流感病毒临床标本的采集方法运输保存课件

概述流感病毒分离成功与否很大程度上取决于临床标本的质量，及其保存运输等环节多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织一、采样对象和时间采样对象：流感样病例（没有服用过抗病毒药物）、人禽流感待查病例

流感样病例:发热（体温≥38℃），伴咳嗽或咽痛之一者，而缺乏其它的实验室确定诊断依据采集时间：病人发病后的头三天二、采样液要求常用的采样液有：普通肉汤（只用于鸡胚，对细胞有毒性），PH7.4-7.6的Hank’s液，Eagel`s培养液或水解乳蛋白溶液采样液应包含有一定量的蛋白质和抗菌素标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存Eagel`s基础培养基

抗生素名称终浓度庆大霉素0.1mg/ml抗真菌素2Ug/ml采样液抗生素含量三、临床标本的采集常用的标本种类：咽拭子鼻拭子漱口液鼻咽吸取物鼻洗液1、咽拭子

用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR实验）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4℃保存。先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4℃保存。将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次应在4℃条件下，24小时内运送至全国流感监测网络实验室；六、临床标本的处理原则采样液应包含有一定量的蛋白质和抗菌素如未能分离的标本应置-70℃或以下保存收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR实验）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织八、临床标本的的处理原则冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4℃保存。如未能分离的标本应置-70℃或以下保存上清液可直接接种或低温保存寄送流感毒株标本的包装要求4．人禽流感病毒分离、培养、纯化，微量中和试验等实验必须在生物安全三级（BSL-3级）实验室里操作。冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4℃保存。采咽拭子的器材和容器2、鼻拭子

将灭过菌干净的棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出，以同一拭子擦拭两侧鼻孔。将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去采鼻拭子的器材和容器

3、鼻咽吸取物

用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次

内有HEPA膜进风道鼻咽吸取装置出风道吸取过程正确错误错误不要触摸病人的脸!4、漱口液用10ml生理盐水漱喉。漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。然后，用平皿或烧杯收集洗液5、鼻洗液

患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5ml生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。然后让患者低头使生理盐水流出，用平皿或烧杯收集洗液。重复此过程洗两侧鼻孔四、标本收集注意事项操作要细心，严防标本间交叉污染，要做好自我保护采集标本要有一定力度标本采集后应迅速至于冰上或者4℃以下保存，因为流感病毒对热很敏感标本管上写明：医院名称，标本号，患者姓名，性别，采样日期标本采集后尽量在24小时内送到实验室进行病毒分离。24小时内未能进行病毒分离的标本应放-70℃或以下新鲜的临床采集标本应在4℃条件下，24小时内运送至全国流感监测网络实验室；未能24小时内送至实验室的，应置-70℃或以下保存冻存的临床采集标本应在冻存的条件下，低温送至实验室五、临床标本的运送要求冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4℃保存。上清液可直接接种或低温保存4．人禽流感病毒分离、培养、纯化，微量中和试验等实验必须在生物安全三级（BSL-3级）实验室里操作。冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4℃保存。冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4℃保存。六、临床标本的处理原则收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR实验）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去肺组织材料：肺组织材料在无菌条件下，用高压灭菌的乳钵研磨后，用生理盐水配成20%悬液，2000rpm离心10min，取上清加入抗生素。上清液可直接接种或低温保存直接在塑料管上用油性记号笔写明病毒的名称，同时也将病毒标本有关信息填在“流感/人禽流感毒株送检单”内，送检单应单独放在防水的袋子里用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。直接在塑料管上用油性记号笔写明病毒的名称，同时也将病毒标本有关信息填在“流感/人禽流感毒株送检单”内，送检单应单独放在防水的袋子里用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR实验）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去标本管上写明：医院名称，标本号，患者姓名，性别，采样日期应在4℃条件下，24小时内运送至全国流感监测网络实验室；5．临床标本病毒核酸提取在生物安全二级（BSL-2级）实验室的二级生物安全柜里进行，采用生物安全三级防护。用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR实验）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4℃保存。寄送流感毒株标本的包装要求如未能分离的标本应置-70℃或以下保存六、临床标本的处理原则新鲜的标本送至实验室后，病毒分离标本应尽快进行接种分离，24小时内能进行接种的可置于4℃保存，如未能接种应置-70℃或以下保存冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4℃保存。如未能分离的标本应置-70℃或以下保存七、临床标本的处理方法含聚丙烯纤维的拭子的采集标本:先将含聚丙烯纤维的拭子在管壁反复挤压后取出鼻洗液标本:充分振荡标本管，将粘液打碎。置4℃待其自然沉淀5～10分钟，取上清5ml。上清液可直接接种或低温保存

