAB型A1BA+A1+B无抗A,无抗A1,无抗BA2BA+B抗A1O型无A,无B抗A+抗B6/9/20237ABO血型鉴定原理：根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗A和抗B血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原，同时用已知标准A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的天然IgM类抗A或（和）抗B。

红细胞凝集的本质是抗原-抗体反应。正向定型：标准血清+被检红细胞反向定型：标准红细胞+被检血清6/9/20238含某种抗原的红细胞+含相应抗体的血清红细胞凝集反应(agglutination)实验原理：血型不相容的两人血液混合,则红细胞可凝集成簇抗A抗B6/9/20239结果判定抗A型标准血清抗B型标准血清A型抗A型标准血清抗B型标准血清B型抗A型标准血清抗B型标准血清抗A型标准血清抗B型标准血清O型AB型示意图6/9/202310血型鉴定错误的原因①当献血者较多时，献血者急于离开，缩短了抗原、抗体的反应时间，抗原较弱者没有出现结果就判读。②责任心：由于工作人员责任心不强，把抗A、抗B交叉搞错等。6/9/202311③技术因素：当标本采集技术(手指采血)不过关时，样本血量不足而致抗原量的不足再加反应时间不充分时，初筛时易导致A型、B型错查成O型，或AB型错查成A型或B型;甚至采集手指血时因局部挤压过重因大量组织液的产生而致引起血型的假凝，如O型错查成AB型或A型或B型;少数操作手法不良人员在将血清与血球混匀过程中造成污染，致使A型或B型错查成AB型。6/9/202312④实验中温度过高或过低、时间太长、水分蒸发时容易出现串钱状现象。或者某些肝肾疾病，传染病或红细胞沉降速度增快的病人，血中纤维蛋白原增高或为异常蛋白血症，输代血浆血中含大量高分子右旋糖酐，都能使红细胞形成串钱状，被误认为凝集。⑤亚型因素：A、B抗原较弱、正定型检测时凝集很弱或不出现凝集，B弱亚血型，加上街头采血点只做正定型，不做反定型，一些抗原较弱的ABO亚型难于检测，而误判为不凝集。6/9/202313⑥试剂效价低：标准血清效价太低，亲和力不强，造成定型不准确。如抗A血清效价不高可将A2型误为O型，A2B型误为B型。⑦某些受肠道革兰阴性杆菌感染的病人(大肠杆菌O86败血症)红细胞获得了类B抗原，A型病人可误定为AB型，O型误定为B型。因此，近期感染过肠道致病菌的不宜献血。6/9/202314⑧流程合理性欠缺：留样贴签过程控制不严密，当工作人员同时采集两个献血者、注意力又不集中、事先又把标签预贴在流样管上时就会导致错型。事实上这种错误不仅是错型原因之一，还对检测结果的正确判断带来严重的后果，且当同型试管倒错时更难于发现，潜在危害更大，严重威胁到血液的安全性。6/9/202315预防措施①加强对血型初筛人员的业务理论和技术操作培训，增强责任心和质量意识，提高检测技能。②抗A抗B都是蛋白质，其效价及亲和力会随着时间的推移和保存温度过高而下降，标准血清不用时立即冷藏保存。③要有足够的耐心确保反应时间，选择灵敏度高、特异性好的试剂，以减少亚型漏检。6/9/202316④使用质量合格的试剂及细心观察结果，就可避免很多不必要的错误。⑤献血人员较多时，要保证有足够的工作人员，安排足够的初筛人员及时做好献血人群的分流安排。⑥强化采前、采中、采后核对制度。6/9/202317⑦优化流程，明确贴签程序与步骤。⑧从空间和时间上制造隔离带，防止同时采集留样带来的错型。总之，只要精力集中，工作认真细致，严格按照标准操作程序进行操作，就可以避免定型错误。6/9/202318二、乙肝表面抗原（HBsAg）检测原理：采用胶体金免疫技术在玻璃纤维上预包被金标抗HBsAg单抗(Au-sAbl)、硝酸纤维素膜上检测线和对照线上分别包被抗HBsAg单抗(sAb2)和单抗鼠IgG。检测时样本血清中HBsAg可与胶体金-抗体结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，如为阳性样本，则与检测线预包被的抗体结合形成“Au-sAb1-HBsAg-sAb2”夹心物而凝聚显色，则该试纸条在检测线和对照线位置出现两条紫红线。如为阴性，试纸条只在对照线位置出现一条紫红线。6/9/202319全血金标法增加了血细胞滤过膜，该膜只允许血清通过，而阻止血细胞的渗透，避免了血细胞的干扰，使检验结果更加准确。全血金标法取末梢手指血80～100μL，滴加到试纸条样品加入端。如果血样过于粘稠，须在样品加入端加入抗凝剂1滴，15～20min内观察结果.6/9/202320金标试剂在说明书上写实验环境应保持一定的湿度，避风，避免在过高温度下进行，我们在室温下进行，各条件都能满足试验的要求。但在无偿献血现场筛选中都在室外进行，条件较差，一年四季温差较大，不可能在一个恒定的符合试剂要求条件下进行检测，也必定造成漏检现象。6/9/202321造成漏检原因及应对措施①温度影响:

