艾滋病检测的几个问题

（优选）艾滋病检测的几个问题2006-3-7淮安当前第1页\共有145页\编于星期六\10点红丝带

—成为艾滋病防治的象征象征着对艾滋病感染者和病人的关心和支持象征着对生命的热爱和对平等的渴望象征着要用“心”来参与艾滋病防治工作2006-3-7淮安当前第2页\共有145页\编于星期六\10点第一部分艾滋病知识2006-3-7淮安当前第3页\共有145页\编于星期六\10点揭开AIDS历史的第一页MMWRMORBIDITYANDMORTALITYWEEKLYREPORTJune5,1981/Vol.30/No.21PneumocystiePneumonia–LosAngelesIntheperiodOctober1980-May1981,5youngmen,allactivehealthytreatedforbiopsy-confirmedPneumocystiscarinilPneumoniaat3differenthospitalsinLosAngeles,California.Twoofthepatientdied.All5patients……2006-3-7淮安当前第4页\共有145页\编于星期六\10点艾滋病艾滋病（获得性免疫缺陷综合症）

(AcquiredImmuneDeficiencySyndrome,AIDS)爱滋病-----艾滋病1981年6月5日首先在美国发现---同性恋者中1983年由法国科学家分离出病原体(humanimmunodeficiencyvirus，简称HIV)

---人类免疫缺陷病毒；同年在非洲发现异性间传播并发现HIV-21985年诊断试剂盒出现．2006-3-7淮安当前第5页\共有145页\编于星期六\10点2006-3-7淮安当前第6页\共有145页\编于星期六\10点艾滋病病毒（HIV-1）20面体，具被膜，属逆转录病毒中的慢病毒亚科属（RNA病毒），结构上分为二大部分：外层的被膜和内部的核。外层的被膜：包被在病毒的脂质基质上-----参与病毒与宿主细胞的结合。被膜抗原为糖蛋白。外膜糖蛋白gp120（分子量120000）构成被膜上的刺突（72个），存在高可变区----机体免疫保护无力的原因。跨膜蛋白gp41（分子量41000）含有重要的可变区域，对HIV-1的分型帮助。-----研究热点Gp120gp41抗原共同参与HIV与宿主细胞上CD4受体的结合。是血清诊断（确认）的重要标准。核内有被蛋白包裹的RNA。还有逆转录酶、整合酶和蛋白裂解酶。2006-3-7淮安当前第7页\共有145页\编于星期六\10点2006-3-7淮安当前第8页\共有145页\编于星期六\10点HIV-1亚型种类HIV-1是高变异的病毒，因此有许多“株”可分为M组(main)和O组(outer)，1998年法国研究人员发现了新的“株”，暂命名为N组。M组-----目前至少有十个亚型（A---J）2006-3-7淮安当前第9页\共有145页\编于星期六\10点认识艾滋病是致命性的、是性传播疾病的一种．HIV和大多数STDs临床上的主要不同之处在于：1．无法治疗及长期感染状态。2.无症状。许多受艾滋病病毒感染的人在潜伏期没有任何自觉症状，有一部分人在感染早期可以出现发烧、头晕、无力、咽痛、关节疼痛、皮疹、全身浅表淋巴结肿大等类似“感冒”的症状，有些人还可发生腹泻。这种症状通常持续1—2周后就会消失，此后病人便转入无症状的潜伏期。潜伏期病人的血液中有艾滋病病毒，血清艾滋病病毒抗体呈阳性反应，这样的人称艾滋病病毒感染者，或称艾滋病病毒携带者。艾滋病病毒感染者有很强的传染性，是传播艾滋病最重要的传染源。

2006-3-7淮安当前第10页\共有145页\编于星期六\10点

无症状期2-20年不等（平均近10年）。HIV感染与个人的行为有关，但它的影响已不仅是个人问题------已成为各国政府不得不面对的社会问题。艾滋病病毒严重破坏人体免疫功能，病人因抵抗疾病的能力极度下降而重复感染多种疾病，如带状疱疹、口腔霉菌感染、肺结核，特殊病原微生物引起的肠炎、肺炎、脑炎及其他感染，后期常常发生恶性肿瘤。最终因长期消耗，全身衰竭而死亡。至今还没有特效药治疗艾滋病的，也没有有效疫苗可用于预防。所以目前艾滋病还是一种病死率100%的极为严重的传染病。

2006-3-7淮安当前第11页\共有145页\编于星期六\10点艾滋病的传播途径性传播：通过两性行为传播是艾滋病病毒的主要传染途径，不论同性恋还是两性之间的肛交、口交有着更大的传染危险。血液传播：通过静脉注射毒品的人共用未经过消毒的注射器；输用未经艾滋病病毒抗体检查的供血者的血或血液制品，以及类似情况下的输骨髓和器官移值；注射器和针头消毒不彻底或不消毒。母婴传播：已受艾滋病病毒感染的孕妇可通过胎盘，或分娩时通过产道，也可通过哺乳，将病毒传染给婴儿。2006-3-7淮安当前第12页\共有145页\编于星期六\10点不会传染艾滋病病毒的途径空气；饮水、食物；日常工作和生活接触；游泳池；吸血昆虫和蚊子、跳蚤、虱子等；有防护的照料、护理艾滋病人；蹲式厕所及小便池。2006-3-7淮安当前第13页\共有145页\编于星期六\10点免疫应答成人：HIV进入机体后，通常需要经过一段时间（平均45天）才会产生抗体----窗口期----HIV抗体检测为阴性结果。窗口期:从机体感染HIV到产生相应抗体的这段时间叫窗口期，一般平均为1~3个月，95%以上HIV-1感染者产生抗体的时间是在感染后3个月以内，个别情况到6个月才可检测。随着感染过程的进展----血清阳转----诊断2006-3-7淮安当前第14页\共有145页\编于星期六\10点免疫应答新生儿:需在出生后16-18个月方可下定论。早期诊断可采用核酸检测技术。一般5岁左右发病。2006-3-7淮安当前第15页\共有145页\编于星期六\10点HIV感染后的免疫情况2006-3-7淮安当前第16页\共有145页\编于星期六\10点感染成功急性期症状诊断艾滋病死亡-