鼻咽吸取液：用干净灭菌过的毛细吸管，在无菌条件下反复吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同样置4℃待其自然沉淀5～10分钟，取上清5ml。上清液可直接接种或低温保存肺组织材料：肺组织材料在无菌条件下，用高压灭菌的乳钵研磨后，用生理盐水配成20%悬液，2000rpm离心10min，取上清加入抗生素。接种细胞或鸡胚八、临床标本的的处理原则

临床标本处理后，将原始标本分为三份:一份（40％）用于鸡胚接种，一份（30％）用于MDCK细胞接种，一份（30％）保存待复核用。对于病毒分离阳性的标本－70℃保存6个月流感病毒株的运输寄送流感毒株标本的包装要求病毒标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料管里，拧紧。盖上盖子后不应有泄漏，推荐使用螺口细胞保存管保存和运输流感病毒标本直接在塑料管上用油性记号笔写明病毒的名称，同时也将病毒标本有关信息填在“流感/人禽流感毒株送检单”内，送检单应单独放在防水的袋子里将装标本的密封袋放入专用运输箱内（或疫苗冷藏包），放入冰排，然后以柔软物质填充，内衬具吸水和缓冲能力的材料标本运输：异地运输可以采用邮寄或快递的方法九、禽流感标本采集的生物安全防护1．采集人禽流感临床样本时，采集人员需要做好个人防护，戴防护口罩、帽子、护目镜、手套、防护衣、鞋套。2.

人禽流感标本的运送、接收和保藏应当符合我国《病原微生物实验室生物安全管理条例》（国务院424号令）的有关要求。3．人禽流感临床标本的处理、分装在生物安全二级的实验室里进行，采用生物安全三级防护。4．人禽流感病毒分离、培养、纯化，微量中和试验等实验必须在生物安全三级（BSL-3级）实验室里操作。5．临床标本病毒核酸提取在生物安全二级（BSL-2级）实验室的二级生物安全柜里进行，采用生物安全三级防护。6．用灭活的抗原进行红细胞凝集抑制（HI）实验、RT-PCR病毒核酸检测可以在生物安全二级（BSL-2级）实验室里操作。谢谢!三、临床标本的采集常用的标本种类：咽拭子鼻拭子漱口液鼻咽吸取物鼻洗液2、鼻拭子

