自身抗体的实验室检测和临床意义

自身抗体的实验室检测和临床意义第一页，共五十二页，编辑于2023年，星期二自身抗体的实验室检测

及临床意义

北京友谊医院风湿科宋淑菊

第二页，共五十二页，编辑于2023年，星期二主要内容自身抗体的概念自身抗体的分类自身抗体的命名自身抗体的检测方法常见的自身抗体第三页，共五十二页，编辑于2023年，星期二自身抗体的概念各种原因造成的机体B细胞产生的针对自身组织成分的抗体，称为自身抗体（autoantibodies）。自身抗体可以是生理性的，如针对衰老或死亡的自体细胞，机体产生少量的自身抗体，以便被脾、肝及单核吞噬细胞系统的巨噬细胞吞噬，维持机体内环境的生理稳定；自身抗体也可以是病理性的，引起自身免疫病。第四页，共五十二页，编辑于2023年，星期二自身抗体的分类按照自身抗原在体内分布的不同可分为：器官/组织特异性自身抗体非器官/组织特异性自身抗体按照检测自身抗体所用的基质不同可分为：细胞抗体（以游离的细胞为实验基质）细胞非特异性自身抗体，如抗核抗体细胞特异性自身抗体，如ANCA、抗血小板抗体、抗红细胞抗体组织抗体（以动物组织切片为实验基质）第五页，共五十二页，编辑于2023年，星期二自身抗体的命名以首先被检测到该抗体的患者名字的缩写命名：如抗Sm、抗Ro、抗La抗体以相关疾病的名字的缩写命名：如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B抗体以抗原的化学性质进行分类命名：如抗DNA、抗RNP抗体以抗原的部位进行命名：如抗板层素抗体、抗核膜抗体。第六页，共五十二页，编辑于2023年，星期二自身抗体的检测方法对流免疫电泳、免疫双扩散免疫荧光检测法免疫印记法酶联免疫吸附检测法（ELISA）放射性核素法酶免疫斑点技术免疫沉淀法第七页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗核抗体(ANA)

抗dsDNA抗体抗dsDNA抗体抗Sm抗体抗RNP抗体抗SSA抗体抗SSB抗体间接免疫荧光方法金标法免疫双扩散法ANA(anti-nuclearantibodies)第八页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗Sm抗体抗RNP抗体抗SSA抗体抗SSB抗体抗Scl-70抗体抗Jo-1抗体抗核糖体抗体免疫印记法ENA(extractablenuclearantigen)第九页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗核抗体(ANA)抗平滑肌抗体(SMA)抗线粒体抗体(AMA)间接免疫荧光法