4-8周-出现症状8-10年1年0.5-2年HIV抗体-HIV抗体+,无症状有症状HIV抗体+艾滋病感染艾滋病后的自然发展过程2006-3-7淮安当前第17页\共有145页\编于星期六\10点第二部分艾滋病的流行2006-3-7淮安当前第18页\共有145页\编于星期六\10点艾滋病流行规律艾滋病在一个地区的传播流行一般都由高危险人群开始，然后传播到一般人群。这种流行规律已经在世界各地得到验证。所谓高危人群就是指吸毒者、卖淫妇女、同性恋等人群。由于这些高危人群不属于社会主流，当艾滋病开始在这些人群流行时，往往很难引起政府的重视。人们常常错误地认为，艾滋病仅局限在所谓的高危人群，不会影响一般人群。而等到艾滋病在一般人群中流行时，情况已经非常严重，控制艾滋病的良机已经失去。

2006-3-7淮安当前第19页\共有145页\编于星期六\10点全球范围看，艾滋病流行趋势仍继续在加大，HIV感染和死亡的数字居高不下。UNAIDS（2005年11月）报告，2005年新增500万，估计全球有HIV感染者4030万人（3670至4530万）。2005年，全球估计有490万（430-660万）新感染者，310万（280-360万）人死于艾滋病。每天估计有14000人新感染HIV。其中95%生活在低收入和中等收入的国家。一半左右的新感染发生在15–24岁年轻人全球艾滋病仍呈蔓延趋势资料来源UNAIDS2006-3-7淮安当前第20页\共有145页\编于星期六\10点全球艾滋病传播途径和比例传播形式同性性传播异性性传播输入血液/血制品传播静脉吸毒传播母婴传播比例(%)10705~105~10102006-3-7淮安当前第21页\共有145页\编于星期六\10点艾滋病流行全球共同模式

同性恋注射毒品者妓女嫖客家庭妇女婴儿2006-3-7淮安当前第22页\共有145页\编于星期六\10点艾滋病今天在中国流行的形势

DrugUsers吸毒者Sexworkers性工作者Family家庭Children儿童SourcePopulation

源头人群BridgePopulation

桥梁人群GeneralPopulation一般人群2006-3-7淮安当前第23页\共有145页\编于星期六\10点我国流行概况自1985年以来，截至到2005年12月底全国31省（自治区、直辖市）累计报告HIV感染者144229例，其中艾滋病病例35487例。2005年最新评估显示，目前，中国现有艾滋病病毒感染者和病人约65万人（54-76万人），其中艾滋病病人约7.5万人（6.5-8.5万人）.

2006-3-7淮安当前第24页\共有145页\编于星期六\10点全国累计报告HIV感染者按地理分布图

(截至2005年12月底)

2006-3-7淮安当前第25页\共有145页\编于星期六\10点截至2005年全国HIV感染者按传播途径分布

2006-3-7淮安当前第26页\共有145页\编于星期六\10点人群分布特点从性别分布上看，全国HIV感染者以男性为主。累积报告的144229例病例中，男性占65％。2004年度报告的47615例HIV感染者中，男性占63％，女性感染者的比例较往年有所上升。从年龄分布上看，青壮年仍为受艾滋病影响的主要人群，以20—29岁年龄组感染人数最多，占50％左右，其次为30～39岁年龄组(约30％)和40—49岁年龄组(约10％)：15岁以下儿童所占比例2005年比2000年明显增加。2006-3-7淮安当前第27页\共有145页\编于星期六\10点中国艾滋病流行的３个阶段

早期阶段（85－88）“国外的问题”。卫生部长：“这种病不会在中国发展，因为同性恋和性乱在中国受到限制”对策：禁止从国外进口血液制品，禁止国外艾滋病病毒感染者在中国居住

传播阶段

（89-94）89年云南省近１５０IDU被检测出HIV（＋）90年初，商业机构从卖血者“采购”血液，分离血浆后，将红细胞输回卖血者体内（以使卖血者更频繁卖血）。这种不洁操作，使约２５万名卖血者感染了艾滋病静脉注射吸毒者和卖血者占了艾滋病病毒感染者的２／３扩张阶段（95－？）IDU/卖血者将病毒迅速传播给他们的性伴和孩子性服务者的感染逐步上升男同性恋者也正慢慢成为高危人群

“中国正成为世界上艾滋病传播最迅速的国家之一”

2006-3-7淮安当前第28页\共有145页\编于星期六\10点中国艾滋病流行特点艾滋病疫情地区差异大（河南>2万，云南、广西>1万，内蒙、宁夏、青海、西藏<100）艾滋病疫情继续呈上升趋势