在春天和秋天温度和室温差不多，基本满足了试验的条件，漏检率就低。夏天温度高，血样很快就干燥了，所以最好在空调车里离空调近一些做试验，尽量减小温度对试剂反应的影响。冬天温度较低，血样较黏稠，血样中的血球蛋白成分不易和血浆分离，层析速度较慢，反应迟缓，有时发生层析不彻底现象，检测线不发生显色反应。试剂条上模糊不清，这就影响判定结果，漏检率较其他季节都高。6/9/202322②操作不当:HBsAg全血金标检测试剂在试纸条上加过滤膜，该膜只允许血清通过而阻止血细胞渗透，我们采集指端血时，要防止在采集血样时红细胞被破坏，Hb蛋白释放出来，也会透膜而层析到检测线，使检测线模糊不清，不易辩认，形成漏检。在采集血样时一定要按操作程序规范操作。用毛细管虹吸到足够量，让血样充分渗透到加样处产生层析作用，红细胞和血清被分离，血清中如含有HBsAg病毒则会发生显色反应，操作中发现有些同志为了简便直接用试剂条在指端上涂抹血样，这样会造成红细胞破裂而堵塞层析层，使血清样本不易层析，阳性样本不能通过层析作用在检测线发生显色反应。

6/9/202323③反应时间不够:有些同志为了怕献血员等时间长，献血员多的时候，就不等反应达到足够的时间，5min～8min就发了阴性报告，结果献血员抽了大血过后再查原试剂条已变成阳性反应。解决这个办法就是检测5个人以上再发报告，这样第一个人血样就有足够时间反应了。以下以此类推，尽量延长反应时间。6/9/202324④样品量的多少问题:试剂说明书上说强阳性2min可检出，5ng标准品10min可检出，lng标准品30min可检出。加血样应符合标准，加量不足和过量都影响判读结果。不足血清中HBsAg量达不到反应阈值，太多流出影响反应结果，过滤膜破损血细胞渗过使检测线模糊不清。6/9/202325⑤试剂的本身问题:由于每次试剂批号不相同、试剂的效价和反应灵敏度也不相同，有一些试剂样品层析速度快，有的慢，有的批号试剂检测线显色反应很模糊，对照线有阴影，有的批非常清晰。要根据不同情况灵活改变判定标准；还有的试剂不发生显色反应，这要先看批号是否是过期失效试剂；有的试剂在工厂生产过程中加样不均匀，出现漏加和少加，就可能出现无显色反应现象，遇到这情况就要重复做试验，因为金标试剂本身灵敏度有限，也有造成弱阳的标本漏检的可能。6/9/202326⑥高危人群影响:我们在无偿献血初检中经常发现有些已知自己是HBsAg病毒携带者献血员经常来献血车上来献，他们本意是想查一下身体。这些人大部是外地打工者或经常出差的业务员、采购员、推销员和外省常住本市办事处等工作人员，这些人到车上献血十有八九都是HBsAg病毒感染者，我们常化验出的HBsAg阳性大部分都是这类人，遇到这类人要仔细，延长反应时间，不明显要重复试验，认真判读结果。另外，还有个别标本可能存在HBsAg亚型而不易检出。6/9/202327三、血红蛋白含量检测硫酸铜比重法检测血红蛋白:取手指血1滴滴入已知比重的硫酸铜溶液中，在血液周围形成一层蛋白质铜盐。根据血液在硫酸铜溶液中的沉浮或下沉的时间长短的情况判断血液的比重。10s内血滴自然沉下为合格，浮在比重液表面为不合格。