自身抗体第十页，共五十二页，编辑于2023年，星期二病人血清(一抗)玻片二抗荧光抗体荧光显微镜下阅片ANA－－Hep-2细胞dsDAN抗体－－短膜虫SMA－－大鼠胃组织AMA－－大鼠肾组织间接免疫荧光法底物第十一页，共五十二页，编辑于2023年，星期二病人血清金标记的抗体dsDNA抗原阴性阳性金标法第十二页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗原1:41:161:321:64病人血清标准抗体免疫双扩散琼脂板第十三页，共五十二页，编辑于2023年，星期二不同分子量的抗原病人血清酶标抗体显色剂判断结果免疫印记法第十四页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗Sm抗体13.5,28,29KD抗RNP抗体22,32,70KD抗SSA抗体52KD抗SSB抗体45,47KD抗Scl-70抗体68-70KD抗Jo-1抗体55KD抗核糖体抗体15,16.5,38KD第十五页，共五十二页，编辑于2023年，星期二间接免疫荧光法细胞核阳性核仁阳性细胞浆阳性分裂期细胞阳性第十六页，共五十二页，编辑于2023年，星期二细胞核阳性细胞核均质型（Homogeneous）：抗dsDNA、组蛋白抗体、核小体抗体细胞核周边型（Membranous）：板层素抗体细胞核颗粒型（Speckled）：粗颗粒：抗Sm、RNP抗体细颗粒：抗SSA、SSB抗体第十七页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗dsDNA抗体荧光模式：绿蝇短膜虫：动基体均质的或边缘亮度增强的荧光。Hep-2细胞：细胞核的均质型荧光。第十八页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗dsDNA抗体自身抗原：位于DNA脱氧核糖磷酸框架上。临床意义：对系统性红斑狼疮（SLE）特异性高。抗体滴度与疾病活动性存在相关性，因此抗体滴度的检测可为监控治疗提供有用的依据。第十九页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗RNP/Sm抗体荧光模式：Hep-2片：细胞核粗颗粒，核仁阴性。肝组织切片：同上。荧光法不能区分抗RNP和抗体Sm。第二十页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗RNP/Sm抗体自身抗原：抗原RNP和Sm属于一组小核糖核蛋白（snRNP），由低分子量的RNA和多种蛋白质组成，RNA中尿苷（U-RNA）含量较高。临床意义：高滴度的抗RNP抗体为混合结缔组织病（MCTD）的特征，发生率为95~100%。也可出现于SLE，但总是与抗Sm抗体同时出现。抗Sm抗体对SLE具有高度特异性，发生率为20~40%。第二十一页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗SSA／SSB抗体荧光模式Hep-2片：细胞核呈细颗粒荧光，核仁不发光。肝组织片：细颗粒荧光。第二十二页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗SSA／SSB抗体自身抗原：SSA抗原是一个小核糖核蛋白，由一个RNA分子和两种不同的蛋白质组成。蛋白质的分子量为52KD和60KD。抗体直接针对蛋白质的抗原决定簇。SSB抗原是分子量为48kD的磷酸化蛋白。临床意义；最常见于干燥综合征（SS）,也见于SLE、原发性胆汁性肝硬化（PBC），偶见于慢活肝。抗SSA抗体在新生儿红斑狼疮的发生率几乎为100%。第二十三页，共五十二页，编辑于2023年，星期二核仁阳性(Nucleolar)核仁荧光增强，核浆均质型---Scl-70抗体。核仁均质型---PM-Scl及其他抗原抗体。核仁细颗粒型---原纤维蛋白抗体。核仁粗颗粒型---RNA多聚酶-1抗体。第二十四页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗Scl-70抗体荧光模式：Hep-2片：细胞核几乎均质的荧光，核仁荧光加强而且也为均质型，胞浆无荧光。肝组织片；细胞核颗粒或均质型荧光，常见到细胞核荧光。第二十五页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗Scl-70抗体自身抗原：为DNA拓扑异构酶1，分子量为100KD。在DNA双链的复制和转录中起作用。临床意义：25~70%的系统性硬化症（PSS）弥漫型患者阳性，局限型硬皮病患者阴性。第二十六页，共五十二页，编辑于2023年，星期二细胞浆阳性胞浆均质型---抗核糖体抗体细颗粒---抗Jo-1抗体