传播途径仍以经吸毒传播为主，但三种传播途径并存

艾滋病发病和死亡持续增加

艾滋病由高危人群向一般人群扩散的态势仍在继续

女性感染者比例上升(2001年22.7%,2003年35.6%,2004年39%)2006-3-7淮安当前第29页\共有145页\编于星期六\10点江苏省艾滋病流行概况1991年发现首例HIV感染者，1999年发现首例艾滋病患者。截止2005年9月底，全省累计报告HIV感染者935例艾滋病病人213例艾滋病病毒感染者及病人死亡129例全省已有13个市的85个县（市、区）发现江苏籍感染者。2006-3-7淮安当前第30页\共有145页\编于星期六\10点江苏省历年报告HIV/AIDS情况

2006-3-7淮安当前第31页\共有145页\编于星期六\10点江苏省发现HIV感染者地区分布2006-3-7淮安当前第32页\共有145页\编于星期六\10点发现者感染途径构成情况2006-3-7淮安当前第33页\共有145页\编于星期六\10点历年发现的HIV年龄构成20－50岁之间的青壮年占83.53%2006-3-7淮安当前第34页\共有145页\编于星期六\10点前10位发现途径感染者发现主要通过临床及各类体检被动发现2006-3-7淮安当前第35页\共有145页\编于星期六\10点艾滋病对社会经济的影响

艾滋病被发现已有20多年，随着人类对AIDS认识的不断深入，AIDS流行的规律也逐渐为人类所了解，这一规律包含了AIDS对全社会的影响。社会学家根据其流行的特殊性将它分为3期：HIV流行期、AIDS流行期、HIV/AIDS引起的羞辱与歧视以及对社会、文化、经济、政治等的影响的流行期。这3个期之间没有明显的界限，常常互相重叠。AIDS流行到今天，人们已经明显地感到它在社会中的各项负面影响。2006-3-7淮安当前第36页\共有145页\编于星期六\10点

疾病的流行或多或少会对社会造成一定的影响，AIDS以其特殊的流行特点，决定其对社会造成的影响是多方面、多层次的。随着AIDS流行程度的不断加深，其影响可以分为对个人、家庭、社区和社会的影响。2006-3-7淮安当前第37页\共有145页\编于星期六\10点AnAIDSpatientwhocannotaffordtreatmentinhospital患者没钱上医院治疗

2006-3-7淮安当前第38页\共有145页\编于星期六\10点Awomenwithhergrandson,whosefatherdiedofAIDS,heisHIVpositivenow.儿子死于艾滋病，留下一个孙子也是艾滋病毒携带者

2006-3-7淮安当前第39页\共有145页\编于星期六\10点HebecomesorphanedbecauseofAIDS父母双亡，无依无靠。

2006-3-7淮安当前第40页\共有145页\编于星期六\10点形势：三个空前：政策承诺政策支持经费投入三积极：地方政府有关部门社区社团2006-3-7淮安当前第41页\共有145页\编于星期六\10点温家宝总理、吴仪副总理看望艾滋病患者

2003年12月1日2006-3-7淮安当前第42页\共有145页\编于星期六\10点“这是第一次由中国高层领导出面公开表达对艾滋病病人的关怀。”2006-3-7淮安当前第43页\共有145页\编于星期六\10点国务院副总理吴仪到河南省考察艾滋病防治工作

2003年12月18日~20日2006-3-7淮安当前第44页\共有145页\编于星期六\10点国务院防治艾滋病工作委员会成立2004年2月26日2006-3-7淮安当前第45页\共有145页\编于星期六\10点2004年11月30日，中共中央总书记、国家主席胡锦涛到北京佑安医院看望正在这里治疗的艾滋病患者，慰问医务人员和志愿者。这是胡锦涛与患者亲切交谈2006-3-7淮安当前第46页\共有145页\编于星期六\10点“四免一关怀”政策对农村居民和城镇未参加基本医疗保险等医疗保障制度的经济困难人员中的艾滋病病人免费提供抗病毒药物；在全国范围内为自愿接受艾滋病咨询检测的人员免费提供咨询和初筛检测；为感染艾滋病病毒的孕妇提供免费母婴阻断药物及婴儿检测试剂；对艾滋病病人的孤儿免收上学费用；“一关怀”指的是国家对艾滋病病毒感染者和患者提供救治关怀，将生活困难的艾滋病病人纳入政府救助范围，按照国家有关规定给予必要的生活救济。积极扶持有生产能力的艾滋病病人开展生产活动，增加收入。2006-3-7淮安当前第47页\共有145页\编于星期六\10点中国当前的艾滋病形势低流行率集中在高危人群集中在一小部分的社区2006-3-7淮安当前第48页\共有145页\编于星期六\10点

中国的主要战略

防止二代传播2006-3-7淮安当前第49页\共有145页\编于星期六\10点第三部分HIV的检测、质量控制及检测网络现状2006-3-7淮安当前第50页\共有145页\编于星期六\10点全国艾滋病检测工作文件1990.全国HIV检测管理规范（试行）1997.9.全国艾滋病检测工作规范（97版）2003.5.全国艾滋病检测技术规范（试行）-----“规范”2003.全国艾滋病检测工作管理办法-----“办法”2004.8.全国艾滋病检测技术规范（2004版）2006-3-7淮安当前第51页\共有145页\编于星期六\10点HIV的实验室检测