6/9/202328按《血站技术操作规程》要求，硫酸铜溶液20℃时比重男女不同：男≥1.052(相当于Hb120g/L以上)，女≥1.051(相当于Hb115g/L以上)。6/9/202329据国内调查资料显示，一次献血200mL，男性血红蛋白平均下降7g/L，女性下降7～15g/L，血红蛋白恢复至献血前水平需要7～10天。也就是说一个血红蛋白含量为115g/L的女性献血者，在献出400mL血液以后体内的血红蛋白含量为85～101g/L，已经达到了中度贫血的状态，并且要维持该不良状态约1周。为了保护献血者的身体健康，使每位献血者献血后仍能保持正常的血红蛋白水平（男性120～160g/L，女性110～150g/L）。我们一定要认真检查献血者的血红蛋白含量。6/9/202330

注意事项：①当硫酸铜溶液变得浑浊而影响结果判断的时候应该更换新的硫酸铜溶液。②新的硫酸铜溶液开瓶使用前应注意观察瓶底是否有结晶形成，如有结晶则不能使用。③尽量保证使用时硫酸铜目测试剂的适用温度与室温一致，以保证结果的准确性。6/9/202331四、ALT检测1启动1.1打开电源，按下电源键，仪器开始启动。1.2仪器自动预热，待仪器屏幕上显示“INSERTCHECKTAB”，便可开始工作。2实验操作2.1取出试纸条，撕去上面的保护性铝箔。2.2吸取30μL血样（±2μL）。将血样加到试纸条加样区。2.3快速打开测量仓的仓门，在15s内将试纸条插入测量仓。正确插入试纸条，插好后会听到轻微的咔擦声。关上仓门。2.4仪器自动开始测量。约2-3min后测量完毕。读取仪器屏幕上显示的转氨酶值。2.5打开仓门，取出试纸条。若试纸条取不出来，将黑色推杆推上或可轻按测量仓中的红色按钮，将其取出。禁止蛮力扯出。6/9/202332注意事项1、加样时，枪头不能接触到试纸条的加样区，同时加样应该一次性完成。2、正确插入试纸条，插好后会听到轻微的卡擦声。若试纸条插入后，仪器屏幕未显示“CLOSEDOOR”，请取出试剂条，在15s内重新插入。3、关闭仓门时，动作要轻巧。4、仪器在测量时，不能打开测量仓的仓门，否则仪器将停止当前工作。5、试纸条安放测量仓前，必须保证测量仓清洁干燥。6、系统进行100次测试后或者上一次清洁7天后，必须对仪器进行清洁。将仪器关机，用70％的酒精棉轻轻擦拭光学头的出光孔及其周边，再擦拭加热器和磁头。清洁后，需15min以上方可重新开机。开机后，再做一次check。7、禁止将仪器直接暴露在阳光下及靠近热源地点。6/9/202333清洁过程：1.先打开盖子，翻下内部黑色的防护盖.2.清洁上部加热器，特别是测试孔，用REFLOTRON专用清洗纸或酒精棉球（70%）轻轻地擦.3.然后擦下部加热器，清洁好后必须干燥15分钟，并且检查底部加热头的正确位置，是否与传送器表面平行