胞浆颗粒型粗颗粒---AMA抗体滴状点状---溶酶体抗体核周颗粒--高尔基体抗体胞浆纤维型细纤维---波形蛋白抗体环状纤维---原肌球蛋白抗体针状纤维---肌动蛋白抗体第二十七页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗核糖体抗体荧光模式：Hep-2：胞浆细颗粒到均质状、非常致密的荧光。肝组织片：岛状荧光。临床意义：SLE的特异性抗体，与精神症状有关。第二十八页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗Jo-1抗体荧光模式：Hep-2：胞浆颗粒到细块状荧光。肝组织片：胞浆中弱荧光。自身抗原：组氨酰tRNA合成酶。临床意义：见于PM，发生率25~35%。第二十九页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗线粒体抗体荧光模式：Hep-2：胞浆内粗的颗粒型荧光。大鼠肾组织切片：肾小管明显荧光，肾小球荧光较弱。第三十页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗线粒体抗体自身抗原：位于真核细胞线粒体膜的内面。线粒体自身抗原为2-氧酸脱氢酶复合体的亚单位，为一组自身抗原，其中与PBC有关的包括：（1）丙酮酸脱氢酶复合体（PDC）（2）支链2-氧酸脱氢酶复合体（BCOADC）（3）a-酮戊二酸脱氢酶复合体（OGDC）第三十一页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗线粒体抗体临床意义：AMA-M2对PBC具有诊断意义。AMA亚型与疾病的相关性：AMA-1：梅毒、干燥综合征AMA-2：PBCAMA-3：药物性红斑狼疮AMA-4：PBC与AIH重叠AMA-5：SLE、自身免疫性溶血性贫血AMA-6：异烟肼引起的药物性肝炎AMA-7：AIHAMA-8：AIH、闭塞性血栓性血管炎AMA-9：药物性肝炎AMA-10：SLE第三十二页，共五十二页，编辑于2023年，星期二分裂期细胞阳性染色体阳性---染色体相关抗体，相关疾病？纺锤体纤维阳性---纺锤体纤维抗体，如燕麦细胞型支气管肺癌中间体阳性---中间体抗体，相关疾病？细胞两极阳性---中心粒抗体，相关疾病？着丝点阳性---抗着丝点抗体第三十三页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗着丝点抗体(ACA)荧光模式：Hep-2：细胞核细的、相同大小的颗粒荧光，分裂期颗粒荧光带状位于细胞中间。肝组织片：分布于细胞核的10~20个颗粒，荧光弱，易被忽略。第三十四页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗着丝点抗体自身抗原：着丝粒中的三种不同的蛋白质：着丝点蛋白A、B、C，主要抗原为着丝点蛋白B。临床意义：对进行性系统性硬化症亚型（CREST综合征）有诊断意义。阳性率80~95%。还可见于PBC、SS等。第三十五页，共五十二页，编辑于2023年，星期二器官/组织特异性自身抗体抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）抗平滑肌抗体抗角蛋白抗体抗肝肾微粒体抗体抗肝细胞膜抗原抗体抗可溶性肝抗原抗体抗肝特异性蛋白抗体第三十六页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗中性粒细胞胞浆抗体（胞浆型）cANCA荧光模式：猴肝：肝血窦区粒细胞强荧光，而肝细胞阴性。甲醛固定的中性粒细胞：胞浆内粗大到细的荧光颗粒。第三十七页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗中性粒细胞胞浆抗体（胞浆型）自身抗原：为丝氨酸蛋白酶-蛋白酶3（PR3）。该靶抗原为可溶性蛋白，存在于正常中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒中。临床意义：cANCA可见于多种系统性血管炎。主要见于Wengener’s肉芽肿，约占ANCA阳性率的80~95%。cANCA被认为是活动性Wengener’s肉芽肿和微多动脉炎的特异和敏感的标志性抗体。还见于Churg-Strauss综合征。第三十八页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗中性粒细胞胞浆抗体（核周型）pANCA荧光模式：乙醇固定的中性粒细胞：细胞核周围平滑的带状荧光，细胞核阴性。猴肝：肝血窦区粒细胞强荧光，而肝细胞阴性。第三十九页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗中性粒细胞胞浆抗体（核周型）自身抗原：主要抗原为髓过氧化物酶（MPO），其他抗原还有白细胞弹性蛋白酶，组织蛋白酶G、溶菌酶及乳铁蛋白等。临床意义：见于多种系统性血管炎。可见于Wengener’s肉芽肿、微多动脉炎、Churg-Strauss综合征、炎性肠病、自免肝、系统性风湿病（RA、SLE、SS、PM/DM）。第四十页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗平滑肌抗体（SMA）荧光模式：大鼠胃组织，呈现肌膜、黏膜肌层和肌膜腺体间收缩纤维的明显细胞浆荧光。大鼠肾组织，肾小管细胞内原纤维、肾小球膜细胞及血管肌层的荧光。第四十一页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗平滑肌抗体（SMA）自身抗原：主要的靶抗原为肌动蛋白，肌动蛋白可以单体（G-肌动蛋白）或聚合体（F-肌动蛋白）形式存在于微丝中，F-肌动蛋白自身抗原与自免肝关系密切，而G-肌动蛋白自身抗原则与酒精性肝硬化有关。临床意义：见于自身免疫性肝炎、PBC、酒精性肝硬化。第四十二页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗角蛋白抗体（AKA）荧光模式：大鼠食管，仅限于上皮角质层的较强的线性分层的均质荧光。第四十三页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗角蛋白抗体（AKA）自身抗原：丝聚蛋白（filaggrin）为AKA的靶抗原。临床意义：见于RA，阳性率36~59%，特异性95~99%。还是一个潜在的预后标志，高抗体滴度可能预示着较严重的RA类型。第四十四页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗肝肾微粒体抗体（LKM）有三种荧光模式：LKM-1：肝细胞胞浆明显荧光，呈细颗粒到均质状，肾脏近近端肾小管有荧光。LKM-2：门静脉周围的肝组织荧光比其他部位强，肾脏近近端肾小管有荧光。LKM-3：肝和肾均为阴性，灵长类睾丸间质细胞荧光明显。第四十五页，共五十二页，编辑于2023年，星期二抗肝肾微粒体抗体（LKM）自身抗原：LKM-1：细胞色素P450ⅡD6，为50KD蛋白。LKM-2：细胞色素P450同工酶，药物替尼酸的结合部位LKM-3：UDP葡萄糖醛酸基转移酶，为55KD蛋白。临床意义：自免肝按血清学分型可