包括病原学检测和免疫学检测。前者包括病毒分离培养、病毒抗原检测、病毒核酸检测等。后者主要检测人体产生的特异性抗体，是目前艾滋病诊断中最常用的方法

HIV抗体检测——确认是否感染的依据。2006-3-7淮安当前第52页\共有145页\编于星期六\10点

HIV抗体检测的目的

HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。

以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。

以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况，包括临床检测和自愿咨询检测（VCT）、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。

以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV，包括献血员筛查和原料血浆筛查。

2006-3-7淮安当前第53页\共有145页\编于星期六\10点HIV检测实验室的设置1、种类：确认实验室筛查（或称初筛）实验室2、分级：国家艾滋病参比实验室艾滋病确认中心实验室艾滋病确认实验室艾滋病筛查中心实验室艾滋病筛查实验室

2006-3-7淮安当前第54页\共有145页\编于星期六\10点艾滋病筛查实验室1、承担本地区艾滋病病毒抗体筛查任务。2、负责将筛查阳性反应标本送艾滋病筛查中心实验室复检。3、按规范要求开展检测前后咨询。2006-3-7淮安当前第55页\共有145页\编于星期六\10点筛查实验室配置酶标仪+洗板机生物安全柜洗眼器移液器普通离心机普通冰箱恒温水浴高压灭菌器2006-3-7淮安当前第56页\共有145页\编于星期六\10点筛查实验室必备条件配置到位人员：有3名以上的医技人员，其中中级卫生技术人员1名以上，从事病毒血清学工作2年以上，接受过国家级或省级HIV抗体确认中心的培训，并获得合格证书。有独立的实验室，污染区和清洁区要分开。符合《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2004）对II级生物安全实验室（BSL-2）的各项要求。2006-3-7淮安当前第57页\共有145页\编于星期六\10点

艾滋病筛查中心实验室

1、承担辖区内艾滋病病毒抗体筛查任务。2、负责辖区内阳性反应标本的复检，及时将需要做确认试验的标本转送确认实验室。3、负责辖区内艾滋病筛查实验室的技术培训和指导。4、按规范要求开展检测前后咨询和培训。2006-3-7淮安当前第58页\共有145页\编于星期六\10点艾滋病确认中心实验室1、承担卫生部和省卫生行政部门指定区域的艾滋病病毒抗体确认和部分筛查任务。2、负责省内艾滋病检测实验室的人员培训。组织省级业务培训。3、负责本省艾滋病检测实验室的质量管理和技术指导。每年至少开展一次室间质量考评。4、负责建立本省实验室数据库，定期报省卫生行政部门国家艾滋病参比实验室。5、协助卫生行政部门做好本省艾滋病检测实验室网络建设，包括实验室验收和考核。6、负责本省使用的艾滋病诊断试剂质量评估。7、按规范要求开展检测前后咨询及培训。2006-3-7淮安当前第59页\共有145页\编于星期六\10点检测程序

筛查试验重复检测确认试验2006-3-7淮安当前第60页\共有145页\编于星期六\10点筛查试验方法用于检测HIV抗体筛查试验的试剂盒种类很多，目前常用的筛查试剂有酶联免疫试验（ELISA）、明胶颗粒凝集试验（PA）、斑点ELISA、斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验、唾液检测卡、其它快速筛查试验、尿液HIV抗体检测。第一个用于HIV抗体诊断的试剂盒于1985年问世，

ELISA最常用。操作简单、价格便宜，敏感性、特异性较好，适合我国国情。2006-3-7淮安当前第61页\共有145页\编于星期六\10点筛查试剂的要求

筛查试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检合格、临床评估质量优良、在有效期内的试剂。推荐使用经临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。2006-3-7淮安当前第62页\共有145页\编于星期六\10点HIV抗体筛查试验结果

筛查试验（-）出具“HIV抗体阴性”报告筛查试验（+）出具“HIV抗体待复查”，

不能出阳性报告

2006-3-7淮安当前第63页\共有145页\编于星期六\10点复检初次筛查时发现阳性反应，应及时进行复检，复检时除了原标本外尚需重新采集标本一份。（这样既可核对原有检测和复检结果一致性，又可了解有无血液标本受污。）两份标本同时送检。国际上均认为复检阳性才是做确认检测的指征。2006-3-7淮安当前第64页\共有145页\编于星期六\10点复检时的检测试剂应该用2种不同原理的试剂。有时由于条件限制，当用ELISA筛查呈阳性反应，在重复检测标本时，如用快速试剂往往敏感性不高，故只好提出用两种不同厂家制造或用原试剂外再用一种高质量的ELISA试剂进行检测。2006-3-7淮安当前第65页\共有145页\编于星期六\10点HIV抗体检测的要点

筛查试验阳性不能出阳性报告。

严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。

严格按照试剂盒说明书操作，不得擅自更改。

注意防止样品间交叉污染。

注意安全防护。2006-3-7淮安当前第66页\共有145页\编于星期六\10点HIV抗体确认包括免疫印迹实验（WB）、条带免疫试验（LIATEKHIVⅢ）、放射免疫沉淀试验（RIPA）及免疫荧光试验（IFA）

只有HIV抗体确认实验结果判为阳性的才能出具“HIV抗体阳性”的报告2006-3-7淮安当前第67页\共有145页\编于星期六\10点HIV确认实验2006-3-7淮安当前第68页\共有145页\编于星期六\10点2006-3-7淮安当前第69页\共有145页\编于星期六\10点艾滋病实验室质量管理