将灭过菌干净的棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出，以同一拭子擦拭两侧鼻孔。将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4℃保存。4．人禽流感病毒分离、培养、纯化，微量中和试验等实验必须在生物安全三级（BSL-3级）实验室里操作。6．用灭活的抗原进行红细胞凝集抑制（HI）实验、RT-PCR病毒核酸检测可以在生物安全二级（BSL-2级）实验室里操作。流感病毒分离成功与否很大程度上取决于临床标本的质量，及其保存运输等环节冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4℃保存。未能24小时内送至实验室的，应置-70℃或以下保存寄送流感毒株标本的包装要求先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。1．采集人禽流感临床样本时，采集人员需要做好个人防护，戴防护口罩、帽子、护目镜、手套、防护衣、鞋套。对于病毒分离阳性的标本－70℃保存6个月六、临床标本的处理原则如未能分离的标本应置-70℃或以下保存将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去4．人禽流感病毒分离、培养、纯化，微量中和试验等实验必须在生物安全三级（BSL-3级）实验室里操作。如未能分离的标本应置-70℃或以下保存如未能分离的标本应置-70℃或以下保存24小时内未能进行病毒分离的标本应放-70℃或以下肺组织材料：肺组织材料在无菌条件下，用高压灭菌的乳钵研磨后，用生理盐水配成20%悬液，2000rpm离心10min，取上清加入抗生素。含聚丙烯纤维的拭子的采集标本:先将含聚丙烯纤维的拭子在管壁反复挤压后取出将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去上清液可直接接种或低温保存操作要细心，严防标本间交叉污染，要做好自我保护五、临床标本的运送要求1．采集人禽流感临床样本时，采集人员需要做好个人防护，戴防护口罩、帽子、护目镜、手套、防护衣、鞋套。直接在塑料管上用油性记号笔写明病毒的名称，同时也将病毒标本有关信息填在“流感/人禽流感毒株送检单”内，送检单应单独放在防水的袋子里未能24小时内送至实验室的，应置-70℃或以下保存寄送流感毒株标本的包装要求操作要细心，严防标本间交叉污染，要做好自我保护将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去上清液可直接接种或低温保存流感病毒分离成功与否很大程度上取决于临床标本的质量，及其保存运输等环节盖上盖子后不应有泄漏，推荐使用螺口细胞保存管保存和运输流感病毒标本盖上盖子后不应有泄漏，推荐使用螺口细胞保存管保存和运输流感病毒标本标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存如未能分离的标本应置-70℃或以下保存将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去流感病毒分离成功与否很大程度上取决于临床标本的质量，及其保存运输等环节4．人禽流感病毒分离、培养、纯化，微量中和试验等实验必须在生物安全三级（BSL-3级）实验室里操作。用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR实验）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去采样对象：流感样病例（没有服用过抗病毒药物）、人禽流感待查病例

3、鼻咽吸取物

用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次

4、漱口液用10ml生理盐水漱喉。漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。然后，用平皿或烧杯收集洗液六、临床标本的处理原则新鲜的标本送至实验室后，病毒分离标本应尽快进行接种分离，24小时内能进行接种的可置于4℃保存，如未能接种应置-70℃或以下保存冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4℃保存。如未能分离的标本应置-70℃或以下保存将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR实验）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去对于病毒分离阳性的标本－70℃保存6个月流感病毒分离成功与否很大程度上取决于临床标本的质量，及其保存运输等环节八、临床标本的的处理原则采样对象：流感样病例（没有服用过抗病毒药物）、人禽流感待查病例多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织直接在塑料管上用油性记号笔写明病毒的名称，同时也将病毒标本有关信息填在“流感/人禽流感毒株送检单”内，送检单应单独放在防水的袋子里六、临床标本的处理原则6的Hank’s液，Eagel`s培养液或水解乳蛋白溶液冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4℃保存。采样液应包含有一定量的蛋白质和抗菌素6．用灭活的抗原进行红细胞凝集抑制（HI）实验、RT-PCR病毒核酸检测可以在生物安全二级（BSL-2级）实验室里操作。4．人禽流感病毒分离、培养、纯化，微量中和试验等实验必须在生物安全三级（BSL-3级）实验室里操作。六、临床标本的处理原则患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5ml生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。常用的采样液有：普通肉汤（只用于鸡胚，对细胞有毒性），PH7.常用的采样液有：普通肉汤（只用于鸡胚，对细胞有毒性），PH7.将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去置4℃待其自然沉淀5～10分钟，取上清5ml。将装标本的密封袋放入专用运输箱内（或疫苗冷藏包），放入冰排，然后以柔软物质填充，内衬具吸水和缓冲能力的材料用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR实验）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去如未能分离的标本应置-70℃或以下保存收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次采样对象：流感样病例（没有服用过抗病毒药物）、人禽流感待查病例未能24小时内送至实验室的，应置-70℃或以下保存用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制