质量保证质量控制质量评价2006-3-7淮安当前第70页\共有145页\编于星期六\10点质量保证实验室规范化建设人员培训及其评价（岗前培训、复训等）标本采集、运送和处理检测方法和试剂的选择设备维护与校准文件和文件管理（SOP、原始记录、标本登记、文件存档）2006-3-7淮安当前第71页\共有145页\编于星期六\10点艾滋病实验室应建立的SOP（1）样品的接收、登记和处理，（2）检测方法和步骤，（3）仪器的使用维护和校准，（4）实验中的质量控制，（5）结果解释与报告，（6）保密程序，（7）检测数据的记录与保存，（8）追踪和处理，（9）实验室的清理和消毒，（10）实验室安全防护。

2006-3-7淮安当前第72页\共有145页\编于星期六\10点质量控制质控品的制备和保存质控图的建立及应用（灰区）（“即刻法”质控）质控规则及使用质控图的分析及失控处理2006-3-7淮安当前第73页\共有145页\编于星期六\10点质量评价评价体系（国际相关机构、国家艾滋病参比实验室、艾滋病确认中心实验室、艾滋病筛查中心实验室）质量评价参比标本评价程序（标本的制备发放—盲检—报告检测结果—分析—评价报告—反馈—自我评价并总结）2006-3-7淮安当前第74页\共有145页\编于星期六\10点质控血清1．内部对照质控血清内部对照质控血清是指每个试剂盒内厂方提供的一套阴性和阳性对照2．外部对照质控血清外部对照质控血清是各级实验室为了监控每次检测的重复性和稳定性以及检验试剂盒批间差异而设置的一套阴性和阳性对照血清。设立外部对照还可以提示标本处于临界值状态时的检验操作情况。2006-3-7淮安当前第75页\共有145页\编于星期六\10点外部对照质控血清的组成

理想的外部对照应该包括阳性对照、弱阳性对照、临界值对照和阴性对照。在每次实验时应设置一个单一浓度水平的质控品即弱阳性对照。这个弱阳性对照的值以设定在该试剂盒Cut-off值的2－3倍为宜。2006-3-7淮安当前第76页\共有145页\编于星期六\10点外部对照质控血清的来源和选择1）通过向有关机构购买获得2）通过实验室制备获得(比较经济的方法)①混合试剂盒内部对照血清，等量分装。②混合HIV抗体阳性或阴性人血清，3000转/分钟离心15分钟，用0.2m生物滤膜过滤除菌后再进行56℃30分钟加热灭活处理。弱阳性对照可以通过使用HIV抗体阴性的正常人血清梯度稀释HIV抗体强阳性血清并经标定后得到。弱阳性对照的OD值以2－3倍于Cut-off为宜。2006-3-7淮安当前第77页\共有145页\编于星期六\10点外部对照质控血清的质量要求

1、应该均一、无菌，并且不含有影响ELISA反应的防腐剂。2、质控物的管间或瓶间变异必须小于监测系统预期的变异（cv＜20%），并且质控物的成分应在稳定状态中。

2006-3-7淮安当前第78页\共有145页\编于星期六\10点外部对照质控血清的保存1、外部对照血清或血浆的一次制备量应该足够本实验室一年使用．2、标定后应该等量分装，每个分装的量应足够一周使用．3、应该分类作好标记，使用不同颜色的标签．4、应该存放在－70℃，如无条件则存放在非自动除霜的－20℃冰箱．5、外部对照血清一旦融解以后应该存放在2－8℃，一周后必须弃去，不能重新冻存．2006-3-7淮安当前第79页\共有145页\编于星期六\10点外部对照质控血清的使用

每一次实验必须使用外部对照质控血清，以便监控实验的重复性和稳定性。同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间差异，绘制质量控制图。

2006-3-7淮安当前第80页\共有145页\编于星期六\10点质控图XX+SX-SX-2SX+2S95％可信限为x2s2006-3-7淮安当前第81页\共有145页\编于星期六\10点质控图建立和分析的注意点建立质控图参数：平均值(x)、标准差(s)、变异系数(cv)。质控图的判定和分析：失控、位移、趋势采用S/CO比值制图要比单用OD或A值制图的方法给出更为精确的评估，因为它将每次/每天OD值的浮动考虑在内。建议长期和稳定地使用一种质量好的试剂盒(各实验室本身可以进行试剂盒质量的比较)。由于不同厂家生产的ELISA试剂盒所使用的HIV抗原的构成(env,gag或pol区)以及使用比例不同，因此对同一标本的反应会有差异，表现在OD值相差较大，对外部对照质控血清结果的分析造成困难。2006-3-7淮安当前第82页\共有145页\编于星期六\10点“即刻法”质控“即刻法”质控统计方法，在连续测3次后，即可对第3次检验结果进行质控。具体计算方法如下：1）将测定值从小到大排列：x1，x2，x3……xn(x1为最小值，xn为最大值)2）计算x和s3）计算SI上限值和SI下限值SI上限=(X最大值-x)/sSI下限=(x-X最小值)/s2006-3-7淮安当前第83页\共有145页\编于星期六\10点“即刻法”质控(Cont.)将SI上限、SI下限与SI值表中的数字比较Nn3sn2sNn3sn2s31.151.15122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.662.3761.941.82152.712.4172.101.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.50102.412.18192.852.53112.482.23202.882.562006-3-7淮安当前第84页\共有145页\编于星期六\10点“即刻法”质控(Cont.)当SI上限和SI下限<n2s时表示处于控制范围内，可以继续往下测定，继续重复以上各项计算；当SI上限和SI下限有一值处于n2s和n3s值之间时说明该值在2s-3s范围，处于“告警”状态；当SI上限和SI下限有一值>n3s值时说明该值已在3s范围之外，属“失控”。数值处于“告警”和“失控”状态应舍去，重新测定该项质控血清和病人样本。舍去的只是失控的这次数值，其他次测定值仍可继续使用。2006-3-7淮安当前第85页\共有145页\编于星期六\10点做好全过程质控！2006-3-7淮安当前第86页\共有145页\编于星期六\10点从事快速HIV检测单位必须遵守有关部门批准购买有效的试剂从事人员经过培训，有上岗证按规定对象检测严格按厂家说明书操作满足质量保证要求做好检测前后咨询2006-3-7淮安当前第87页\共有145页\编于星期六\10点检测前后的咨询

目的：预防性病艾滋病的感染与传播

提供所需知识、信息；帮助预防感染；促进改变危险行为

减少对个人、家庭和社会的影响

帮助求咨者应付心理、情感、社会压力；建立信心，增强责任感

支持感染者/病人接受或完成治疗

帮助求咨者遵医嘱彻底治愈疾病，性伴治疗；HIV感染者----改善生活质量2006-3-7淮安当前第88页\共有145页\编于星期六\10点咨询的对象担心感染的人想要检测的人已做过检测的人HIV感染者感染者的家人或朋友卫生工作人员2006-3-7淮安当前第89页\共有145页\编于星期六\10点咨询的原则尊重的原则不评判原则启发/自我决策原则保密原则坚持职业关系2006-3-7淮安当前第90页\共有145页\编于星期六\10点HIV传播效率传播方式效率（1/100次暴露）男女0.1~0.2女男0.033~0.1男男0.5~3.0母婴13~48血液(血制品)90~1002006-3-7淮安当前第91页\共有145页\编于星期六\10点HIV抗体检测前的咨询咨询员应了解的内容:求咨询者要求检测的原因;感染危险性的评估;求咨者对HIV抗体检测的知识了解多少;

(必须澄清求咨者的错误信息)求咨者社会支持条件以及应付各种危机情况的能力2006-3-7淮安当前第92页\共有145页\编于星期六\10点检测前咨询须说明的一些问题HIV、AIDS抗体检测、其它检测窗口期、婴儿的抗体被动携带不能检测出感染时间无论检测结果怎样，都应改变危险行为国家对HIV检测的有关规定清楚告知取报告的时间、地点、人、费用2006-3-7淮安当前第93页\共有145页\编于星期六\10点HIV抗体检测后的咨询注意事项：所有检测结果必须认真核对、妥善保管不能将HIV抗体检测报告单随便放在化验室及导医台上自取不应通过电话报告结果2006-3-7淮安当前第94页\共有145页\编于星期六\10点阴性结果的咨询

认真核对最后一次可能接触HIV的行为发生的时间，排除窗口期；无论没有感染的人还是需要复查的人，都应鼓励他们改变危险行为，并与之讨论降低感染危险的方法；有心理问题出现的情况（综合症）2006-3-7淮安当前第95页\共有145页\编于星期六\10点不确定结果的咨询要仔细询问造成不确定结果的一些因素是否存在建议在1，3，6个月后复查，并说明原因和必要性2006-3-7淮安当前第96页\共有145页\编于星期六\10点江苏省检测工作江苏省自1985年开始HIV抗体检测工作。1991年发现首例HIV感染者。自1998年开始建设江苏省艾滋病检测网络。至2005年12月底全省累计报告HIV感染者1103例，艾滋病病人245例。2006-3-7淮安当前第97页\共有145页\编于星期六\10点目前我省HIV检测网络现状至2005年6月：确认中心实验室——1个确认实验室——3个筛查中心实验室——13个筛查实验室——316个共332个HIV检测实验室2006-3-7淮安当前第98页\共有145页\编于星期六\10点江苏省筛查实验室的分布状况南京市—54无锡市—24徐州市—37常州市—19苏州市—54南通市—32连云港市—17淮安市—12盐城市—22扬州市—15镇江市—18泰州市—17宿迁市—8

2006-3-7淮安当前第99页\共有145页\编于星期六\10点第四部分安全防护及职业暴露的预防和处理2006-3-7淮安当前第100页\共有145页\编于星期六\10点

中华人民共和国国家标准GB19489－2004

实验室生物安全通用要求laboratories—Generalrequirementsforbiosafety

2004－04－05发布2004-10-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会2006-3-7淮安当前第101页\共有145页\编于星期六\10点内容前言范围术语和定义危害程度分级生物危害评估防护屏障和生物安全水平分级设施和设备要求动物实验室的生物安全个人防护装备管理要求良好内务行为安全工作行为化学品安全放射安全紫外线和激光光源（包括高强度光源的光线）电气设备防火水灾和其他自然灾害紧急撤离样品的运送废弃物处置参考文献2006-3-7淮安当前第102页\共有145页\编于星期六\10点WHO、英美微生物的指导性分类第一类，不引起人类疾病；第二类，可以引起人类疾病，并具有危险性，但不会传播；第三类，可以引起严重的人类疾病，并具有危险性，还可以传播；第四类，可以引起人类疾病，具有很大危险性及传播性，而且没有预防及治疗措施，如埃博拉病毒、拉沙热病毒）

HIV被分在第三类2006-3-7淮安当前第103页\共有145页\编于星期六\10点实验室生物安全级别艾滋病血清学检测艾滋病血清学检测（包括筛查和确认实验室）、免疫学和核酸检测应在符合Ⅱ级生物安全实验室（BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。HIV分离、研究HIV分离、细胞培养及研究工作应在Ⅲ级生物安全实验室（BSL-3）中进行。2006-3-7淮安当前第104页\共有145页\编于星期六\10点实验室的要求有专用实验室，应划分清洁区、半污染区和污染区，并有明显标记，有充足的操作空间。实验室墙面、地面、台面材料应耐酸、耐碱、易清洁消毒、不渗漏液体。艾滋病实验室所用的个人防护装备均应符合国家有关标准的要求。2006-3-7淮安当前第105页\共有145页\编于星期六\10点防护用品

实验室应为每个工作人员配备足够的防护服，包括白大衣、隔离衣或一次性工作服。实验室应配备足够的一次性手套、一次性口罩、安全防护眼镜及冲洗眼睛的装置。实验室应配备实验室专用的工作鞋，鞋面覆盖足背，鞋底防滑。2006-3-7淮安当前第106页\共有145页\编于星期六\10点个人防护高标准的个人保健对于减少感染的危险性很重要。皮肤受损、患病都会增加感染的危险。皮肤的任何伤口和擦伤都应以防水敷料覆盖。进实验室前要摘除首饰，修剪长的带刺的指甲，以免刺破手套。进入实验室应穿隔离衣，戴手套。如果接触物传染危险性大，则应戴双层手套和防护眼镜。离开实验室前必须脱去隔离衣，并洗手。严禁在艾滋病实验室内进食、饮水、吸烟和化妆。2006-3-7淮安当前第107页\共有145页\编于星期六\10点实验室管理要求建立安全制度人员培训和管理建立严格的保密制度并定期检查严格质量管理对存放试剂和有毒物区域的监控建立应付突发事件的措施

2006-3-7淮安当前第108页\共有145页\编于星期六\10点建立安全制度非实验室人员和非实验室物品不得进入实验室(准入制度）

强化全员安全培训和“普遍性防护原则”安全意识，所有工作人员都有责任保护自己和他人的安全。根据《规范》制订本实验室的安全工作制度或安全标准操作程序（S-SOP），该制度或程序应适用于现有的实验条件，并与实验室其它规定相一致。必须告知新上岗人员实验室工作的潜在危险。实验室工作人员年度采血检测HIV抗体和备案制度的建立。制定意外事故处理预案，建立意外事故的登记和报告制度。2006-3-7淮安当前第109页\共有145页\编于星期六\10点严格的保密制度与HIV/AIDS相关检测项目的所有资料均应严格保密，包括送检单与检测记录的保管、报告单的发放和工作人员年度采血检测等。艾滋病检测实验室所有人员应具有高度的保密意识。不可对无关人员透露检测结果。2006-3-7淮安当前第110页\共有145页\编于星期六\10点实验室的安全操作做好个人防护禁止采用口腔吸液管，必须使用移液器来操作实验室的所有液体。操作中有标本、检测试剂外溅时应及时消毒。血清及其它体液样品均应严格按要求妥善保存，HIV抗体阳性样品应做好标记单独保存并做好记录。尽量避免在实验室使用针头、刀片、玻璃器皿等，以防刺伤。2006-3-7淮安当前第111页\共有145页\编于星期六\10点样品的采集所有的血液、血清、未固定的组织和组织液样品，均应视为有潜在传染性，都应以安全的方式进行操作。2006-3-7淮安当前第112页\共有145页\编于星期六\10点样本的运送1．样品从一个实验室转送到另外一个实验室，必须是血清或血浆，除特殊需要外，一般不用全血，且须置于带有盖帽的试管内，防止样品流出，试管上应有明显的标记，标明种类、姓名、地区、时间或原有的编号。2．感染性材料必须放在密闭的管子中，再将管子放在含有足够吸水材料的生物危险罐中，以防泄漏。将试管放入专门带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理，在所放样品管周围上下均垫有软性物质，以免碰碎，容器外标有HIV检测专用字样。如果路程较远或者气候炎热时，盛有样本的容器应置于4℃以下运送。送样同时需附送验单。2006-3-7淮安当前第113页\共有145页\编于星期六\10点废弃物处置和消毒废弃物处置应符合《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2004）和《消毒技术规范（2002年版）》。从艾滋病实验室出来的所有废弃物，包括不再需要的样品、培养物和其它物品，均应视为感染性废弃物，应置于专用的密封防漏容器中，安全运至消毒室，并在高压消毒后再进行处理或废弃。2006-3-7淮安当前第114页\共有145页\编于星期六\10点HIV对环境的抵抗力

HIV对外界环境中物理和化学因素抵抗力均较低,比乙型肝炎病毒(HBV)的抵抗力低得多.因此,对HBV的消毒和灭活方法对HIV均可使用。对热的抵抗力对化学品的抵抗力对紫外线的抵抗力2006-3-7淮安当前第115页\共有145页\编于星期六\10点对热的抵抗力在室温(22-27℃)液体环境下可存活15天以上。在54-56℃时病毒活性约每20分钟下降1个对数TCID50(细胞的半数感染单位)。56℃30分钟可使HIV在体外对人的T淋巴细胞失去感染性，但不能完全灭活血清中的HIV。经过60℃3小时或80℃30分钟作用，不能检出感染性病毒，对逆转录病毒灭活，WHO推荐100℃20分钟。在干燥的室温下HIV的感染性持续时间可达3天以上。2006-3-7淮安当前第116页\共有145页\编于星期六\10点

对化学品的抵抗力

HIV不耐酸，pH3.0时病毒滴度在10分钟下降4个对数。HIV较耐碱,pH高达9.0时,病毒滴度下降甚微。HIV对消毒剂、去污剂等化学因素一般敏感，如0.2%次氯酸钠5分钟可灭活HIV。酒精对起其具有良好的灭活作用，70%酒精只需1分钟即不能检出RT酶活性。吐温-20（2.5%）对HIV无灭活作用。2006-3-7淮安当前第117页\共有145页\编于星期六\10点对紫外线的抵抗力对紫外线或射线不敏感，紫外线、射线不能灭活HIV。2006-3-7淮安当前第118页\共有145页\编于星期六\10点1997-2005年我国HIV职业暴露事故统计2006-3-7淮安当前第119页\共有145页\编于星期六\10点我国HIV职业暴露事故发生实验室类别统计

（1997-2004)2006-3-7淮安当前第120页\共有145页\编于星期六\10点我国防疫、医院、公安系统HIV职业暴露事故发生比例（1997-2004)2006-3-7淮安当前第121页\共有145页\编于星期六\10点定义

职业暴露是指实验室、医护、预防保健人员以及有关的监管工作人员，在从事艾滋病防治工作及相关工作的过程中意外被艾滋病毒感染者或艾滋病患者的血液、体液污染了破损的皮肤或非胃肠道粘膜，或被含有艾滋病病毒的血液、体液污染了的针头及其它锐器刺破皮肤，而具有被艾滋病病毒感染的可能性的情况。2006-3-7淮安当前第122页\共有145页\编于星期六\10点原则坚持预防为主和安全操作是避免艾滋病防治工作中职业暴露感染艾滋病毒的基本保证。各有关机构应严格内部安全防护管理制度，认真执行《全国艾滋病检测技术规范》(试行)及安全操作的有关规定。2006-3-7淮安当前第123页\共有145页\编于星期六\10点

抗艾滋病病毒药物的使用是作为减少HIV职业感染的最后一个环节。现已证明，职业暴露后感染艾滋病毒的危险性是存在的，但是发生率很低，这取决于暴露的性质、接触病毒的多少等诸多因素。及时联合使用2-3种抗-HIV药物，可以明显降低实验室和医护人员职业暴露后感染艾滋病毒的危险性。2006-3-7淮安当前第124页\共有145页\编于星期六\10点HIV职业暴露的预防

学习医源性传播防止、HIV实验室安全操作和防护措施有专门领导和管理系统坚决实施各项防止交叉感染、安全操作和个人防护的要求及时评估遇到事故要报告、登记、处理。2006-3-7淮安当前第125页\共有145页\编于星期六\10点

预防的关键

严格的管理安全的防护措施2006-3-7淮安当前第126页\共有145页\编于星期六\10点有传染性的体液包括血液精液阴道分泌物脑脊液羊水胸水,腹水心包液滑膜液一切有可见的血液污染的体液2006-3-7淮安当前第127页\共有145页\编于星期六\10点职业性HIV感染的危险危险性是存在的。实际感染艾滋病毒的机率是很低的。经皮暴露:0.33%(95%可信限0.2%-0.5%)粘膜暴露:0.09%(95%可信限0.006%-0.5%)2006-3-7淮安当前第128页\共有145页\编于星期六\10点导致感染发生的因素接触血液量:①伤口的深度②器械曾放入病人的血管，器械上有可见的病人血液③针头刺破了静脉或动脉HIV的滴度高:病毒载量高.如晚期病人;HIV培养物;窗口期的感染者细胞免疫功能:暴露而未感染的人有HIV特异的细胞毒性T细胞（CTL）反应2006-3-7淮安当前第129页\共有145页\编于星期六\10点HIV暴露后的紧急处理紧急局部处理

安全事故报告和随访

-向所在单位领导和专家报告-向地区性HIV安全药物储备点报告和确定暴露后药物预防（PEP）-如要服药则需在24小时内完成，越早越好。-暴露者血液检测：0,6周,12周,6月,12月评估建立安全事故登记和报告制度2006-3-7淮安当前第130页\共有145页\编于星期六\10点紧急局部处理用肥皂和水清洗沾污的皮肤，如有伤口，应轻轻挤压，尽可能挤出损伤处的血液，用肥皂水或清水冲洗。

用生理盐水冲洗粘膜，避免揉擦眼睛。连续冲洗至少十分钟。受伤部位的消毒：伤口应用消毒液（如70%酒精，0.2-0.5%过氧乙酸，0.5%碘伏等）浸泡或涂抹消毒，并包扎伤口。被暴露的粘膜，应用生理盐水或清水冲洗干净。2006-3-7淮安当前第131页\共有145页\编于星期六\10点安全事故的报告、检测和保密1．重大事故：

事故发生单位及时与有关艾滋病职业暴露安全药品储备库（点）报告，储备库（点）负责人联系当地有关专家根据情况共同进行风险的评估，确定用药的必要性、预防药物和用药程序，并将处理情况向主管行政部门报告。并抽血检测被暴露者的艾滋病病毒抗体（包括做快速试），该血清留样备用。如果暴露者以前已有艾滋病病毒抗体的化验结果，则应加以记录。暴露后一年内要定期检测抗体，即分别在暴露后6周、12周、6个月、12个月检测。2006-3-7淮安当前第132页\共有145页\编于星期六\10点

2．小型事故可在紧急处理后立即将事故